如何改进动物细胞原代培养技术，来减少微生物的污染？
建议：处死小鼠后, 用70%乙醇好好清洗和消毒， 去掉最上层细胞,取下层细胞.（也就是取一点点内部点的组织）
原代细胞产品专家齐氏生物提醒，原代细胞培养注意事项，供参考：
1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。
2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。
3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。
贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。
4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。
1、从物品、用品消毒灭菌着手
细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时，在无菌过滤操作中，随着滤过体积的增大，滤膜破损的可能性增加，故应选择最后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作：75%的酒精搽拭培养箱后，使用可移动的紫外灯至少消毒 30min，加入高压灭菌过的超纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制300ml的饱和硫酸铜加3L灭菌超纯水混合成硫酸铜溶液加入水槽中。
2、添加抗生素
各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性，且对细胞本身也有一定影响，因此为避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统中的抗生素，或尽可能不用抗生素处理。
3、从操作者做起
（1）进无菌室前要彻底洗手，按规定穿隔离衣。开始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。
（2）操作者动作要轻，安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意，金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火；烧过的器械要冷却后才能使用；已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，吸管再用时会将其带到培养液中；胶塞、橡皮乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞，同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。
（3）操作时尽量不要谈话，咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。
（4）使用培养液前不宜过早开瓶，开瓶后的培养液应保持斜位，避免直立，以防止下落细菌的污染。不再使用的培养液应立即封闭瓶口，培养的细胞在处理之前勿过早暴露在空气中。
（5）操作完毕后应整理好工作台面，用消毒水浸泡的纱布擦拭台面。
（6） 吸取培养液、细胞悬液时，应专管专用，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去，以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉污染。
4、防止细胞交叉污染
所有从别处转来的或是自己所建的细胞系都要早期留有的充足的冻存储备，一旦怀疑发生交叉污染，可做细胞遗传学方面的鉴定，如发现原有的细胞遗传物发生改变，可以复苏早期冻存的细胞使用。重要细胞系（株）的传代工作应由两人独立进行。
5、无菌室的彻底消毒
1） 新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室。使用前应稀释即配即用。新洁尔灭和酒精相比，最大的优点是便宜，因为新洁尔灭500ml只需5元，而且可以稀释50倍用，而同样量的酒精价格可能是新洁尔灭的几十倍。
2）甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。甲醛价廉，熏蒸消毒时不损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。
其主要用法为：
a）熏蒸消毒：每立方米空间甲醛用量为10~15毫升，熏蒸消毒时应密闭门窗封闭至少4h以上。高锰酸钾加40%甲醛（1:1）混合后放入一开发容器中，立即可见白色甲醛烟雾。消毒后可放入25%氨水蒸发中和刺激气味。氨水用量为所用甲醛水溶液的一半，时间为30分钟。甲醛气体毒性非常强，所以操作时一定需带上防毒面具。
b）自然挥发： 将较大量的甲醛水溶液放入一敞开容器中，室内温度保持在18摄氏度以上，同时室内喷水以保持相对湿度在70%以上，经16小时可达到室内消毒的目的
及时检测，及时处理。操作时注意保持无菌环境。
除了小鼠，哺乳动物肠上皮细胞也不错。
答：比如无菌采集样本，除了超净台以外还要配上无菌操作间！穿上隔离服等等！！就看你要求如何了！无菌要求越高，操作要求越高，设备要求也越高拉！ 至于后面那个问题细胞原代组织培养除了胚胎小鼠外还有很多很多啊！理论上只要是细胞都可以原代培养的哦。只是胚胎小鼠比较容易获得，而且分化程度低容易培养罢了，...
答：降低动物细胞培养的剪切力损伤可以这样做：1、必须有足够的营养供应，而绝对不可有有害的物质，包括极微量的有害离子的掺入，为此必须注意器材的清洗和配液用水的质量。2、保证有适量的氧气供应。3、需随时清除细胞代谢中产生的有害产物。4、有良好的适于其生存的外界环境，包括温度、pH、渗透压和离子...
答：细胞老化建议解决方法(1)缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。(2)分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。(3)注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶(4)使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可)(5)重新配置消化液或培养液 培养细胞生长...
答：（2）操作者动作要轻，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，预防是关键，对各种微生物的作用也不同；胶塞、细胞悬液时。也可配制300ml的饱和硫酸铜加3L灭菌超纯水混合成硫酸铜溶液加入水槽中，可做细胞遗传学方面的鉴定。重要细胞系（株）的传代工作应由两人独立进行，联合应用...
答：首先，要确保无菌操作；其次，要保证组织的状态，取新鲜组织，不能放置太久，操作过程中胰酶和胶原酶作用时间要适当；三要保证细胞纯度，分离后的细胞要进行纯化再培养；四是培养基要新鲜，尽量采用进口血清，血清浓度和培养基PH要适当。
答：将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、...
答：首先，选择适当的组织样本是细胞原代培养的关键。通常，选取健康、无病变的组织，并确保样本在采集后尽快进行处理，以保持细胞的活性。样本可以是动物、人类或其他生物的组织，具体取决于实验需求。其次，将采集的组织样本进行消化处理，以分解细胞间的连接并释放单个细胞。常用的消化酶包括胰蛋白酶、胶原蛋白...
答：此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外，原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大以后，科学家接着进行传代培养，即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过一定...
答：首先外植体 用具都要严格依照实验操作要求杀毒灭菌。实验超净工作台先开半个小时以上，还要用酒精消毒擦拭工作台面。镊子 手术刀都要用酒精灯烧炙杀菌，禁止手过多的在已消毒的器皿上空晃动，禁止手接触已消毒器具。把外植体植入培养基里的时候，尽量快，不能让镊子接触瓶口和瓶内壁，也不能接触到培养基。
答：原代动物细胞培养：1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有...
