谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用
荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和SyberGreen分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和SyberGreen结合。
出现怪异的溶解曲线大部分都是机器设置或者反应体系的问题，建议：
1、将扩增产物跑一下电泳，看一下目的条带亮不亮
2、一般定量PCR扩增后目的片段的峰在80~90℃之间，反应条件确认一下设置是否有问题
3、适当增加模板量或者减少引物浓度。
技术原理
将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光；
随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
以上内容参考：百度百科-实时荧光定量PCR
这个用于Syber Green实时PCR。而使用探针的不需要。
因为Syber Green是非特异性结合，所以如果有非特异性的序列被扩增，也会同样产生信号。在设计引物的时候，可以计算出被扩增序列的Tm。PCR反应完成以后，开始进行解离曲线的测量。一般是对反应产物逐步加温，每增加一度，测信号一次。PCR产物会在温度达到TM时发生解离，荧光信号会一下子消失、如果把温度和荧光信号的变化做一个图，就会看到一开始，荧光信号没有变化，是一个平直的线。达到TM附近是，会有一个比较锐利的峰，说明信号的变化很大，继续加热超过TM，这是双链都打开了。所以信号也不会再有变化，所以又是平直的线。
如果产物都是特异性的，就是我上面说的那样。如果有非特异性产物，就会出现不在TM就出现峰值，或者有矮而胖的峰值等等异常情况出现，这样，那个管子的样本就不能用了。
答：荧光定量PCR 实验步骤： ①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA...
答：荧光pcr溶液是就是在进行荧光定量PCR检测中需要使用的诊断试剂。荧光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR，RTFQPCR)是1996年由美国AppliedBiosystems公司推出的一种新定量试验技术。
答：融解曲线~
答：溶解曲线的单峰明显，横坐标在80度以上，一般就是PCR产物
答：随着温度升高，当温度达到Tm值时候，DNA就会变性分成单链的，此时荧光染料不能结合NDA所以检测的荧光型号越来越弱。你说的出现的峰是荧光性号对温度求导后得到的曲线图，出现峰是因为在接近Tm值的位置荧光性号下降的斜率很快导致在对温度求导后出现峰。出现单峰说明没有非特异性的结合和引物二聚体的产生...
答：横坐标是温度，每个温度点一个。一般从60到98度 纵坐标是荧光强度的变化值（不是强度本身）。一开始加热的时候，虽然荧光强度比较强，但是由于双链没有解离，所以荧光强度保持不变。当加热接近于PCR产物Tm时，双链开始解离，荧光强度变小，机器会比较前后2个温度点的荧光强度，然后把2者的差值标在图上...
答：1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；2、一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算；3、引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性；4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时...
答：溶解后的引物-20 ℃下避免反复冻融，可以保存至少半年以上。如果对实验的重复性要求较高，合成的OD值较大，建议将溶解好的引物事先稀释为100 μmol/L的储存液，分装数份保存于-20 ℃冰箱。使用前，将浓溶液稀释成工作液（10 pmol/μl或20 pmol/μl）后进行实验。修饰荧光引物需要避光保存。不会...
答：就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。服务流程1.客户认真写好订单，提供待检基因相关信息；2.签订技术服务合同，支付预付款（30-50%)；3.设计合成定量PCR引物（或客户提供文献引物委托本公司合成）；4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录；5.PCR预实验，主要检测引物的...
答：先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。① 浓度测定 A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。具体计算如下：RNA溶于40 ?
