RT-PCR融解曲线详解
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-23
融解曲线是荧光定量PCR仪出现后为了考察染料法结果的特异性产生的.大家使用荧光定量PCR的目的（也是荧光定量PCR的宣称优点）有快速、准确及无污染,其中快速的前提之一是不用跑电泳就可以通过扩增曲线考察初始拷贝数的量；准确是因为电泳是终产物,而通过扩增曲线我们知道,扩增最后达到平台期,这时不能真实反映未知样品的初始浓度,通过实验证明,扩增曲线的指数扩增期可以进行定量（Ct值）；无污染是电泳需要开盖操作,而荧光定量PCR通过扩增曲线就不需要跑电泳就可以定量了.融解曲线是由于染料法的特异性差,所以通过融解曲线考察扩增产物是否是目标产物,与电泳的其中的一个目的相同,但融解曲线毕竟是数学推导,并且结果中包含了仪器的误差（荧光信号中有系统误差）,不如电泳能反映更多的实际的信息.所以实验时,如果采用染料法,融解曲线较好的话,如果实验条件不允许,可以不做电泳了,但如果融解曲线出现问题,借助电泳分析是一个很好的手段（有时扩增曲线显示没有扩增,但有电泳结果,可能的原因是设置问题或者染料、探针本省或者量的问题）,个人认为比融解曲线更可靠.如果发文章,有融解曲线并且有电泳图,就比较完美了.
基础实验重新认识(5)——PCR相关
答：2.RT-PCR 逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。 3.real-time PCR/quantitative PCR 实时荧光定量PCR...
实时荧光定量PCR仪中所谓的HRM技术是什么意思呢RT
答：HRM技术是high-resolution melting analysis即高分辨熔解曲线分析技术，是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR技术，HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变、单核苷酸多态性-SNP、甲基化、HLA配型等...
哪位大侠帮忙翻译一下这段话啊~救急啊~拜谢啦~
答：固线分析也执行为了所有基因能检查RT-PCR产品的特异性和身分。 相对数量目标核糖核酸与一式两份跑的每个样品的对应的标准曲线相比是坚定的。 每个抄本水平根据结构性伸长因素然后正常化了1α (EF1α)的表示价值。 基因表达价值是被集中的中点，并且正常化使用群节目和基因(或基因和样品)然后成群了使用与...
SARS起源于什么病毒(最先在什么动物身上
答：通常是用无核酸酶水简单地替换掉反应中的RNA，则意味着RT-PCR试剂中的一种或多种被扩增产物污染了、互补性。额外的数据点也可以包括在内。若在NAC中可观察到产物，使用如DNAzap#8482。若熔解曲线显示为一系列的峰.1）。为了获取有意义的数据。因此。扩增效率低 扩增效率(Eff)可以通过以下公式进行计算...
PCR怎么分类?
答：逆转录PCR或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是一条RNA链被逆转录成为互补DNA（依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）逆转录），再以此为模板通过PCR进行DNA扩增（脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成），随后每个循环倍增，即通常的PCR。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA...
反转录时候水加多了有影响吗?
答：逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。它是一种以 RNA 为样本，RNA链被逆转录成为互补DNA（cDNA），再以此为模板通过 PCR 进行 DNA 扩增。图源：百度百科 一、RT-PCR的指数扩增 RT-PCR的指数...
定量PCR Taqman探针设计与体系优化
答：通常目的基因PCR产物熔解曲线的峰出现在80～90℃之间,当 熔解曲线在70～80℃ 范围内出现一个 荧光强度较小的峰 时,表明Real-time qPCR反应有 引物二聚体 生成。 此时首先要判断引物二聚体产生的原因,如果在高目的基因拷贝样品中没有出现引物二聚体,而只在低目的基因拷贝样品中存在引物二聚体,此时引物二聚体的...
以下哪些因素会导致pcr扩增产物污染
答：若熔解曲线显示为一系列的峰，则意味着此时很难分辨出特异性及非特异性反应产物。为了获取有意义的数据，这种情况下必须对qRT-PCR进行优化。没有正确地设置基线和阈值线 为了得到精确的Ct值，应当在丰度最高的样品所对应Ct值两个循环之前设置基线。为了使实时荧光定量PCR的数据有意义，应当在指数扩增期...
荧光定量 稀释 需要rna free 水吗
答：5) 在PCR 反应后．采用以下的程序进行熔解曲线分析 温度 温度间隔 时间 检测 72℃~95℃ 0.5℃ 6sec/each On 30℃ 30sec off 5. 定量PCR数据分析 实验外包-实时荧光定量PCR实验流程
与其他分子生物学方法相比,用荧光探针RT-PCR法检测诺如病毒有什么优势...
答：RT-PCR检测食物中NV存在样品病毒量含量低；假阳性率低；检测结果与操作者的技能和经验有直接关系；缩短了操作时间，因此病毒富集浓缩；不适于大规模流行病学调查，产物通过琼脂糖凝胶电泳或斑点印迹杂交鉴定结果，美国疾病预防控制中心建立了生物素-亲和素免疫法，是可广泛应用的检测方法，EM 法观察的灵敏度...
答：2.RT-PCR 逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。 3.real-time PCR/quantitative PCR 实时荧光定量PCR...
答：HRM技术是high-resolution melting analysis即高分辨熔解曲线分析技术，是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR技术，HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变、单核苷酸多态性-SNP、甲基化、HLA配型等...
答：固线分析也执行为了所有基因能检查RT-PCR产品的特异性和身分。 相对数量目标核糖核酸与一式两份跑的每个样品的对应的标准曲线相比是坚定的。 每个抄本水平根据结构性伸长因素然后正常化了1α (EF1α)的表示价值。 基因表达价值是被集中的中点，并且正常化使用群节目和基因(或基因和样品)然后成群了使用与...
答：通常是用无核酸酶水简单地替换掉反应中的RNA，则意味着RT-PCR试剂中的一种或多种被扩增产物污染了、互补性。额外的数据点也可以包括在内。若在NAC中可观察到产物，使用如DNAzap#8482。若熔解曲线显示为一系列的峰.1）。为了获取有意义的数据。因此。扩增效率低 扩增效率(Eff)可以通过以下公式进行计算...
答：逆转录PCR或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是一条RNA链被逆转录成为互补DNA（依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）逆转录），再以此为模板通过PCR进行DNA扩增（脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成），随后每个循环倍增，即通常的PCR。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA...
答：逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。它是一种以 RNA 为样本，RNA链被逆转录成为互补DNA（cDNA），再以此为模板通过 PCR 进行 DNA 扩增。图源：百度百科 一、RT-PCR的指数扩增 RT-PCR的指数...
答：通常目的基因PCR产物熔解曲线的峰出现在80～90℃之间,当 熔解曲线在70～80℃ 范围内出现一个 荧光强度较小的峰 时,表明Real-time qPCR反应有 引物二聚体 生成。 此时首先要判断引物二聚体产生的原因,如果在高目的基因拷贝样品中没有出现引物二聚体,而只在低目的基因拷贝样品中存在引物二聚体,此时引物二聚体的...
答：若熔解曲线显示为一系列的峰，则意味着此时很难分辨出特异性及非特异性反应产物。为了获取有意义的数据，这种情况下必须对qRT-PCR进行优化。没有正确地设置基线和阈值线 为了得到精确的Ct值，应当在丰度最高的样品所对应Ct值两个循环之前设置基线。为了使实时荧光定量PCR的数据有意义，应当在指数扩增期...
答：5) 在PCR 反应后．采用以下的程序进行熔解曲线分析 温度 温度间隔 时间 检测 72℃~95℃ 0.5℃ 6sec/each On 30℃ 30sec off 5. 定量PCR数据分析 实验外包-实时荧光定量PCR实验流程
答：RT-PCR检测食物中NV存在样品病毒量含量低；假阳性率低；检测结果与操作者的技能和经验有直接关系；缩短了操作时间，因此病毒富集浓缩；不适于大规模流行病学调查，产物通过琼脂糖凝胶电泳或斑点印迹杂交鉴定结果，美国疾病预防控制中心建立了生物素-亲和素免疫法，是可广泛应用的检测方法，EM 法观察的灵敏度...
