细胞培养瓶培养的癌细胞多少天凋亡
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-06-28
肿瘤细胞培养多长时间换一次培养基，即传
肿瘤细胞组织培养占核位置首先癌细胞比较容易培养细胞前建立细胞系癌细胞系另外肿瘤类威胁疾病肿瘤细胞培养研究癌变机理、抗癌药检测、癌物极其重要手段肿瘤细胞培养阐明解决癌症起着估量作用
、组织培养肿瘤细胞物特性
肿瘤细胞与体内细胞相比论体内或体外形态、增值、遗传性状等面都显著同体内肿瘤细胞体外培养肿瘤细胞其差异较并非完全相同培养肿瘤细胞具突特点：
（－）形态性状
培养癌细胞光显微镜特异形态数肿瘤细胞镜观察比二倍体细胞清晰核膜、核仁轮廓明显核糖体颗粒丰富电镜观察癌细胞表面微绒毛细密微丝走行细胞规则能与肿瘤细胞具定向运锚着依赖性关
（二）增殖
肿瘤细胞体内具受控增殖性体外培养仍二倍体细胞体外培养加血清能增殖血清含细胞增殖癌细胞低血清（2％～5％）仍能已证明肿瘤细胞自泌或内泌性产促增殖能力细胞发转化现能低血清培养基现象已检测细胞恶变指标癌细胞或培养发恶性转化单细胞培养形集落（克隆）能力比细胞强另外癌细胞增殖数量增扩展接触抑制消除细胞能相互重叠向三维空间发展形堆积物
（三）永性
永性称死性体外培养表现细胞限传代凋亡（Apoptosis）体外培养肿瘤细胞系或细胞株都表现种性状体内肿瘤细胞否尚直接证明恶性肿瘤终杀死宿主并同归于尽难证明性状存体外肿癌细胞永性否能反证体内同尚难肯定近建立细胞系或株程说明永性体内肿瘤细胞所固肿瘤细胞应易于培养事实数肿瘤细胞初代培养并容易增殖并旺盛；经纯化单化瘤细胞增殖若干代便现类似二倍体细胞培养停滞期阶段才获永性顺利传代说明体外肿瘤细胞永性能体外培养获些具永性恶性性细胞系NIH3T3、Rat－1、10T1/2等细胞证明永性恶性（包括浸润性）两种性状受同基调控却相关性能永性细胞恶变阶段至少体外
（四）浸润性
浸润性肿瘤细胞扩张性增殖行培养癌细胞仍持种性状与组织混合培养能浸润入其组织细胞并穿透工隔膜能力
（五）异质性
所肿瘤都由增殖能力、遗传性、起源、周期状态等性状同细胞组异质性构同肿瘤内细胞力差别瘤组织；处于瘤体周边区细胞获血液供应增殖旺盛区细胞衰退化处于周期阻滞状态些呈跃增殖状态细胞称干细胞（Stem Cells）、些干细胞才支持肿瘤肿瘤干细胞培养易于增殖；干细胞离培养称干细胞培养
（六）细胞遗传
数肿瘤细胞遗传改变失二倍体核型、呈异倍体或倍体等肿瘤细胞群由细胞群组干细胞系数亚系并断进行着适应性演变
（七）其
肿瘤细胞体外易原能由于：①依赖性：肿瘤细胞虽较强克隆力仍定群体性或与其细胞相依存关系肿瘤细胞与肿瘤细胞相互依存二肿瘤细胞与基质纤维细胞依赖体外散培养排除纤维细胞同消除或减弱些依存关系能影响癌细胞增殖性；②肿瘤细胞自泌散培养稀释达肿瘤需求降低肿瘤细胞增殖力；③并非所肿瘤细胞都强力Life Span干细胞才强增殖能力些细胞数量少；④离体培养肿瘤细胞能需求与体内相似特殊存条件
二、培养
肿瘤细胞培养功关键于：取材、纤维细胞排除、选用适宜培养液培养底物等几面具体培养面肿瘤细胞培养与组织细胞培养并原则差别初代培养应用组织块消化培养均 （）要点
1．取材：
肿瘤细胞自外科手术或检瘤组织取材部位非重要体积较肿瘤组织退变或坏死区取材尽量避免用退变组织要挑选力较部位癌性转移淋巴结或胸腹水培养材料取材宜尽快进行培养故能立即培养贮存于4℃宜栽24
2．培养基：
肿瘤细胞培养基要求细胞严格般用 RPMIl640、 DMEM、Mc-Coy5A等培养基等皆用于肿瘤细胞培养肿瘤细胞血清需求比细胞低细胞培养加血清能肿瘤细胞低血清培养基能肿瘤细胞培养环境适应性较肿瘤细胞自泌（Autocrine）性产促物质故并说明肿瘤细胞完全需要些按同细胞需要同；肿瘤细胞与细胞间、肿瘤细胞与肿瘤细胞间需求都存着差异数肿瘤细胞培养仍需要需特异性〔乳腺癌细胞等）总培养肿瘤细胞仍需加血清相关培养更易功
3．纤维细胞排除：
纤维细胞与肿瘤细胞同混杂致难纯化肿瘤细胞且纤维细胞比肿瘤细胞快终能压制肿瘤细胞排除纤维细胞肿瘤细胞培养关键排除纤维细胞种（表2－1）
（二）纤维细胞排除
1．机械刮除：
用锈钢丝末端插橡胶刮（用胶塞剪三角形插锈钢丝）、或裹少许脱脂棉制装入试管高压灭菌备用（用特制电热烧灼器刮除）刮除程序：
（1）标记：镜观察用脱色笔培养瓶皿背面圈肿瘤细胞部位；
（2）刮除：弃掉培养液菌胶刮伸入瓶皿肉眼或显微镜窥视刮除标记空间；
（3）用Hanks液冲洗两洗除刮掉细胞；
（4）注入培养液继续培养发现仍纤维细胞残留重复刮除至完全除掉止
2．反复贴壁：
根据肿瘤细胞比纤维细胞贴壁速度慢特点并结合使用加血清营养液含两类细胞细胞悬液反复贴壁使两类细胞相互离操作与传代相同
（1）待细胞达定数量倒旧培养液用胰酶消化Hanks 冲洗2加入含血清培养液吹打制细胞悬液；
（2）取编号A、B、C三培养瓶；首先悬液接种入A培养瓶置温箱静止培养5～20钟轻轻倾斜培养瓶让液体集瓶角慢慢吸全部培养液再接种入B培养瓶；向A瓶补充少许完全培养液置温箱继续培养；
（4）培养B瓶细胞5～20钟接处理A培养液注入C培养瓶；再向B瓶补加完全培养基
三瓶内都含培养液均温箱继续培养操作功观察见A瓶主要纤维细胞B瓶两类细胞相杂C瓶能主要癌细胞必要反复处理直至癌细胞纯化止
3．消化排除：
曾用于乳癌细胞培养具体程序：
（1）先用0.5%胰蛋白酶0.02％EDTA（1：1）混合液漂洗培养细胞再换新混合液继续消化并倒置显微镜窥视摇培养瓶半数细胞脱落便立即停止消化；
（2）消化液吸入离管离清吸入另瓶加培养液置温箱培养；向原瓶内补加新培养液继续培养用处理纤维细胞比肿瘤细胞易先脱落经几反复处理能纤维细胞除净
4．胶原酶消化：
本利用纤维细胞胶原酶较敏特点通消化进行选择
（1）用0.5mg/ml胶原酶消化处理边消化边倒置显微镜窥视发现纤维细胞除掉即终止消化；
（2）用Hanks洗涤处理更换新培养液继续培养获纯净肿瘤细胞纤维细胞未除净再重复
5．其：
发现聚丙烯酰胺抑制纤维细胞作用；用聚蔗糖制备比重1.025～1.085密度梯度离液加入细胞悬液23℃800g离 10种比重1.025～1.050层纤维细胞比重1.050～1.085层皮细胞再经离进行培养近应用特殊化物SOD抑制纤维细胞
选用述任何种都需进行试验取必要经验找适合条件才能获效
（三）提高肿瘤细胞培养存率率措施
根据经验肿瘤细胞体外易培养建立能传代肿瘤细胞系更困难肿瘤组织或细胞初代接种培养现几种情况：
完全细胞游或移；
细胞移游细胞增殖细胞间处于停滞状态致难传代；
细胞增殖传若干代停止或衰退死亡；
传数代细胞增殖缓慢经段停滞期才呈旺盛状态形稳定肿瘤传代细胞系
现象说明肿瘤细胞体外存条件较高要求并需经新环境适应才能欲获培养效能局限于般培养必须采用些特殊措施
1．适宜底物：
经纯化细胞接种同底物鼠尾胶原底层、饲细胞层等
2．：
应用促细胞向培养液增加种或几种促细胞根据细胞种类同选用同促物用胰岛素、氢化松、雌激素及其
提高肿瘤细胞体外培养环境适应力增加力癌细胞（干细胞）数量采用物体转嫁接种瘤再物体内取进行培养能提高体外培养功率受体物裸鼠
3.物体媒介培养：
（1）瘤块接种：取新鲜瘤组织用Hanks液洗净血污切1～3毫米块用穿刺针吸瘤块用酒精棉球擦拭物腹部直接刺入皮注入瘤块；
（2）饲养观察待肿瘤达较体积剥取瘤组织；
（3）进行体外培养
（4）防止失败仍取部瘤组织继续裸鼠体内传代通裸鼠媒介接种力肿瘤细胞数量增细胞培养易于功
肿瘤细胞培养与培养细胞完全相同功率比细胞高
（四）体外培养肿瘤细胞物检测
旦培养肿瘤细胞形态单细胞群体或细胞系（或株）论用于实验研究建立细胞系都需要做系列细胞物测定主要目于求证明：
所培养细胞系确源于原体内具恶性细胞非细胞或其细胞均具瘤种特异性阐明般物性状测定项目数量明确规定根据需要定做项目要点
【形态观察】主要观察细胞般形态体形态、核浆比例、染色质核仁、少等及细胞骨架微丝微管排列状态等
【细胞增殖】检测细胞曲线、细胞裂指数、倍增间、细胞周期间
【细胞核型析】检测核型特点染色体数量、标记染色体、带型等
【凝集试验】检测凝集力
【软琼脂培养】检测集落形能力
【异体物接种】向异体物体内（皮）接种细胞悬液观察瘤能力
【其】除述项目外根据需要做同位素标记、组织化析荧光显微镜观察等
述肿瘤细胞物检测主要：异体物（用裸鼠）接种瘤、软琼脂培养、核型析、细胞骨架电镜观察等几项细胞角度考虑尚应做癌基抗癌基等检测些项目本书第二篇介绍
（五）肿瘤细胞系或细胞株评价
已建各种肿瘤细胞系或细胞株疑都用实验象近我已建肿瘤细胞系已非并获越越广泛应用根据研究者经验使用些细胞系应持特别审慎态度主要应考虑些细胞期传代否发遗传性改变能众所周知期传代细胞系染色体核型稳定另外能发基突变、基易位或缺失等变化其结能导致细胞产物性状变近建各种肿瘤细胞系例都已传代少则几十则百代才确认建细胞系种情况难保证细胞初代建性状仍致已前述癌细胞培养并非能顺利传凡已期传代细胞系都已获死性前尚未完全确证所癌细胞都具死性；尚难肯定期培养癌细胞物性状与体内仍完全相同（包括死性）据述用癌细胞系所获实验结应尽量做析性结论避免做概括性与体内等同结论外推与体内等同更妥广泛说应用各种较间培养细胞做实验都应
细胞培养瓶培养的癌细胞多少天凋亡
答：首先,衰老的肿瘤细胞尽管不能增殖,但它们仍保留着代谢活力,可产生具有抑制和促进肿瘤生长活性的蛋白质,能够以旁分泌的形式影响邻近肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤生长。其次,衰老细胞往往具有凋亡抗性,能够通过过度表达Bcl一2而抵抗凋亡,故不容易清除而在人体长期存活。肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易...
细胞培养瓶培养的癌细胞多少天凋亡
答：首先衰肿瘤细胞尽管能增殖仍保留着代谢力产具抑制促进肿瘤性蛋白质能够旁泌形式影响邻近肿瘤细胞增殖促进肿瘤其衰细胞往往具凋亡抗性能够通度表达Bcl2抵抗凋亡故容易清除体期存肿瘤细胞组织培养占核位置首先癌细胞比较容易培养细胞前建立细胞系癌细胞系另外肿瘤类威胁疾病肿瘤细胞培养研究癌变机理、抗癌药检测、癌物极其重要...
细胞培养技术的增殖
答：一般根据细胞种类、性状和原供体的年龄的情况而定。如：二倍体成纤维细胞，在不冻存和反复传代条件下可传30～50代，相当于150～300个细胞增殖周期，能维持一年左右的生命，细胞便开始凋亡(apoptosis)。 细胞在生存过程中经历以下三个阶段1.原代培养期(primary culture)组织到第一次传代时间大约为1～4周...
地塞米松一般和细胞培养多长时间让细胞凋亡
答：诱导凋亡实验细胞加药处理贴壁细胞力丧失脱壁漂浮部细胞需要所加药处理完要收集全部培养清少量PBS洗瓶内剩细胞洗PBS与前收集清合并胰酶消化消化完毕用前收集培养基止消化离PBS再洗遍离弃清细胞沉淀加入70% 4度预冷乙醇（PBS配制）4度放置少于1（文献说少于15钟）离乙醇PBS洗遍加入PIDNAse终浓度50 ug/ml...
细胞系生长过程有哪些主要阶段,每个阶段细胞各有什么特点
答：传代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动发生较大改变。一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。③衰退期的细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点(多发生在传代末或衰退期)，...
细胞复苏出来培养一天后能运输吗
答：一般都要在培养瓶中长满才可以运输。因为细胞在运输过程中由于外界不是处于最佳生存状态，因此细胞会逐渐凋亡。运输如果时间久，长满的细胞都会全部死亡，如果刚复苏出一天，细胞不会那么快的爬满整个培养瓶，更容易凋落死亡。
一个生物学问题
答：在外界条件完全适宜的情况下理论上是可以无限分裂下去的，比如肿瘤细胞，他的特点就是无限增殖，但这只是理论上，实际中：这种情况叫做细胞的传代培养：很多的动植物细胞都是可以传代培养的。但是实际上在培养过程中细胞的分裂可以分为增殖期、平稳期和凋亡期 意思就是刚开始在培养液中细胞会以指数倍数快速...
放射线治疗(放疗)是治疗癌症的一种有效方法.科研人员用T细胞白血病病人...
答：低剂量射线下，细胞凋亡无明显变化，说明细胞周期产生暂时的阻滞，有利于DNA损伤的修复；当剂量1.0Gy时，细胞凋亡百分率逐渐变高，说明DNA损伤不能修复，造成细胞死亡．（4）①根据对照原则，向A瓶接种正常细胞，B、C、D、E瓶接种等量的鼻咽癌细胞． ②从实验结果表格中数据可知，C、D、E瓶中分别加入...
HUVEC细胞培养攻略
答：换液后的第二天，若发现无限细胞系出现空泡化，如图3所示，这可能预示着问题。空泡化可能是细胞凋亡的标志，或是环境因素影响（如pH失衡或血清问题）。解决方法包括监测培养液的pH值，确保其在7.2-7.4的理想范围内，或定期更换新鲜的血清和培养基。贴壁英雄：预防聚团的小妙招 当培养瓶的亲水性不足...
细胞凋亡实验中细胞培养多长时间后可以收集细胞
答：因为是诱导凋亡的实验，细胞加药处理后，贴壁细胞会因为活力丧失而脱壁漂浮，而这部分细胞正是你需要的，所以加药处理完后要收集全部培养上清，少量PBS洗瓶内剩下的细胞，洗的PBS与之前收集的上清合并。胰酶消化。消化完毕用之前收集的培养基中止消化。离心后PBS再洗一遍。离心，弃上清，细胞沉淀中加入70%...
不知道你培养的是那种细胞，像我培养的caco-2，ht29细胞时是每天换一次培养基，并且每天显微镜下观察贴壁细胞浓度，再考虑是否传代
培养三代，稳定后开始接种或者实验。
首先衰肿瘤细胞尽管能增殖仍保留着代谢力产具抑制促进肿瘤性蛋白质能够旁泌形式影响邻近肿瘤细胞增殖促进肿瘤其衰细胞往往具凋亡抗性能够通度表达Bcl2抵抗凋亡故容易清除体期存肿瘤细胞组织培养占核位置首先癌细胞比较容易培养细胞前建立细胞系癌细胞系另外肿瘤类威胁疾病肿瘤细胞培养研究癌变机理、抗癌药检测、癌物极其重要手段肿瘤细胞培养阐明解决癌症起着估量作用
、组织培养肿瘤细胞物特性
肿瘤细胞与体内细胞相比论体内或体外形态、增值、遗传性状等面都显著同体内肿瘤细胞体外培养肿瘤细胞其差异较并非完全相同培养肿瘤细胞具突特点：
（－）形态性状
培养癌细胞光显微镜特异形态数肿瘤细胞镜观察比二倍体细胞清晰核膜、核仁轮廓明显核糖体颗粒丰富电镜观察癌细胞表面微绒毛细密微丝走行细胞规则能与肿瘤细胞具定向运锚着依赖性关
（二）增殖
肿瘤细胞体内具受控增殖性体外培养仍二倍体细胞体外培养加血清能增殖血清含细胞增殖癌细胞低血清（2％～5％）仍能已证明肿瘤细胞自泌或内泌性产促增殖能力细胞发转化现能低血清培养基现象已检测细胞恶变指标癌细胞或培养发恶性转化单细胞培养形集落（克隆）能力比细胞强另外癌细胞增殖数量增扩展接触抑制消除细胞能相互重叠向三维空间发展形堆积物
（三）永性
永性称死性体外培养表现细胞限传代凋亡（Apoptosis）体外培养肿瘤细胞系或细胞株都表现种性状体内肿瘤细胞否尚直接证明恶性肿瘤终杀死宿主并同归于尽难证明性状存体外肿癌细胞永性否能反证体内同尚难肯定近建立细胞系或株程说明永性体内肿瘤细胞所固肿瘤细胞应易于培养事实数肿瘤细胞初代培养并容易增殖并旺盛；经纯化单化瘤细胞增殖若干代便现类似二倍体细胞培养停滞期阶段才获永性顺利传代说明体外肿瘤细胞永性能体外培养获些具永性恶性性细胞系NIH3T3、Rat－1、10T1/2等细胞证明永性恶性（包括浸润性）两种性状受同基调控却相关性能永性细胞恶变阶段至少体外
（四）浸润性
浸润性肿瘤细胞扩张性增殖行培养癌细胞仍持种性状与组织混合培养能浸润入其组织细胞并穿透工隔膜能力
（五）异质性
所肿瘤都由增殖能力、遗传性、起源、周期状态等性状同细胞组异质性构同肿瘤内细胞力差别瘤组织；处于瘤体周边区细胞获血液供应增殖旺盛区细胞衰退化处于周期阻滞状态些呈跃增殖状态细胞称干细胞（Stem Cells）、些干细胞才支持肿瘤肿瘤干细胞培养易于增殖；干细胞离培养称干细胞培养
（六）细胞遗传
数肿瘤细胞遗传改变失二倍体核型、呈异倍体或倍体等肿瘤细胞群由细胞群组干细胞系数亚系并断进行着适应性演变
（七）其
肿瘤细胞体外易原能由于：①依赖性：肿瘤细胞虽较强克隆力仍定群体性或与其细胞相依存关系肿瘤细胞与肿瘤细胞相互依存二肿瘤细胞与基质纤维细胞依赖体外散培养排除纤维细胞同消除或减弱些依存关系能影响癌细胞增殖性；②肿瘤细胞自泌散培养稀释达肿瘤需求降低肿瘤细胞增殖力；③并非所肿瘤细胞都强力Life Span干细胞才强增殖能力些细胞数量少；④离体培养肿瘤细胞能需求与体内相似特殊存条件
二、培养
肿瘤细胞培养功关键于：取材、纤维细胞排除、选用适宜培养液培养底物等几面具体培养面肿瘤细胞培养与组织细胞培养并原则差别初代培养应用组织块消化培养均 （）要点
1．取材：
肿瘤细胞自外科手术或检瘤组织取材部位非重要体积较肿瘤组织退变或坏死区取材尽量避免用退变组织要挑选力较部位癌性转移淋巴结或胸腹水培养材料取材宜尽快进行培养故能立即培养贮存于4℃宜栽24
2．培养基：
肿瘤细胞培养基要求细胞严格般用 RPMIl640、 DMEM、Mc-Coy5A等培养基等皆用于肿瘤细胞培养肿瘤细胞血清需求比细胞低细胞培养加血清能肿瘤细胞低血清培养基能肿瘤细胞培养环境适应性较肿瘤细胞自泌（Autocrine）性产促物质故并说明肿瘤细胞完全需要些按同细胞需要同；肿瘤细胞与细胞间、肿瘤细胞与肿瘤细胞间需求都存着差异数肿瘤细胞培养仍需要需特异性〔乳腺癌细胞等）总培养肿瘤细胞仍需加血清相关培养更易功
3．纤维细胞排除：
纤维细胞与肿瘤细胞同混杂致难纯化肿瘤细胞且纤维细胞比肿瘤细胞快终能压制肿瘤细胞排除纤维细胞肿瘤细胞培养关键排除纤维细胞种（表2－1）
（二）纤维细胞排除
1．机械刮除：
用锈钢丝末端插橡胶刮（用胶塞剪三角形插锈钢丝）、或裹少许脱脂棉制装入试管高压灭菌备用（用特制电热烧灼器刮除）刮除程序：
（1）标记：镜观察用脱色笔培养瓶皿背面圈肿瘤细胞部位；
（2）刮除：弃掉培养液菌胶刮伸入瓶皿肉眼或显微镜窥视刮除标记空间；
（3）用Hanks液冲洗两洗除刮掉细胞；
（4）注入培养液继续培养发现仍纤维细胞残留重复刮除至完全除掉止
2．反复贴壁：
根据肿瘤细胞比纤维细胞贴壁速度慢特点并结合使用加血清营养液含两类细胞细胞悬液反复贴壁使两类细胞相互离操作与传代相同
（1）待细胞达定数量倒旧培养液用胰酶消化Hanks 冲洗2加入含血清培养液吹打制细胞悬液；
（2）取编号A、B、C三培养瓶；首先悬液接种入A培养瓶置温箱静止培养5～20钟轻轻倾斜培养瓶让液体集瓶角慢慢吸全部培养液再接种入B培养瓶；向A瓶补充少许完全培养液置温箱继续培养；
（4）培养B瓶细胞5～20钟接处理A培养液注入C培养瓶；再向B瓶补加完全培养基
三瓶内都含培养液均温箱继续培养操作功观察见A瓶主要纤维细胞B瓶两类细胞相杂C瓶能主要癌细胞必要反复处理直至癌细胞纯化止
3．消化排除：
曾用于乳癌细胞培养具体程序：
（1）先用0.5%胰蛋白酶0.02％EDTA（1：1）混合液漂洗培养细胞再换新混合液继续消化并倒置显微镜窥视摇培养瓶半数细胞脱落便立即停止消化；
（2）消化液吸入离管离清吸入另瓶加培养液置温箱培养；向原瓶内补加新培养液继续培养用处理纤维细胞比肿瘤细胞易先脱落经几反复处理能纤维细胞除净
4．胶原酶消化：
本利用纤维细胞胶原酶较敏特点通消化进行选择
（1）用0.5mg/ml胶原酶消化处理边消化边倒置显微镜窥视发现纤维细胞除掉即终止消化；
（2）用Hanks洗涤处理更换新培养液继续培养获纯净肿瘤细胞纤维细胞未除净再重复
5．其：
发现聚丙烯酰胺抑制纤维细胞作用；用聚蔗糖制备比重1.025～1.085密度梯度离液加入细胞悬液23℃800g离 10种比重1.025～1.050层纤维细胞比重1.050～1.085层皮细胞再经离进行培养近应用特殊化物SOD抑制纤维细胞
选用述任何种都需进行试验取必要经验找适合条件才能获效
（三）提高肿瘤细胞培养存率率措施
根据经验肿瘤细胞体外易培养建立能传代肿瘤细胞系更困难肿瘤组织或细胞初代接种培养现几种情况：
完全细胞游或移；
细胞移游细胞增殖细胞间处于停滞状态致难传代；
细胞增殖传若干代停止或衰退死亡；
传数代细胞增殖缓慢经段停滞期才呈旺盛状态形稳定肿瘤传代细胞系
现象说明肿瘤细胞体外存条件较高要求并需经新环境适应才能欲获培养效能局限于般培养必须采用些特殊措施
1．适宜底物：
经纯化细胞接种同底物鼠尾胶原底层、饲细胞层等
2．：
应用促细胞向培养液增加种或几种促细胞根据细胞种类同选用同促物用胰岛素、氢化松、雌激素及其
提高肿瘤细胞体外培养环境适应力增加力癌细胞（干细胞）数量采用物体转嫁接种瘤再物体内取进行培养能提高体外培养功率受体物裸鼠
3.物体媒介培养：
（1）瘤块接种：取新鲜瘤组织用Hanks液洗净血污切1～3毫米块用穿刺针吸瘤块用酒精棉球擦拭物腹部直接刺入皮注入瘤块；
（2）饲养观察待肿瘤达较体积剥取瘤组织；
（3）进行体外培养
（4）防止失败仍取部瘤组织继续裸鼠体内传代通裸鼠媒介接种力肿瘤细胞数量增细胞培养易于功
肿瘤细胞培养与培养细胞完全相同功率比细胞高
（四）体外培养肿瘤细胞物检测
旦培养肿瘤细胞形态单细胞群体或细胞系（或株）论用于实验研究建立细胞系都需要做系列细胞物测定主要目于求证明：
所培养细胞系确源于原体内具恶性细胞非细胞或其细胞均具瘤种特异性阐明般物性状测定项目数量明确规定根据需要定做项目要点
【形态观察】主要观察细胞般形态体形态、核浆比例、染色质核仁、少等及细胞骨架微丝微管排列状态等
【细胞增殖】检测细胞曲线、细胞裂指数、倍增间、细胞周期间
【细胞核型析】检测核型特点染色体数量、标记染色体、带型等
【凝集试验】检测凝集力
【软琼脂培养】检测集落形能力
【异体物接种】向异体物体内（皮）接种细胞悬液观察瘤能力
【其】除述项目外根据需要做同位素标记、组织化析荧光显微镜观察等
述肿瘤细胞物检测主要：异体物（用裸鼠）接种瘤、软琼脂培养、核型析、细胞骨架电镜观察等几项细胞角度考虑尚应做癌基抗癌基等检测些项目本书第二篇介绍
（五）肿瘤细胞系或细胞株评价
已建各种肿瘤细胞系或细胞株疑都用实验象近我已建肿瘤细胞系已非并获越越广泛应用根据研究者经验使用些细胞系应持特别审慎态度主要应考虑些细胞期传代否发遗传性改变能众所周知期传代细胞系染色体核型稳定另外能发基突变、基易位或缺失等变化其结能导致细胞产物性状变近建各种肿瘤细胞系例都已传代少则几十则百代才确认建细胞系种情况难保证细胞初代建性状仍致已前述癌细胞培养并非能顺利传凡已期传代细胞系都已获死性前尚未完全确证所癌细胞都具死性；尚难肯定期培养癌细胞物性状与体内仍完全相同（包括死性）据述用癌细胞系所获实验结应尽量做析性结论避免做概括性与体内等同结论外推与体内等同更妥广泛说应用各种较间培养细胞做实验都应
答：首先,衰老的肿瘤细胞尽管不能增殖,但它们仍保留着代谢活力,可产生具有抑制和促进肿瘤生长活性的蛋白质,能够以旁分泌的形式影响邻近肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤生长。其次,衰老细胞往往具有凋亡抗性,能够通过过度表达Bcl一2而抵抗凋亡,故不容易清除而在人体长期存活。肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易...
答：首先衰肿瘤细胞尽管能增殖仍保留着代谢力产具抑制促进肿瘤性蛋白质能够旁泌形式影响邻近肿瘤细胞增殖促进肿瘤其衰细胞往往具凋亡抗性能够通度表达Bcl2抵抗凋亡故容易清除体期存肿瘤细胞组织培养占核位置首先癌细胞比较容易培养细胞前建立细胞系癌细胞系另外肿瘤类威胁疾病肿瘤细胞培养研究癌变机理、抗癌药检测、癌物极其重要...
答：一般根据细胞种类、性状和原供体的年龄的情况而定。如：二倍体成纤维细胞，在不冻存和反复传代条件下可传30～50代，相当于150～300个细胞增殖周期，能维持一年左右的生命，细胞便开始凋亡(apoptosis)。 细胞在生存过程中经历以下三个阶段1.原代培养期(primary culture)组织到第一次传代时间大约为1～4周...
答：诱导凋亡实验细胞加药处理贴壁细胞力丧失脱壁漂浮部细胞需要所加药处理完要收集全部培养清少量PBS洗瓶内剩细胞洗PBS与前收集清合并胰酶消化消化完毕用前收集培养基止消化离PBS再洗遍离弃清细胞沉淀加入70% 4度预冷乙醇（PBS配制）4度放置少于1（文献说少于15钟）离乙醇PBS洗遍加入PIDNAse终浓度50 ug/ml...
答：传代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动发生较大改变。一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。③衰退期的细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点(多发生在传代末或衰退期)，...
答：一般都要在培养瓶中长满才可以运输。因为细胞在运输过程中由于外界不是处于最佳生存状态，因此细胞会逐渐凋亡。运输如果时间久，长满的细胞都会全部死亡，如果刚复苏出一天，细胞不会那么快的爬满整个培养瓶，更容易凋落死亡。
答：在外界条件完全适宜的情况下理论上是可以无限分裂下去的，比如肿瘤细胞，他的特点就是无限增殖，但这只是理论上，实际中：这种情况叫做细胞的传代培养：很多的动植物细胞都是可以传代培养的。但是实际上在培养过程中细胞的分裂可以分为增殖期、平稳期和凋亡期 意思就是刚开始在培养液中细胞会以指数倍数快速...
答：低剂量射线下，细胞凋亡无明显变化，说明细胞周期产生暂时的阻滞，有利于DNA损伤的修复；当剂量1.0Gy时，细胞凋亡百分率逐渐变高，说明DNA损伤不能修复，造成细胞死亡．（4）①根据对照原则，向A瓶接种正常细胞，B、C、D、E瓶接种等量的鼻咽癌细胞． ②从实验结果表格中数据可知，C、D、E瓶中分别加入...
答：换液后的第二天，若发现无限细胞系出现空泡化，如图3所示，这可能预示着问题。空泡化可能是细胞凋亡的标志，或是环境因素影响（如pH失衡或血清问题）。解决方法包括监测培养液的pH值，确保其在7.2-7.4的理想范围内，或定期更换新鲜的血清和培养基。贴壁英雄：预防聚团的小妙招 当培养瓶的亲水性不足...
答：因为是诱导凋亡的实验，细胞加药处理后，贴壁细胞会因为活力丧失而脱壁漂浮，而这部分细胞正是你需要的，所以加药处理完后要收集全部培养上清，少量PBS洗瓶内剩下的细胞，洗的PBS与之前收集的上清合并。胰酶消化。消化完毕用之前收集的培养基中止消化。离心后PBS再洗一遍。离心，弃上清，细胞沉淀中加入70%...
