在用比色法检测细胞活力实验中可否用其他染料代替MTT

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-08-12
贴壁细胞毒性检测用mtt mts,cck8哪种效果好

齐氏生物细胞生物学产品专家认为CCK8更好些,优点如下:
1)使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂;
2)CCK-8法能快速检测;
3)CCK-8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度;
4)CCK-8法的重复性优于MTT 法;
5)CCK-8法对细胞毒性小;
6)CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。

当然,与MTT相比,CCK8有以下2点不足:
1)与MTT法相 比,CCK8和XTT的价格比较贵。
2)CCK8试剂的颜色为淡红色,与含酚红的培养基颜色接近,不注意的话容易产生漏加或多加。

为更好了解CCK8、MTT、 XTT等检测方法,齐氏生物细胞生物学产品专家制定下表,以供参考:

细胞只能代表部分 不能代表整个机体

我找到一个不一样的方法,不知是否有帮助:

MTT法
MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。MTT法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、细胞增殖测定、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。MTT法的特点是灵敏度高、价格经济实惠。不过,MTT法是有缺陷的,是因为MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使检测时的工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。

CCK-8法(或称WST-8法)细胞活性检测方法简介
CCK-8细胞活性检测试剂中含有WST-8,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。CCK-8法的优点: 1、使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂; 2、CCK-8法能快速检测; 3、CCK-8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度; 4、CCK-8法的重复性优于MTT法; 5、CCK-8法对细胞毒性小; 6、CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。 CCK-8法的缺点: 1、与MTT法相比,CCK-8和XTT的价格比较贵。 2、CCK-8试剂的颜色为淡红色,与含酚红的培养基颜色接近,不注意的话容易产生漏加或多加。

测细胞活力有很多方法,不同条件能用的方法不一样。如MTT、CCK-8,XTT等。MTT毒性较大,但是便宜,通常用于贴壁细胞,吸去后加DMSO溶解,对于悬浮细胞,有用MTT改良法的,需要参考相关文献。悬浮细胞常用CCK-8,CCK-8是可以加到板里,直接测OD的,但是要做对照,去除本底反应的影响,因为CCK-8的灵敏度较高,尤其要注意避光。XTT要现配现用。总体而言,还是用MTT比较多,不知你为何要换其他的,说出原因才能帮你。

WST1试剂盒

不行

  • 在用比色法检测细胞活力实验中可否用其他染料代替MTT
    答:MTT法 MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反...
  • MTT比色法细胞活力检测中对照设置很重要吗?
    答:博凌科为解答:MTT比色法细胞活力检测中最重要的就是背景对照,就是不加细胞的对照。这包括两方面内容,一是指与实验孔相同,对照孔中也加入相同体积的培养基,各做 3-4个复孔,取平均值,主要目的是为了减少培养基中含有的酚红对比色的影响;二是要在对照孔内加入与实验孔相同成分和浓度的药物(特...
  • MTT比色法细胞活力检测实验中有哪些注意事项?
    答:但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT比色法细胞活力检测实验前,掌握每一种细胞的贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定实验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样,才能保证形成酌量的MTT结晶,与细胞数量呈线性关系。 (2)避免血清干扰。用...
  • MTT比色法细胞活力检测染色后,96孔板中的上清弃去后是否要用PBS洗一下...
    答:博凌科为解答:不必洗,MTT与Fomazan的颜色不同,吸光谱也不同,实际上测的是OD570的吸收光,实际MTT的吸光度在此波长很小。Fomazan对细胞是有害的,部分细胞死掉后,Formazan结晶在其周围,如果清洗就丢失了。
  • 没有细胞的培养基为何可以测出活力
    答:没有细胞的培养基使用MTT法可以检测出活力。根据查询相关资料信息,MTT法检测细胞活性是准确的。MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。
  • MTT比色法测细胞活力的步骤
    答:操作步骤 一、接种细胞 1、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞,将细胞收集到含血清的培养基中。2、离心细胞悬液,使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞,计数。3、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml,每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液。4、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液,...
  • 蛋白药物生物学活性检测方法有哪些
    答:活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备 1、青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2O中,抽滤除菌。2、L15基础培养基:1000mlL15培养...
  • 检测细胞增殖的种类以及方法步骤
    答:比色检测在一抗二抗标记后在450nm下读数,所有操作在3小时内结束。而且该试剂盒的灵敏度与市场上其他同类产品相比是最强的。1000个细胞以上水平的检测只需用BrdU预孵育2小时,100个细胞则采用过夜预孵育,即可检测细胞的增殖能力。BrdU法的一个缺点是需要固定和变性等破坏DNA的处理。有些情况下,研究者...
  • CellMax 细胞大课堂1-2 l 细胞增殖检测实验一文扫尽
    答:1. 细胞代谢活性检测MTT、XTT、MTS和CCK8是衡量细胞活力的常用工具,尤其是CCK8,因其低毒性而备受青睐。SRB比色法则以其无孵育时间限制,适用于大规模实验,然而,对于悬浮细胞,操作上稍显繁琐。步骤:细胞取样后,通过TCA固定,洗涤并加入SRB染液,测定其515nm吸光度,最佳OD值范围为0.8-1.2,需...
  • 细胞活力测定常用的简便方法是
    答:活力测定可以和细胞计数合起来进行,但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。 三、MTT法测细胞相对数和相对活力  活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比,也与细胞活力呈正比。 1.  细胞悬液以1 000 rpm...