PCR过程，引物,酶切位点的问题
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-23
PCR过程，引物,酶切位点的问题
PCR过程,引物,酶切位点的问题
答：如果PCR产物需要酶切，就需要加上保护碱基。不同酶切位点所需要的保护碱基是不一样的，一般参考NEB网站上的一个保护碱基表。一搜就有了。如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T,然后按流程操作就可以了。一般是需要转化-验证-测序，如果是构建表达载体的话...
PCR时 引物的5‘端 有时需要加酶切位点 请问是怎么加上去的 ???
答：酶切位点可以上网查 同时，记得再加上一些保护碱基 因为内切酶除了有特异的识别位点之外，还需多几个无需特异性的碱基提供一个platform让它可以结合上去，否则会掉下来 保护碱基的具体数目可以上NEB的网站查 那么，引物的结构就是（5→3）：保护碱基+酶切位点+原来的引物序列 ...
关于pcr反应引物的描述不正确的是
答：关于pcr反应引物的描述不正确的是引物的3’端可以带有生物素、荧光素或酶切位点。PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分为两种，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制，也就是只能识别3'的尾端。而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷...
pcr技术在上游引物从哪一端添加限制酶?
答：PCR技术中，在上游引物的5'端可以加入限制性内切酶切割位点，以便后续对PCR产物进行克隆、测序等操作。此时限制性内切酶切割位点应该添加在引物的末端，靠近3'端的位置。由于PCR反应是从模板DNA的5'端向3'端延伸合成新链，因此，如果将限制性内切酶切割位点添加在引物的3'端，就可能使得引物在PCR过程中被...
最全PCR引物设计和PCR细节
答：PCR设计要点：</3'端避免连续G/C，无二级结构，避免终止在密码子第三位，引物浓度1-3μM，参考密码子表。引物间无互补，不超过4个连续同源碱基，保证结构稳定性。5'端添加标记、酶切位点和保护碱基，注意不影响特异性，Tm值计算时忽略附加序列。亚克隆策略：A.6bp酶切位点配以保护碱基；B.定向...
酶切位点PCR引物设计时酶切位点的保护碱基表
答：在进行酶切位点PCR引物设计时，保护酶切位点至关重要。不同内切酶对于识别位点之外的最少保护碱基数有不同的要求。以下是一些常见酶的保护碱基需求概览：Acc I：识别位点两侧至少需要8到12个保护碱基，以确保切割效率。一般推荐至少6个，除非特别列出。Afl III：推荐至少8到12个保护碱基，切割率在2小时...
引物添加了酶切位点的,做的时候突然想到一个问题,进行pcr扩增之后5端...
答：限制酶切位点的保护碱基，一般首先要考虑限制酶的特异性，决定添加数目和序列，同时还要考虑两条引物的Tm值和各引物的碱基分布及GC含量，以优化PCR和后续酶切。是具有一定特异性和功能性的。taq在加A是没有特异性的。所以，从这个角度看，是不能算保护碱基的，而且pfu之类的聚合酶不会加A。个人见解，...
PCR引物前面如何加酶切位点
答：设计好的引物序列5‘端加上酶切位点的序列，一般还要在酶切位点的外面再加上2个A，这样切起来效率高一些
PCR设计引物的时候为什么酶切位点通常放在引物的近5’端
答：因为酶切位点的那几个碱基通常是跟模板不匹配的，如果本来就是匹配序列，放在什么位置都可以
设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么...
答：因此在设计PCR引物时，为保护5` 端外加的内切酶识别位点，人为地在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高酶切时的活性，使酶切完全。其次，在分子克隆实验中选择载体的酶切位点时，相临的两个酶切位点往往不能同时使用，因为一个位点切割后留下的碱基过少以至于影响旁边...
设计好引物后，分别在上下游引物的5’端加上你所需要引入的酶切位点就可以了。如果PCR产物需要酶切，就需要加上保护碱基。不同酶切位点所需要的保护碱基是不一样的，一般参考NEB网站上的一个保护碱基表。一搜就有了。如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T,然后按流程操作就可以了。一般是需要转化-验证-测序，如果是构建表达载体的话还有酶切、连接、验证。
是的。
设计好引物后，分别在上下游引物的5’端加上你所需要引入的酶切位点就可以了。如果PCR产物需要酶切，就需要加上保护碱基。不同酶切位点所需要的保护碱基是不一样的，一般参考NEB网站上的一个保护碱基表。一搜就有了。如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T,然后按流程操作就可以了。一般是需要转化-验证-测序，如果是构建表达载体的话还有酶切、连接、验证。答：如果PCR产物需要酶切，就需要加上保护碱基。不同酶切位点所需要的保护碱基是不一样的，一般参考NEB网站上的一个保护碱基表。一搜就有了。如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T,然后按流程操作就可以了。一般是需要转化-验证-测序，如果是构建表达载体的话...
答：酶切位点可以上网查 同时，记得再加上一些保护碱基 因为内切酶除了有特异的识别位点之外，还需多几个无需特异性的碱基提供一个platform让它可以结合上去，否则会掉下来 保护碱基的具体数目可以上NEB的网站查 那么，引物的结构就是（5→3）：保护碱基+酶切位点+原来的引物序列 ...
答：关于pcr反应引物的描述不正确的是引物的3’端可以带有生物素、荧光素或酶切位点。PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分为两种，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制，也就是只能识别3'的尾端。而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷...
答：PCR技术中，在上游引物的5'端可以加入限制性内切酶切割位点，以便后续对PCR产物进行克隆、测序等操作。此时限制性内切酶切割位点应该添加在引物的末端，靠近3'端的位置。由于PCR反应是从模板DNA的5'端向3'端延伸合成新链，因此，如果将限制性内切酶切割位点添加在引物的3'端，就可能使得引物在PCR过程中被...
答：PCR设计要点：</3'端避免连续G/C，无二级结构，避免终止在密码子第三位，引物浓度1-3μM，参考密码子表。引物间无互补，不超过4个连续同源碱基，保证结构稳定性。5'端添加标记、酶切位点和保护碱基，注意不影响特异性，Tm值计算时忽略附加序列。亚克隆策略：A.6bp酶切位点配以保护碱基；B.定向...
答：在进行酶切位点PCR引物设计时，保护酶切位点至关重要。不同内切酶对于识别位点之外的最少保护碱基数有不同的要求。以下是一些常见酶的保护碱基需求概览：Acc I：识别位点两侧至少需要8到12个保护碱基，以确保切割效率。一般推荐至少6个，除非特别列出。Afl III：推荐至少8到12个保护碱基，切割率在2小时...
答：限制酶切位点的保护碱基，一般首先要考虑限制酶的特异性，决定添加数目和序列，同时还要考虑两条引物的Tm值和各引物的碱基分布及GC含量，以优化PCR和后续酶切。是具有一定特异性和功能性的。taq在加A是没有特异性的。所以，从这个角度看，是不能算保护碱基的，而且pfu之类的聚合酶不会加A。个人见解，...
答：设计好的引物序列5‘端加上酶切位点的序列，一般还要在酶切位点的外面再加上2个A，这样切起来效率高一些
答：因为酶切位点的那几个碱基通常是跟模板不匹配的，如果本来就是匹配序列，放在什么位置都可以
答：因此在设计PCR引物时，为保护5` 端外加的内切酶识别位点，人为地在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高酶切时的活性，使酶切完全。其次，在分子克隆实验中选择载体的酶切位点时，相临的两个酶切位点往往不能同时使用，因为一个位点切割后留下的碱基过少以至于影响旁边...
