NK细胞培养注意事项

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-06-26

深入了解NK细胞培养的精华要点


NK细胞作为悬浮生长的特殊细胞,它们的群体结构独特,通常形成松散的团簇,间杂着分散的单个细胞。在培养过程中,你可能会注意到细胞间隙中散落的死细胞和碎片,甚至偶尔可见到黑色颗粒,这可能是细胞碎片或附着物。大部分情况下,少量黑点并不影响细胞的正常生长,但如果黑点数量增多并开始繁殖,可能是细胞污染的迹象,务必密切关注,以防影响细胞活力甚至导致死亡。


IL-2的呵护与管理


NK-92细胞对IL-2极其敏感,它在细胞培养中的作用不可忽视。务必确保IL-2在培养基中保持稳定,如果IL-2在常温下长时间保存,应将其置于-20℃冷冻保存。解冻后,应在4℃冰箱中短暂存放,但切记4℃保存不应超过两周。新鲜配制的培养基需尽快使用,使用前要预热,使用后应放回4℃冰箱以保持活性。


细心对待离心操作


尽管离心是细胞培养的重要步骤,但对NK-92细胞来说,过度或不当的离心可能会带来问题。建议每2-3天进行一次半量换液,随后离心全量换液,以维持细胞的健康状态。在细胞生长状况不佳或细胞量减少时,尽量避免离心,以减少对细胞的冲击。


吹打与分散的艺术


细胞团块需要适当地吹打分散,但无需过度,以免造成细胞损伤。正常传代或离心后,轻轻吹打一到两次即可。如果团块过大,可以分散后再进行冻存,以确保冻存效果。记住,分散细胞时要控制力度,以保持细胞活力。


换液策略与传代技巧


换液方法有补液法和半换液法。补液法是定期补加新鲜培养基和IL-2,而半换液法则是通过静置沉降细胞团,吸出上清,再用新鲜培养基重悬。当细胞团过大且密度不均时,考虑进行传代,以维持最佳生长条件。


冻存与复苏的谨慎操作


冻存时推荐使用90%的FBS和10%的DMSO混合液,同时适量添加IL-2。复苏时,使用少量新鲜培养基轻柔重悬,注意控制吹打力度,复苏后的细胞应在稳定的环境中逐步恢复活性。


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