细胞培养的注意事项
如何选用培养基及培养细胞注意事项
培养基的选择：
细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了，但却不是最简单的。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。有时候细胞状态不好，转染、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多，让我们先从培养基和血清说起。
◆ MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。
◆ 改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。
◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。
◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。
◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。
准备几种培养基，然后花大约两周的时间做一个简单的细胞生长实验，来选择其中最适合的。
以前大部分实验室都是用干粉培养基，但配制过程就较为繁琐，要溶解、调pH值，过滤，过程中可能会产生一些浓度误差，而且有些实验室的水质并不理想，所以培养的效果会有差异。
1、要保证实验材料新鲜，从活体分离材料后要注意低温保存。
2、要保证无菌操作。可以在操作时用的培养液中加入平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。
3、要注意酶液的浓度和控制消化时间。
4、要注意培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。
无菌操作、控制消化时间、及时关注细胞生长状态。
最重要的就是 无菌意识，注意观察细胞形态，和培养液颜色，及时换液，传代，冻存。
原代动物细胞培养：
1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。
2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。
3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。
贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。
4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。
传代细胞培养：
1、无菌操作
2、控制消化时间
3、及时关注细胞生长状态
答：注意事项如下：1、在进行任何实验前，必须对培养器具、培养基和试剂进行彻底的消毒处理，以避免细菌和其他微生物的污染。2、在培养室中，必须使用无菌技术操作，包括穿戴无菌手套、使用消毒酒精清洗工作台和培养器具，以保持培养环境的无菌状态。
答：首先无菌是最重要的，而且温度要适宜。温度是以什么种类的细胞来确定的，各种细胞所适宜的温度都是不一样的。培养液的酸碱度也是一个重要的因素，培养液必须酸碱度适合细胞生长且包含细胞生长的全部营养，且温度适度，酶的浓度也要把握好。
答：1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。4、培...
答：为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。2、常见的微生物污染有支原体、细菌、真菌。支原体无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞有潜在影响，但体积小，不易鉴别，可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。细菌增殖快，在短时间内...
答：细胞培养的步骤包括取材、分离和培养，注意事项包括严格无菌操作、选择适当的培养液和保持一致的小牛血清来源。。1、取材阶段：根据不同组织的特点，采用相应的取材方法，确保材料的新鲜和严格无菌，以避免细胞污染。2、分离阶段：根据组织类型的不同，采用适当的分离方法，如酶消化、机械分离等，将细胞从组织...
答：一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。二、取材 在无菌...
答：尽量吹散细胞，注意控制吹打力度。细胞复苏操作步骤如下：复苏后，用6ml新鲜完全培养基，重悬细胞；离心后去除上清用1^2mL完全培养基重悬细胞，注意要少次轻柔吹打。瓶子竖着放进培养箱，以增加细胞局部密度，瓶盖保持透气；细胞生长需要稳定的环境，可每天观察1次，不要频繁拿出培养箱观察。
答：细胞培养过程中的注意事项 ⑴温度 温度过低时细胞生长缓慢甚至不生长。利用冷冻保藏细胞可保持细胞的原有分裂分化能力。温度过高导致细胞死亡。这主要是由酶和蛋白质所需要的最适温度决定的。多数生物大分子遇到高温后容易导致空间结构改变或者丧失(变性)。细胞膜遇到高温后容易变态。在自然界，既有耐高温的...
答：冻存与复苏的谨慎操作 冻存时推荐使用90%的FBS和10%的DMSO混合液，同时适量添加IL-2。复苏时，使用少量新鲜培养基轻柔重悬，注意控制吹打力度，复苏后的细胞应在稳定的环境中逐步恢复活性。以上是NK细胞培养的关键注意事项，欲了解更多关于肿瘤细胞研究的详细信息，不妨访问苏州阿尔法生物的官方网站，探索更...
答：首先培养基 胰酶 FBS什么的都是要滤一遍的 该灭菌的都要灭菌的 接下来开始实验~超净台要照紫外至少半小时，最好把细胞间也照下紫外 开始后先用酒精棉把超净台台面擦一下 点燃酒精灯 任何拿进超净台的东西最好先喷下酒精 除了从培养箱拿出来的培养皿。。任何封口的东西打开前先将封口处在酒精灯...
