mtt法原理和步骤是什么?
kuaidi.ping-jia.net 作者:佚名 更新日期:2024-07-13
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
(1)单细胞悬液接种于96孔培养板;103-104细胞/孔,每孔培养基总量200微升(96孔培养板每孔容积370微升),37℃、5%。
CO2培养箱中培养一段时间(根据实验目的决定培养时间)。
(2)加入2毫克/毫升的MTT液(50微升/孔);继续培养3小时。
(3)吸出孔内培养液后,加入DMSO液(150微升/孔),将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟,使结晶物溶解。
(4)酶标仪检测各孔OD值(检测波长570纳米)。记录结果,绘制。
扩展资料:
MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下,外源性MT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒( Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。
二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在570nm(参比波长630m)波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MT结晶形成的量与活细胞数成正比。
参考资料来源:百度百科-MTT法
答:目前MTT法常用于以下几个方面的研究:1、检测细胞活性:常作为细胞毒性试验的一种方法。2、体外药物敏感实验:该方法简便、经济、快速,重复性好,所需的细胞数较少,没有放射性,目前广泛的用于临床前的抗癌药物的筛选研究。3、一些细胞因子活性的研究。主要实验步骤如下:1)将对数生长期细胞用胰酶消化...
答:(1)预期作用靶标抑制活性的测定。随着农药作用于昆虫的靶标部位、昆虫体内农药的代谢解毒机制渐渐为人们认知,通过检测供试药物对靶标或代谢物质的作用,可以简化生物筛选测定的步骤与时间,这也是生物合理设计农药的重要思路。(2)MTT法。MTT(methylthiazoletrazolium)是一种黄色水溶性四噻唑蓝,活细胞...
答:MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在...
答:我找到一个不一样的方法,不知是否有帮助:MTT法 MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫...
答:MTT主要有两个用途 1.药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定;2.细胞增殖及细胞活性测定。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶标仪在...
答:【答案】:T细胞增殖实验常用3H-TdR掺入法和MTT法。前者是根据3H-TdR能掺入细胞合成的DNA中,细胞增殖水平越高,掺入的3H-TdR越多,细胞培养结束后,用液体闪烁仪测定样品中的放射活性,用于判断细胞的增殖状况。该法灵敏可靠,应用广泛,但需特殊仪器,并有放射性污染。后者是根据细胞增殖时可利用MTT...
答:MTT原理:检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臢(Zā)(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臢(Zā),用酶标仪在490nm波长处(英文说明书写的是570nm)测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶...
答:MTT是甲胎蛋白检测中的一种方法。甲胎蛋白是一种糖蛋白,主要用于肝癌的筛查和诊断。而MTT,即甲基噻吩三嗪,是一种化学试剂,在甲胎蛋白的检测过程中起到关键作用。通过MTT法,可以较为准确地测定血清中的甲胎蛋白含量,从而辅助诊断肝脏疾病,尤其是肝癌。具体来讲,MTT法在甲胎蛋白检测中的应用原理...
答:MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞...
答:MTT溶液的配制方法通常,此法中的MTT浓度为5mg/ml。因此,可以称取MTT0.5克,溶于100ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22m滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不...