实验技能 | 第二期：常见核酸（RNA）提取和纯化的方法
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-08-05
核酸世界大揭秘</
DNA与RNA，如同细胞内的双生星，DNA驻守细胞核、线粒体与叶绿体，RNA则活跃在细胞质的舞台上。RNA的纯化与提取，是分子生物学实验中不可或缺的步骤，它为克隆、PCR等后续研究提供了关键基础。
提取RNA，解锁生命密码</
我们的目标是通过化学手段，从复杂的细胞成分中提取纯净的RNA，以洞察其生物学功能。分析RNA组成，研究其在生命活动中的角色，mRNA、tRNA等各类RNA的相对比例各不相同，这是理解生命机制的重要一步。
RNA样本处理的艺术</
对于RNA的细腻呵护，至关重要。单链RNA需冷藏在液氮中，以防止降解。采集、运输和实验过程务必在超低温下进行。样本的理想保存温度是-140°C，而液氮的-196°C是保持活性和结构完整性的理想环境，但务必防止交叉污染。
样本处理要点</
- 植物样本：优先选择新鲜组织，快速处理并备份，避免使用RNA保护剂。
- 动物样本：采集快速，使用RNA保护剂，根据菌类培养基类型采取相应措施，备份并避免RNAlater或TRIzol的使用。
- 细胞样本：处理后立即冷冻，贴壁细胞需清除培养液后操作。
步骤详解</
- 遵循抗凝处理的步骤，将血浆分装到无RNase离心管，确保无细胞污染。
- 血浆样本需在-80°C长期保存，严防降解。
- 根据样本类型，选择合适的处理方法，如全血用TRIzol法，血细胞则需消化白细胞后保存。
RNA提取路径图</
- 收集样本，根据细胞类型选择裂解方法。
- 化学试剂协助下，分解细胞，然后通过DNA酶和硅胶柱去除杂质。
- 有机试剂分离蛋白质，RNA沉淀并洗涤，最终溶解于缓冲液中。
TRIzol法的魔法</
利用异硫氰酸盐裂解细胞，氯仿分离RNA和蛋白质，关键是要防备RNase污染。
纯净之道</
- 硅胶柱法提供高效纯度，成本较高，但效果显著。
- 离心管法简便，但纯度可能略逊一筹。
- 磁珠法详细内容请参阅《实验技能》第一期。
质量把控</
检测RNA浓度和纯度，紫外分光或Qubit测度各有优劣；保存策略多样，既要考虑时间，也要确保完整。
常见问题与解决</
关注效率低、比值异常和RNA降解等常见困扰，确保实验过程的精确和高效。
实验智慧</
使用专用工具和材料，严格执行实验操作规程，安全防护和消毒必不可少。
