如何鉴定新提取细胞rna的质量纯度浓度
rtpcr时提取rna的浓度和纯度要求：浓度20ng/ul以上足够了，如果用的是组织提取，浓度一般很高，可以达到几百甚至几千。如果你用的是病毒、少量细胞，浓度低一些也没有关系。
纯度需要用仪器测一下。260/280理论值应该有2.0以上，260/230值1.2以上基本合格。
RT-PCR：最重要的是RNA是否有明显降解，这个需要跑电泳看。一般来说28S应该比18S亮1.5-2.0倍，说明提取得不错。
反转录·聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）是将RNA的反转录（reverse transcription ）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。
提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板经行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。
提取细胞RNA之后，为什么要测RNA浓度
1、提取RNA测浓度时 A260/A280 大于3的原因可能是降解。
2、一般对于DNA,纯净的时候比值是1.8，而对于RNA则是接近2.0。如果超过这个值，那么最有可能的就是核酸降解了，因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大，所以会使比值上升。RIN(RNA Integrity Number):RNA完整性计数，看你的RNA是不是完整，质量好不好，太低就说明降解严重~~~ 其实提取RNA的条件没那么苛刻，在普通的通风橱里就可以操作，外源RNase的污染比较好消除，关键是破壁时的内源降解。如果用trizol法就必须考虑trizol的量。 另外，相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样。比如霍乱用trizol法提取效果极差，而沙门菌提取效果就较好;所以霍乱菌最好是用试剂盒过柱子提取，然后浓缩。我提取的是大肠杆菌，摸索了好几种方法，最后确定也是qiagen 的kit提取，然后浓缩。 另外，有一种可以喷的液体，叫做RNase抑制剂，用于消除表面RNase的污染，在客观条件不是很好的时候很有效。
答：2、A260/A230比值：RNA样品的A260/A230比值通常在2.0-2.2之间，这个比值可以反映RNA溶液中有机物、盐类等对吸收光线的影响。3、具体应用要求：不同的实验和应用需要不同的RNA纯度要求。比如，在RNA测序实验中，需要高质量的RNA样品，其RIN（RNAintegritynumber）值应该在7以上；而在一些基础研究中，...
答：有机试剂分离蛋白质，RNA沉淀并洗涤，最终溶解于缓冲液中。TRIzol法的魔法</利用异硫氰酸盐裂解细胞，氯仿分离RNA和蛋白质，关键是要防备RNase污染。纯净之道</硅胶柱法提供高效纯度，成本较高，但效果显著。离心管法简便，但纯度可能略逊一筹。磁珠法详细内容请参阅《实验技能》第一期。质量把控</...
答： ②待提取RNA的样品保存在了-5至-20℃； ③细胞在用胰酶处理时过度； ④溶液或离心管未经RNase去除处理； ⑤电泳时使用的甲醛pH值低于了3.5。DNA污染：①样品匀浆时加的试剂量太少；②样品中含有有机溶剂(如乙醇，DMSO等)，强缓冲液或碱性溶液蛋白聚糖和多糖污染：...
答：rtpcr时提取rna的浓度和纯度要求：浓度20ng/ul以上足够了，如果用的是组织提取，浓度一般很高，可以达到几百甚至几千。如果你用的是病毒、少量细胞，浓度低一些也没有关系。纯度需要用仪器测一下。260/280理论值应该有2.0以上，260/230值1.2以上基本合格。RT-PCR：最重要的是RNA是否有明显降解，这个...
答：如果根据紫外线分光光度法，将测到他和她用户这个还是可以有专业的分析师根据籽的这个分析一汽，进行分析。A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释bai或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有...
答：需要根据实验要求和样本特性来确定最适合的提取条件。3、进行有效沉淀和洗涤：在沉淀和洗涤步骤中，使用乙醇等沉淀剂进行有效的沉淀和洗涤，可以去除杂质和污染物，提高RNA的纯度。4、进行纯度检测：提取得到的RNA粗制品需要进行纯度检测。通过使用比色法、电泳分析等方法，可以评估RNA的纯度和质量，确保其...
答：一般通过OD260/OD280来判断他们的含量，纯DNA的比值一般在1.8，大于1.8，小于2时可能有RNA污染，在1.9到2.0时RNA纯度高，小于1.8时可能有蛋白质污染，大于2.0时可能在提取过程中的化学物质残留。
答：常规的鉴定包括：1. 凝胶电泳鉴定DNA或RNA大小是否正确，样品是否有降解等；需要的试剂包括琼脂糖，EB或其他核酸染料，DNA/RNA Marker。当然还需要配套的仪器。2. 紫外分光光度计检测DNA或RNA的浓度和纯度；这个不需要特别的试剂，但需要紫外分光光度计，一般检测OD260与OD280的吸光值。
答：rna的纯度不行，是不可以用提的rna再重复一遍操作。根据查阅相关资料信息显示，重复操作的时候，要选用新的实验用品。其纯度：OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280读数在1.8-2.1之间，比值为2.0是高质量RNA的标志。
答：可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量...
