请问我这个实时荧光定量PCR融解曲线为什么是从负值开始的？结果可用吗？
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-09
怎么理解荧光定量pcr的溶解曲线
1)如果之前做实验的时候，仪器没有出现过这种情况，有可能是仪器出现错误，建议重启一下，或者改软件需要重新校准一下。
2)从这个结果来看，引物应该是可以用的，主峰也只有一个，特异性还是有的，不过还要参考一下扩增曲线，Ct值如果在35个循环以内，应该是没有问题的。
抱歉最近上百度不多，刚刚看到。
熔解曲线负值和正值本身的含义是双链解旋的速率，除此以外没有特别的含义。
你的结果有明显的主峰，所以从特异性上来看是没有问题的，所以溶解曲线的结果是没有问题的。
但是同时你还需要看一下其他的曲线，综合判断结果。
请问我这个实时荧光定量PCR融解曲线为什么是从负值开始的?结果可用吗...
答：2)从这个结果来看，引物应该是可以用的，主峰也只有一个，特异性还是有的，不过还要参考一下扩增曲线，Ct值如果在35个循环以内，应该是没有问题的。
怎么理解荧光定量pcr的溶解曲线
答：荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和Syber Green结合。一般每加温一度，读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧...
谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用
答：这个用于Syber Green实时PCR。而使用探针的不需要。因为Syber Green是非特异性结合，所以如果有非特异性的序列被扩增，也会同样产生信号。在设计引物的时候，可以计算出被扩增序列的Tm。PCR反应完成以后，开始进行解离曲线的测量。一般是对反应产物逐步加温，每增加一度，测信号一次。PCR产物会在温度达到TM...
StepOnePlus实时荧光定量PCR仪怎么设置融解曲线
答：打开软件-set up-advaced setup-左手setup中第一行experiment properties中有一项是which reagents do you want to use to detect the target sequence?,当你选择 SYBR green reagents时，下面会出来一行选项 include Melt curve,你把这项选中，就会做完实验以后用默认程序给你跑融解曲线了，如果你还像...
实时荧光定量PCR,溶解曲线怎么判断是否为目的产物
答：溶解曲线的单峰明显，横坐标在80度以上，一般就是PCR产物
谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用
答：出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因（也有可能是从加完反应液到上机开始PCR这之间的时间过长）所致；基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。 详细请见我的回答：
荧光定量pcr中溶解曲线的温度大概是多少
答：一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线,一般设定先94度几分钟,然后骤冷到65度（假定65度为退伙温度）.在65度时,pcr产物是以双链的形式存在的。因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的,所以这个时候检测到很强的光信号,随着温度升高,双链逐渐打开,荧光信号逐渐减弱。
求助,荧光定量PCR扩增曲线和溶解曲线
答：实时PCR产物的Tm值大小一般会在80deg;上下，所以溶解曲线不必从40deg;开始，可以从65deg;开始进行溶解曲线绘制，另外在产物之前出现的小峰，同时也在阴性对照中出现了，应该是引物二聚体或者是非特异的扩增。
荧光定量PCR 溶解曲线与什么有关
答：荧光定量的溶解曲线主要是看是否存在非特异性扩增，如引物二聚体等，当只有单一峰时且值在退火温度说明特异性扩增，结果可用
RT-PCR融解曲线详解
答：融解曲线是荧光定量PCR仪出现后为了考察染料法结果的特异性产生的.大家使用荧光定量PCR的目的（也是荧光定量PCR的宣称优点）有快速、准确及无污染,其中快速的前提之一是不用跑电泳就可以通过扩增曲线考察初始拷贝数的量；准确是因为电泳是终产物,而通过扩增曲线我们知道,扩增最后达到平台期,这时不能真实反映...
荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和Syber Green结合。
一般每加温一度，读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧光信号的变化，开始加热，信号变化不大，所以几乎是平的。
接近Tm时，突然变化加大，所以出现峰值。再升温，产物全部解离，就又是一条直线了。如果有非特异性产物，在加热过程中就会出现一些比较矮，宽的峰。
扩展资料：
荧光定量pcr通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测。
根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号标准偏差的10倍。
熔解曲线分析可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。熔解温度上有一特征峰（Tm，DNA双链解链50%的温度），用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，因为它们在不同的温度熔解线，随着反应中双链DNA变性。
参考资料来源：百度百科-荧光定量PCR
参考资料来源：百度百科-溶解曲线
在设置反应程序时，在最后加一步
看这个结果有几个猜想：1)如果之前做实验的时候，仪器没有出现过这种情况，有可能是仪器出现错误，建议重启一下，或者改软件需要重新校准一下。
2)从这个结果来看，引物应该是可以用的，主峰也只有一个，特异性还是有的，不过还要参考一下扩增曲线，Ct值如果在35个循环以内，应该是没有问题的。
抱歉最近上百度不多，刚刚看到。
熔解曲线负值和正值本身的含义是双链解旋的速率，除此以外没有特别的含义。
你的结果有明显的主峰，所以从特异性上来看是没有问题的，所以溶解曲线的结果是没有问题的。
但是同时你还需要看一下其他的曲线，综合判断结果。
答：2)从这个结果来看，引物应该是可以用的，主峰也只有一个，特异性还是有的，不过还要参考一下扩增曲线，Ct值如果在35个循环以内，应该是没有问题的。
答：荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和Syber Green结合。一般每加温一度，读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧...
答：这个用于Syber Green实时PCR。而使用探针的不需要。因为Syber Green是非特异性结合，所以如果有非特异性的序列被扩增，也会同样产生信号。在设计引物的时候，可以计算出被扩增序列的Tm。PCR反应完成以后，开始进行解离曲线的测量。一般是对反应产物逐步加温，每增加一度，测信号一次。PCR产物会在温度达到TM...
答：打开软件-set up-advaced setup-左手setup中第一行experiment properties中有一项是which reagents do you want to use to detect the target sequence?,当你选择 SYBR green reagents时，下面会出来一行选项 include Melt curve,你把这项选中，就会做完实验以后用默认程序给你跑融解曲线了，如果你还像...
答：溶解曲线的单峰明显，横坐标在80度以上，一般就是PCR产物
答：出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因（也有可能是从加完反应液到上机开始PCR这之间的时间过长）所致；基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。 详细请见我的回答：
答：一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线,一般设定先94度几分钟,然后骤冷到65度（假定65度为退伙温度）.在65度时,pcr产物是以双链的形式存在的。因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的,所以这个时候检测到很强的光信号,随着温度升高,双链逐渐打开,荧光信号逐渐减弱。
答：实时PCR产物的Tm值大小一般会在80deg;上下，所以溶解曲线不必从40deg;开始，可以从65deg;开始进行溶解曲线绘制，另外在产物之前出现的小峰，同时也在阴性对照中出现了，应该是引物二聚体或者是非特异的扩增。
答：荧光定量的溶解曲线主要是看是否存在非特异性扩增，如引物二聚体等，当只有单一峰时且值在退火温度说明特异性扩增，结果可用
答：融解曲线是荧光定量PCR仪出现后为了考察染料法结果的特异性产生的.大家使用荧光定量PCR的目的（也是荧光定量PCR的宣称优点）有快速、准确及无污染,其中快速的前提之一是不用跑电泳就可以通过扩增曲线考察初始拷贝数的量；准确是因为电泳是终产物,而通过扩增曲线我们知道,扩增最后达到平台期,这时不能真实反映...
