细胞培养—NK-92培养的注意事项
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-06-26
NK-92 (人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞) 是从外周血单核细胞衍生来的、IL-2依赖型NK细胞株。
下面将为同学们详细阐释NK-92细胞特性及培养注意事项。
NK-92细胞生长特性为悬浮生长，收到细胞后先观察瓶身是否完整，无漏液现象，培养基是否澄清透亮，在显微镜下观察细胞；
用75%的酒精擦拭瓶身后将细胞培养瓶先竖立静置2~4个小时，让细胞沉降到底部；细胞静置完后，将瓶中上面部分培养基小心吸出，留底部细胞和3ml左右培养基在原瓶；
吸出的细胞培养基离心收集细胞沉淀，离心转速1000转3分钟，或根据您的离心机实际情况而定，NK-92细胞对离心敏感，转速不宜过高；用2~3mlNK-92完培将得到的细胞沉淀重悬后，放回原瓶继续培养过夜，一个T25培养体积是5~6毫升；
NK-92细胞可按照200U/ml的浓度补加IL-2。
培养瓶为不透气瓶盖，一定要拧松到不掉的程度，使细胞充分透气；培养瓶横放，瓶口拧松透气，培养过夜；
显微镜下观察细胞，视细胞密度和培养基消耗情况，进行传代。不建议直接进行离心操作，因为经过运输颠簸和各种处理，细胞很可能达不到最佳状态。尽量不要吹散细胞团，加完液轻晃培养瓶即可。
NK-92细胞为悬浮生长，大部分细胞聚集成团，少数细胞分散，并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片，且培养过程中经常能观察黑色的颗粒和小黑点，这些黑点大概是细胞带的，一般少量黑点不增殖不会影响细胞的生长，若黑点繁殖生长则怀疑细胞污染，会影响细胞生长，甚至使细胞死亡。
NK-92细胞对IL-2敏感。培养基中IL-2降解，将导致细胞状态变差。IL-2长期保存温度为-20℃，解冻后置于4℃冰箱保存，4℃保存不应超过两周。配制好的新鲜培养基要尽快用完，使用前预热，使用完毕后放回4℃冰箱保存；
NK-92细胞对离心敏感。正常培养时，换液周期为2~3天，建议交替使用半量换液和离心换液法，即半量换液2~3次后，离心全量换液一次。尽量减少离心次数，细胞状态不佳或细胞量少的时候，一般不建议离心。
细胞团块是否需要吹散？
团块需要吹散，但不用刻意吹散成单颗；
正常传代或者离心换液后吹打，控制吹打次数以及力度，即使细胞都分散成单个，也会在1~2天内聚集起来；细胞团太大时，需要分散；
细胞冻存的时候，细胞需要尽量分散，否则影响冻存效果。
(1) 补液法： 每2~3天补加适量（根据培养容器和原来细胞悬液体积来定，T25瓶一次补液1~2毫升即可）新鲜培养基，同时补加200U/mlIL-2，补加2-3次之后，离心全部换液。
(2) 半换液法： 以T25瓶子（瓶中装有5ml培养基）为例，竖起瓶子静置一段时间（竖瓶前轻拍培瓶，让轻贴底部的细胞团浮起来），待细胞沉底（肉眼观察细胞沉底情况），小心吸出2.5ml上清转移到离心管，1000rpm 3~5min离心，离心后的细沉淀用2.5ml新鲜培养重悬后放回原瓶继续培养。细胞生长时，聚集的细胞团会逐渐增大，正常的细胞团在显微镜下呈现白色透亮状。若细胞聚集太多，出现细胞团中部发暗时，可进行传代。
将细胞团用移液器轻轻吹散（一般吹2-3次即可，吹打力度不可过大，否则会出现大量死细胞和细胞碎片），均分到两个瓶子里，每瓶再补充等量完全培养基。
细胞对营养要求很高，细胞量过多时会影响细胞生长；细胞团块过大时，需要稍微吹散，注意控制吹打次数，不需要全部吹散。
推荐使用90%FBS+10%DMSO的冻存液配比，NK-92细胞可适量补加IL-2；尽量吹散细胞，注意控制吹打力度。
细胞复苏操作步骤如下：
复苏后，用6ml新鲜完全培养基，重悬细胞；离心后去除上清用1^2mL完全培养基重悬细胞，注意要少次轻柔吹打。
瓶子竖着放进培养箱，以增加细胞局部密度，瓶盖保持透气；
细胞生长需要稳定的环境，可每天观察1次，不要频繁拿出培养箱观察。
细胞培养—NK-92培养的注意事项
答：NK-92细胞对IL-2敏感。培养基中IL-2降解，将导致细胞状态变差。IL-2长期保存温度为-20℃，解冻后置于4℃冰箱保存，4℃保存不应超过两周。配制好的新鲜培养基要尽快用完，使用前预热，使用完毕后放回4℃冰箱保存；NK-92细胞对离心敏感。正常培养时，换液周期为2~3天，建议交替使用半量换液和离心...
NK细胞培养注意事项
答：尽管离心是细胞培养的重要步骤，但对NK-92细胞来说，过度或不当的离心可能会带来问题。建议每2-3天进行一次半量换液，随后离心全量换液，以维持细胞的健康状态。在细胞生长状况不佳或细胞量减少时，尽量避免离心，以减少对细胞的冲击。吹打与分散的艺术 细胞团块需要适当地吹打分散，但无需过度，以免造...
nk-92培养不结团怎么办
答：1、使用培养瓶，在将其放入培养箱前。2、将封口膜去掉，瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换。3、了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。
求助nk92细胞及nk细胞的培养条件
答：NK92培养条件：alpha-MEM，12.5%胎牛血清，12.5%马血清，100-500单位IL-2，常规培养。
细胞培养|细胞冻存技术原理
答：2. 对培养物进行微生物污染物检测，特别是支原体，确保细胞没有任何的污染。在细胞的收集过程中，实验操作要尽可能的温和，避免细胞受损。1. 细胞的冷冻速率最适控制在让细胞有足够的时间脱水而又不被过度脱水导致细胞损害。对大多数细胞来说，每分钟降 1 至 3 ℃是合适的。2. 梯度降温法：4℃-30 ...
nk细胞培养培养基出现像油状的东西
答：您要问的是nk细胞培养培养基出现像油状的东西怎么办吗？检查细胞密度是否适宜，检查培养环境是否适宜等。1、检查细胞密度是否适宜，密度过高或过低，可以调整细胞密度后再进行培养。2、检查培养环境是否适宜，温度、湿度、氧气浓度等环境因素不合适，可以调整环境因素后再进行培养。
滋养细胞方式扩增NK,其安全性好吗?
答：关于滋养细胞方式扩增NK细胞的安全性，需要考虑以下几个方面：1. 滋养细胞的来源和特性：滋养细胞通常是非肿瘤细胞系，来自正常组织或体液，如骨髓或胚胎组织。这些细胞在体内具有正常的生理功能，且通常被认为是相对安全的。2. 滋养细胞的传播风险：使用滋养细胞扩增NK细胞时，需要确保滋养细胞和NK细胞在培...
NK细胞培养过程中,用血清代替血浆有关系吗
答：NK细胞培养过程中，用血清代替血浆有关系 培养细胞用的培养基为人工合成，但动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。主要作用有：1、提供基本营养物质或合成培养基所缺乏...
预防肺鳞癌复发和转移日本细胞疗法好不好?这种疗法的治疗流程有哪些...
答：这种疗法是一种能有效预防此类疾病复发和转移的方法，这种疗法是通过提取患者体内采集免疫细胞，然后进行体外培养和扩增，再回输到患者体内，激发与增强机体自身免疫功能来杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞等的一种方法。如有患者需要前往日本接受细胞疗法，可以找港安健康进行评估及预约。
在培养方式上,NK细胞与CIK细胞有何不同
答：CIK细胞培养：CIK细胞为一群特异型性细胞，从激活诱导到后期扩增非常容易，CIK细胞倍增数较大，对刚刚接触免疫细胞培养的人来说，更容易上手，一般按照流程操作，都会达到理想的效果，样本差异化不大。NK细胞培养：样本差异化较大，前期激活程序复杂，细胞扩增倍数有限。
下面将为同学们详细阐释NK-92细胞特性及培养注意事项。
NK-92细胞生长特性为悬浮生长，收到细胞后先观察瓶身是否完整，无漏液现象，培养基是否澄清透亮，在显微镜下观察细胞；
用75%的酒精擦拭瓶身后将细胞培养瓶先竖立静置2~4个小时，让细胞沉降到底部；细胞静置完后，将瓶中上面部分培养基小心吸出，留底部细胞和3ml左右培养基在原瓶；
吸出的细胞培养基离心收集细胞沉淀，离心转速1000转3分钟，或根据您的离心机实际情况而定，NK-92细胞对离心敏感，转速不宜过高；用2~3mlNK-92完培将得到的细胞沉淀重悬后，放回原瓶继续培养过夜，一个T25培养体积是5~6毫升；
NK-92细胞可按照200U/ml的浓度补加IL-2。
培养瓶为不透气瓶盖，一定要拧松到不掉的程度，使细胞充分透气；培养瓶横放，瓶口拧松透气，培养过夜；
显微镜下观察细胞，视细胞密度和培养基消耗情况，进行传代。不建议直接进行离心操作，因为经过运输颠簸和各种处理，细胞很可能达不到最佳状态。尽量不要吹散细胞团，加完液轻晃培养瓶即可。
NK-92细胞为悬浮生长，大部分细胞聚集成团，少数细胞分散，并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片，且培养过程中经常能观察黑色的颗粒和小黑点，这些黑点大概是细胞带的，一般少量黑点不增殖不会影响细胞的生长，若黑点繁殖生长则怀疑细胞污染，会影响细胞生长，甚至使细胞死亡。
NK-92细胞对IL-2敏感。培养基中IL-2降解，将导致细胞状态变差。IL-2长期保存温度为-20℃，解冻后置于4℃冰箱保存，4℃保存不应超过两周。配制好的新鲜培养基要尽快用完，使用前预热，使用完毕后放回4℃冰箱保存；
NK-92细胞对离心敏感。正常培养时，换液周期为2~3天，建议交替使用半量换液和离心换液法，即半量换液2~3次后，离心全量换液一次。尽量减少离心次数，细胞状态不佳或细胞量少的时候，一般不建议离心。
细胞团块是否需要吹散？
团块需要吹散，但不用刻意吹散成单颗；
正常传代或者离心换液后吹打，控制吹打次数以及力度，即使细胞都分散成单个，也会在1~2天内聚集起来；细胞团太大时，需要分散；
细胞冻存的时候，细胞需要尽量分散，否则影响冻存效果。
(1) 补液法： 每2~3天补加适量（根据培养容器和原来细胞悬液体积来定，T25瓶一次补液1~2毫升即可）新鲜培养基，同时补加200U/mlIL-2，补加2-3次之后，离心全部换液。
(2) 半换液法： 以T25瓶子（瓶中装有5ml培养基）为例，竖起瓶子静置一段时间（竖瓶前轻拍培瓶，让轻贴底部的细胞团浮起来），待细胞沉底（肉眼观察细胞沉底情况），小心吸出2.5ml上清转移到离心管，1000rpm 3~5min离心，离心后的细沉淀用2.5ml新鲜培养重悬后放回原瓶继续培养。细胞生长时，聚集的细胞团会逐渐增大，正常的细胞团在显微镜下呈现白色透亮状。若细胞聚集太多，出现细胞团中部发暗时，可进行传代。
将细胞团用移液器轻轻吹散（一般吹2-3次即可，吹打力度不可过大，否则会出现大量死细胞和细胞碎片），均分到两个瓶子里，每瓶再补充等量完全培养基。
细胞对营养要求很高，细胞量过多时会影响细胞生长；细胞团块过大时，需要稍微吹散，注意控制吹打次数，不需要全部吹散。
推荐使用90%FBS+10%DMSO的冻存液配比，NK-92细胞可适量补加IL-2；尽量吹散细胞，注意控制吹打力度。
细胞复苏操作步骤如下：
复苏后，用6ml新鲜完全培养基，重悬细胞；离心后去除上清用1^2mL完全培养基重悬细胞，注意要少次轻柔吹打。
瓶子竖着放进培养箱，以增加细胞局部密度，瓶盖保持透气；
细胞生长需要稳定的环境，可每天观察1次，不要频繁拿出培养箱观察。
答：NK-92细胞对IL-2敏感。培养基中IL-2降解，将导致细胞状态变差。IL-2长期保存温度为-20℃，解冻后置于4℃冰箱保存，4℃保存不应超过两周。配制好的新鲜培养基要尽快用完，使用前预热，使用完毕后放回4℃冰箱保存；NK-92细胞对离心敏感。正常培养时，换液周期为2~3天，建议交替使用半量换液和离心...
答：尽管离心是细胞培养的重要步骤，但对NK-92细胞来说，过度或不当的离心可能会带来问题。建议每2-3天进行一次半量换液，随后离心全量换液，以维持细胞的健康状态。在细胞生长状况不佳或细胞量减少时，尽量避免离心，以减少对细胞的冲击。吹打与分散的艺术 细胞团块需要适当地吹打分散，但无需过度，以免造...
答：1、使用培养瓶，在将其放入培养箱前。2、将封口膜去掉，瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换。3、了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。
答：NK92培养条件：alpha-MEM，12.5%胎牛血清，12.5%马血清，100-500单位IL-2，常规培养。
答：2. 对培养物进行微生物污染物检测，特别是支原体，确保细胞没有任何的污染。在细胞的收集过程中，实验操作要尽可能的温和，避免细胞受损。1. 细胞的冷冻速率最适控制在让细胞有足够的时间脱水而又不被过度脱水导致细胞损害。对大多数细胞来说，每分钟降 1 至 3 ℃是合适的。2. 梯度降温法：4℃-30 ...
答：您要问的是nk细胞培养培养基出现像油状的东西怎么办吗？检查细胞密度是否适宜，检查培养环境是否适宜等。1、检查细胞密度是否适宜，密度过高或过低，可以调整细胞密度后再进行培养。2、检查培养环境是否适宜，温度、湿度、氧气浓度等环境因素不合适，可以调整环境因素后再进行培养。
答：关于滋养细胞方式扩增NK细胞的安全性，需要考虑以下几个方面：1. 滋养细胞的来源和特性：滋养细胞通常是非肿瘤细胞系，来自正常组织或体液，如骨髓或胚胎组织。这些细胞在体内具有正常的生理功能，且通常被认为是相对安全的。2. 滋养细胞的传播风险：使用滋养细胞扩增NK细胞时，需要确保滋养细胞和NK细胞在培...
答：NK细胞培养过程中，用血清代替血浆有关系 培养细胞用的培养基为人工合成，但动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。主要作用有：1、提供基本营养物质或合成培养基所缺乏...
答：这种疗法是一种能有效预防此类疾病复发和转移的方法，这种疗法是通过提取患者体内采集免疫细胞，然后进行体外培养和扩增，再回输到患者体内，激发与增强机体自身免疫功能来杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞等的一种方法。如有患者需要前往日本接受细胞疗法，可以找港安健康进行评估及预约。
答：CIK细胞培养：CIK细胞为一群特异型性细胞，从激活诱导到后期扩增非常容易，CIK细胞倍增数较大，对刚刚接触免疫细胞培养的人来说，更容易上手，一般按照流程操作，都会达到理想的效果，样本差异化不大。NK细胞培养：样本差异化较大，前期激活程序复杂，细胞扩增倍数有限。
