怎么理解荧光定量pcr的溶解曲线
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-23
荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和Syber
Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和Syber
Green结合。
一般每加温一度，读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧光信号的变化，开始加热，信号变化不大，所以几乎是平的。
接近Tm时，突然变化加大，所以出现峰值。再升温，产物全部解离，就又是一条直线了。如果有非特异性产物，在加热过程中就会出现一些比较矮，宽的峰。
扩展资料：
荧光定量pcr通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测。
根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号标准偏差的10倍。
熔解曲线分析可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。熔解温度上有一特征峰（Tm，DNA双链解链50%的温度），用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，因为它们在不同的温度熔解线，随着反应中双链DNA变性。
参考资料来源：百度百科-荧光定量PCR
参考资料来源：百度百科-溶解曲线
答：荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和Syber Green结合。一般每加温一度，读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧...
答：溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线，类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间），我说的是一般情况，这个跟扩增片段长短有关系。出现其他峰就该考虑是否为引物二...
答：PCR反应完成以后，开始进行解离曲线的测量。一般是对反应产物逐步加温，每增加一度，测信号一次。PCR产物会在温度达到TM时发生解离，荧光信号会一下子消失、如果把温度和荧光信号的变化做一个图，就会看到一开始，荧光信号没有变化，是一个平直的线。达到TM附近是，会有一个比较锐利的峰，说明信号的变化...
答：荧光定量的溶解曲线主要是看是否存在非特异性扩增，如引物二聚体等，当只有单一峰时且值在退火温度说明特异性扩增，结果可用
答：溶解曲线是在正常的PCR反应基础上加一个溶解曲线的反应条件，其中当温度由60℃升至95℃时，PCR仪每隔一定的温度检测一次信号。最后将收集的信号绘制出溶解曲线，然后将溶解曲线一次微分就会得到我们平时看到的峰性图。每一条线代表着某个孔里的反应体系里产物的单一情况，某一条线如果为单峰且在一定合理...
答：2、溶解曲线：（1）溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线；（2）一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间；（3）出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组DNA污染的峰会在90...
答：能够检测纯度和热稳定性。PCR模板物质的纯度可以由溶解曲线中的最低温度(Tm)确定。当温度低于最低温度时模板被完全溶解，这时表明模板物质是纯的。PCR模板物质的热稳定性可以由溶解曲线中的最小温度最大温度和最低温度之间的差异来确定，PCR模板物质越热稳定，曲线越平坦，这样可以确保PCR反应的稳定性。
答：下面从几个方面来解读：1、随着温度的升高，DNA双链断裂；接着温度降低，到达退火温度的时候，DNA双链复性，荧光分子绑定在DNA双链上，所以荧光信号值到达最高点。上面的是反映在扩增曲线上面的。2、接着DNA双链分子由退火温度约60度，继续升温，双链断开，DNA分子溶解。请注意溶解曲线的纵坐标，表示...
答：如果有两个峰甚至多个峰，说明引物不特异，你得到的Ct值是不可信的。还有如果出现峰的温度低，很可能是Dimer，而不是你的目的产物。如果你相同样品各管的溶解曲线都只有一个尖锐的峰，而且不是Dimer，说明你的扩增的产物是稳定正确的，数据可以采用。它只是反映PCR完后，产物的情况，不能得出Ct值。
答：\r\n DNA溶解曲线表示扩增产物的特异性。\r\n曲线横坐标是温度，每个温度点一个。一般从60到98度纵坐标是荧光强度的变化值（不是强度本身）。一开始加热的时候，虽然荧光强度比较强，但是由于双链没有解离，所以荧光强度保持不变。当加热接近于PCR产物Tm时，双链开始解离，荧光强度变小，机器会比...
