怎么查看基因测序结果中克隆的酶切位点
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-09
通过什么软件可以查到某段基因的酶切位点？谢谢！
第二，设计好酶切位点，然后合成引物，购买质粒。
第三，如果PCR完成，可以用相应位点的内切酶，切割基因，电泳，根据电泳结果，判断该位点是否存在或者酶切是否正确。
用primer5引物设计的软件,再把你的序列输进去,直接查找酶切位点,比如BAMHI（GGATCC）,把它输进去就可以了,软件会自动显示的
PCR产物的酶切问题
答：PCR-RFLP技术我曾经做过，说实话这并不是一个稳定有效的鉴定方法，当时我也遇到和你一样的问题。有这样的情况，一种是你选择酶的时候选择错误，在你该段基因上根本不存在这个酶切位点。二是你根据别人发表序列确定了存在该酶切位点，但是因为基因突变等情况，导致你的病例酶切位点发生变化。三是即使...
PCR过程,引物,酶切位点的问题
答：如果PCR产物需要酶切，就需要加上保护碱基。不同酶切位点所需要的保护碱基是不一样的，一般参考NEB网站上的一个保护碱基表。一搜就有了。如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T,然后按流程操作就可以了。一般是需要转化-验证-测序，如果是构建表达载体的话...
请教酶切位点和测序结果不一致问题
答：酶切位点检测质粒的正确性只能从目标片段的大小上判断，因此准确性比较差，另外，如果酶切反应体系或者条件的不适合，会导致切割效率低下或者产生星标活性（即产生错误切割）。测序的结果一般来讲是可信的，但是要注意在测序反应刚开始和接近结束时，其结果的可信性差，可以查看测序峰图用来确认。
挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有
答：可能原因：1.PCR扩增的是假克隆，因为PCR验证的可靠性不稳定。2.质粒中酶切位点变异 你可以做如下实验：1.看重组质粒的大小是不是比原始质粒大 2.用提出的质粒做pcr，这样比较可靠，用细菌做pcr的假阳性极高 3.用别的酶再试一下，是否能切出目的片段。祝实验成功 ...
怎么把一段2000bp且含有bamhi 和ecori酶切位点的dna片段克隆到一个质粒...
答：怎么把一段2000bp且含有BamHI 和EcoRI酶切位点的DNA片段克隆到一个质粒中及鉴定？如下：1、选择载体类型：选择一个常用的克隆载体，例如pUC19、pGEM-T Easy或pBR322。这些载体都具有高拷贝数、易于在细菌中扩增以及带有方便的筛选标记（如抗性基因）等特点。具体选择哪种载体要根据实验需求和实验室条件...
DNA 酶切如何选择限制性内切酶,酶切后测序可以进行鉴定吗?
答：有专门的软件可以寻找DNA序列段上的酶切位点。有酶切鉴定，有测序鉴定，酶切一般是初步鉴定，如果是某DNA段最好以测序结果为准。
2020-08-24质粒构建
答：当然不是!我们要 选择那些PDCD1(或其他目的基因)本身没有的酶切位点! 所以我们还需要用Primer 5来分析一下哪些是PDCD1所没有的。 还是打开Primer 5,然后粘贴CDS序列,点击Enzyme,2为所有的酶,我们比对质粒图谱选择多克隆位点的酶,双击即可到3的框中,选好之后点击OK,可以看到PDCD1中有ApaI和KpnI两个酶切位点,...
双酶切鉴定(或者测序)是否含有目的基因的时候,为何用pMD18-T载体?_百 ...
答：通常先分析一下目的基因上存在哪些常见的酶切位点,再选择合适的克隆载体.保证你双酶切的位点在目的基因上不会出现.PMD18-T克隆位点两侧的酶切位点比较多,很常用的.
PCR产物和质粒双酶切后电泳如何判断酶切完成?
答：对于PCR产物一般会采取这样的策略，将产物首先连接到T载体上，然后再用设计好的双酶切，电泳回收切下的条带，这样就能确保得到的是完全酶切的产物。载体判断比较麻烦，要看载体本身、多大双酶切为点之间的条带有多大、双切前后的大小是否能通过电泳区别出来，但是双切位点一般都在标记基因里面，所以插入...
PCR克隆出来的基因怎么确定是我想要的
答：这是基因工程的一般通用步骤。综合成本及效率，测序最为省力。当然，你也可以用特异性酶切位点做一个基本判断，如果基因的同源性很高，可以不用测序。 例如，老鼠基因上有一个酶切位点，如果这段基因于人类的非常相似，用该限制性内切酶切人类基因也可以得到与切老鼠基因相同的效果。
给你一个在线的网址吧 http://www.addgene.org/analyze-sequence/
酶切位点检测质粒的正确性只能从目标片段的大小上判断，因此准确性比较差，另外，如果酶切反应体系或者条件的不适合，会导致切割效率低下或者产生星标活性（即产生错误切割）。测序的结果一般来讲是可信的，但是要注意在测序反应刚开始和接近结束时，其结果的可信性差，可以查看测序峰图用来确认。
第一，酶切位点，由内切酶决定，内切酶的使用是人为决定的，所以酶切位点首先应该是人为设计出来。第二，设计好酶切位点，然后合成引物，购买质粒。
第三，如果PCR完成，可以用相应位点的内切酶，切割基因，电泳，根据电泳结果，判断该位点是否存在或者酶切是否正确。
用primer5引物设计的软件,再把你的序列输进去,直接查找酶切位点,比如BAMHI（GGATCC）,把它输进去就可以了,软件会自动显示的
答：PCR-RFLP技术我曾经做过，说实话这并不是一个稳定有效的鉴定方法，当时我也遇到和你一样的问题。有这样的情况，一种是你选择酶的时候选择错误，在你该段基因上根本不存在这个酶切位点。二是你根据别人发表序列确定了存在该酶切位点，但是因为基因突变等情况，导致你的病例酶切位点发生变化。三是即使...
答：如果PCR产物需要酶切，就需要加上保护碱基。不同酶切位点所需要的保护碱基是不一样的，一般参考NEB网站上的一个保护碱基表。一搜就有了。如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T,然后按流程操作就可以了。一般是需要转化-验证-测序，如果是构建表达载体的话...
答：酶切位点检测质粒的正确性只能从目标片段的大小上判断，因此准确性比较差，另外，如果酶切反应体系或者条件的不适合，会导致切割效率低下或者产生星标活性（即产生错误切割）。测序的结果一般来讲是可信的，但是要注意在测序反应刚开始和接近结束时，其结果的可信性差，可以查看测序峰图用来确认。
答：可能原因：1.PCR扩增的是假克隆，因为PCR验证的可靠性不稳定。2.质粒中酶切位点变异 你可以做如下实验：1.看重组质粒的大小是不是比原始质粒大 2.用提出的质粒做pcr，这样比较可靠，用细菌做pcr的假阳性极高 3.用别的酶再试一下，是否能切出目的片段。祝实验成功 ...
答：怎么把一段2000bp且含有BamHI 和EcoRI酶切位点的DNA片段克隆到一个质粒中及鉴定？如下：1、选择载体类型：选择一个常用的克隆载体，例如pUC19、pGEM-T Easy或pBR322。这些载体都具有高拷贝数、易于在细菌中扩增以及带有方便的筛选标记（如抗性基因）等特点。具体选择哪种载体要根据实验需求和实验室条件...
答：有专门的软件可以寻找DNA序列段上的酶切位点。有酶切鉴定，有测序鉴定，酶切一般是初步鉴定，如果是某DNA段最好以测序结果为准。
答：当然不是!我们要 选择那些PDCD1(或其他目的基因)本身没有的酶切位点! 所以我们还需要用Primer 5来分析一下哪些是PDCD1所没有的。 还是打开Primer 5,然后粘贴CDS序列,点击Enzyme,2为所有的酶,我们比对质粒图谱选择多克隆位点的酶,双击即可到3的框中,选好之后点击OK,可以看到PDCD1中有ApaI和KpnI两个酶切位点,...
答：通常先分析一下目的基因上存在哪些常见的酶切位点,再选择合适的克隆载体.保证你双酶切的位点在目的基因上不会出现.PMD18-T克隆位点两侧的酶切位点比较多,很常用的.
答：对于PCR产物一般会采取这样的策略，将产物首先连接到T载体上，然后再用设计好的双酶切，电泳回收切下的条带，这样就能确保得到的是完全酶切的产物。载体判断比较麻烦，要看载体本身、多大双酶切为点之间的条带有多大、双切前后的大小是否能通过电泳区别出来，但是双切位点一般都在标记基因里面，所以插入...
答：这是基因工程的一般通用步骤。综合成本及效率，测序最为省力。当然，你也可以用特异性酶切位点做一个基本判断，如果基因的同源性很高，可以不用测序。 例如，老鼠基因上有一个酶切位点，如果这段基因于人类的非常相似，用该限制性内切酶切人类基因也可以得到与切老鼠基因相同的效果。
