细胞生物学：小鼠心肌细胞原代培养
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-06-26
一、概述
整体动物心肌细胞的增殖能力在出生后仅能维持一个短时期，小鼠在出生3周后DNA合成所需的酶的活性及心肌细胞的增殖能力就明显降低至成年鼠水平。小鼠心肌细胞的原代培养，一般选用生后1-10d的乳鼠心脏，尤以出生1-4d的较好，此时心肌细胞已分化充分，适于作各种研究，而出生4d以后的乳鼠心脏中分离出来的心肌细胞较慢发育成为有自律性搏动的心肌细胞。
二、[试剂]
1、培养液：1：1 混合的DMEM / F12 培养液，添加终浓度为10%小牛血清（FCS）、100IU/ml 青霉素、100μg/ml 链霉素。
2、消化液：胰酶（效价为1：250） 0.08%、胶原酶II（活力为150U/mg） 0.05% ，用pH 7.2-7.8 的D-Hanks溶液配制，-20 ℃保存。
3、 D-Hanks溶液（pH 7.2-7.8）：KCl 0.4 g ， KH2PO4 0.06 g ， NaCl 8.00g ， NaHCO3 0.35 g ， Na 2HPO4？7H2O 0.09 g ， 酚红 0.01 g 1L
三、[实验步骤]
1、取生后1-4d的乳鼠，用75%乙醇消毒皮肤，再用大头针固定乳鼠的头及四肢，剪开胸部皮肤，用75%乙醇消毒皮下组织，更换镊子及剪刀，开胸取出心脏，将心脏放入盛有D-Hanks溶液的平皿（或青霉素瓶）中，剪去心房，剪开心室，用D-Hanks溶液冲洗三次，去除残留积血后，将心脏剪成1mm3 大小的碎片，再将心脏碎片转移至离心管中，加5ml左右消化液，37℃消化5 min，自然沉淀，弃上清，再加5ml左右消化液，37℃消化20min（每隔2min振摇几下），用吸管吹打1min 后，将未消化完全的心脏碎片吸出至另一离心管中，加入2ml冷的培养液终止消化，1000 rpm 5min ，弃上清，沉淀中加入D-Hanks溶液2ml， 1500 rpm 10min ，弃上清，沉淀中加入培养液2ml，用吸管吹打制成细胞悬液。（为节约时间，以下步骤省略）上述未消化完全的心脏碎片补加5ml左右消化液后继续消化，同样操作，合并细胞悬液后放入培养瓶中置二氧化碳培养箱中（37℃ 5%CO2）培养。
动物细胞培养的原理是什么
答：附：1用途：指动物、(包括哺乳动物、昆虫、鱼类、禽类等)细胞在体外的培养技术，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟体内正常生理状态下生存的基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长和繁殖的方法。体外培养的细胞可分为原代细胞和传代细胞。动物细胞培养给细胞生物学的研究带来了极大的方便，...
细胞生物学名词解释
答：细胞世界的扩展：传代的秘密 - 原代细胞经过一次次增殖，它们分散并繁衍，这就是我们熟知的传代培养，细胞家族的无限接力。癌细胞的永恒记忆：细胞系的诞生 - 在恶性肿瘤的阴影下，细胞系以独特的生命周期，持续复制，成为不朽的警示。细胞的守护者：质膜与生物膜 - 细胞表面的细胞膜，又称质膜，犹如一道...
现代医学生物学实验基础教程包括哪些细胞生物学实验?
答：实验九：</观察培养细胞，学会识别和记录细胞生长状态。实验十：</细胞悬液中细胞数目的测定，掌握细胞计数技巧。实验十一：</细胞活力检测，评估细胞健康状况。实验十二：</染色体制备与观察，理解细胞遗传信息的呈现。二、细胞与细胞器分离技术</ 实验十三：</心肌细胞的分离与纯化，锻炼精细操作技能。实...
原代细胞的介绍
答：原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA，RNA和遗传学研究等，还可应用于当今热门的生物医药产业如...
《医学细胞生物学》名词解释
答：细胞生物学：微观世界的探索者</ - 这门学科致力于研究细胞的复杂结构与功能，以及其在生命进程中的动态变化。科学的观察工具</ - 从普通光学显微镜到高精度的电子显微镜，科学家们利用它们解析细胞的微观世界，包括透射电镜、扫描电镜与分析电镜。细胞培养技术</ - 从原代培养到细胞融合，科学家们通过...
细胞纯化是原代培养前还是传代培养前细胞系的建立
答：传代培养是组织培养常规保种方法之一。也是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。原代培养是将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中...
基因转染属于药理学干预手段是吗
答：在进行较为严格的对比性实验研究时，将含药血清添加于培养细胞、脾虚证模型动物干扰素γ及白细胞介素4 mRNA表达的变化。各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株原代培养（primary culture）又名初代培养。其特点是细胞或组织刚离开机体。但毕竟还有许多细胞尚无法获得细胞系（株），促进儿茶酚胺...
哪位做过脂肪细胞原代培养
答：摘??要:??目的 建立人前脂肪细胞原代培养方法,以更深入地研究人体脂肪组织增生的生物学特征。??方法 选用成人的腹部脂肪组织,采用原代消化细胞培养法培养出棱形细胞;同时取皮肤组织,进行成纤维细胞培养作为对照。??结果 培养出的棱形细胞成分均一,增殖旺盛,分化率高。经形态学动态变化的观察,生长曲线及油红O脂肪染...
动物细胞培养:基本技术指南目录
答：第2章是培训纲要，明确了目标和不同级别的练习，从基础操作到高阶技术，以及特殊领域的实践。第3章深入解析细胞生物学，包括细胞在培养环境中的生存条件、黏附、增殖、分化和信号传递等核心概念。4.1-4.5章阐述了实验室设计与布局，包括实验室规划、设施建设和维护，以及无菌操作的重要性。第5章专门...
为什么说细胞培养是细胞生物学研究的最基本技术
答：因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术 细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由...
整体动物心肌细胞的增殖能力在出生后仅能维持一个短时期，小鼠在出生3周后DNA合成所需的酶的活性及心肌细胞的增殖能力就明显降低至成年鼠水平。小鼠心肌细胞的原代培养，一般选用生后1-10d的乳鼠心脏，尤以出生1-4d的较好，此时心肌细胞已分化充分，适于作各种研究，而出生4d以后的乳鼠心脏中分离出来的心肌细胞较慢发育成为有自律性搏动的心肌细胞。
二、[试剂]
1、培养液：1：1 混合的DMEM / F12 培养液，添加终浓度为10%小牛血清（FCS）、100IU/ml 青霉素、100μg/ml 链霉素。
2、消化液：胰酶（效价为1：250） 0.08%、胶原酶II（活力为150U/mg） 0.05% ，用pH 7.2-7.8 的D-Hanks溶液配制，-20 ℃保存。
3、 D-Hanks溶液（pH 7.2-7.8）：KCl 0.4 g ， KH2PO4 0.06 g ， NaCl 8.00g ， NaHCO3 0.35 g ， Na 2HPO4？7H2O 0.09 g ， 酚红 0.01 g 1L
三、[实验步骤]
1、取生后1-4d的乳鼠，用75%乙醇消毒皮肤，再用大头针固定乳鼠的头及四肢，剪开胸部皮肤，用75%乙醇消毒皮下组织，更换镊子及剪刀，开胸取出心脏，将心脏放入盛有D-Hanks溶液的平皿（或青霉素瓶）中，剪去心房，剪开心室，用D-Hanks溶液冲洗三次，去除残留积血后，将心脏剪成1mm3 大小的碎片，再将心脏碎片转移至离心管中，加5ml左右消化液，37℃消化5 min，自然沉淀，弃上清，再加5ml左右消化液，37℃消化20min（每隔2min振摇几下），用吸管吹打1min 后，将未消化完全的心脏碎片吸出至另一离心管中，加入2ml冷的培养液终止消化，1000 rpm 5min ，弃上清，沉淀中加入D-Hanks溶液2ml， 1500 rpm 10min ，弃上清，沉淀中加入培养液2ml，用吸管吹打制成细胞悬液。（为节约时间，以下步骤省略）上述未消化完全的心脏碎片补加5ml左右消化液后继续消化，同样操作，合并细胞悬液后放入培养瓶中置二氧化碳培养箱中（37℃ 5%CO2）培养。
答：附：1用途：指动物、(包括哺乳动物、昆虫、鱼类、禽类等)细胞在体外的培养技术，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟体内正常生理状态下生存的基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长和繁殖的方法。体外培养的细胞可分为原代细胞和传代细胞。动物细胞培养给细胞生物学的研究带来了极大的方便，...
答：细胞世界的扩展：传代的秘密 - 原代细胞经过一次次增殖，它们分散并繁衍，这就是我们熟知的传代培养，细胞家族的无限接力。癌细胞的永恒记忆：细胞系的诞生 - 在恶性肿瘤的阴影下，细胞系以独特的生命周期，持续复制，成为不朽的警示。细胞的守护者：质膜与生物膜 - 细胞表面的细胞膜，又称质膜，犹如一道...
答：实验九：</观察培养细胞，学会识别和记录细胞生长状态。实验十：</细胞悬液中细胞数目的测定，掌握细胞计数技巧。实验十一：</细胞活力检测，评估细胞健康状况。实验十二：</染色体制备与观察，理解细胞遗传信息的呈现。二、细胞与细胞器分离技术</ 实验十三：</心肌细胞的分离与纯化，锻炼精细操作技能。实...
答：原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA，RNA和遗传学研究等，还可应用于当今热门的生物医药产业如...
答：细胞生物学：微观世界的探索者</ - 这门学科致力于研究细胞的复杂结构与功能，以及其在生命进程中的动态变化。科学的观察工具</ - 从普通光学显微镜到高精度的电子显微镜，科学家们利用它们解析细胞的微观世界，包括透射电镜、扫描电镜与分析电镜。细胞培养技术</ - 从原代培养到细胞融合，科学家们通过...
答：传代培养是组织培养常规保种方法之一。也是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。原代培养是将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中...
答：在进行较为严格的对比性实验研究时，将含药血清添加于培养细胞、脾虚证模型动物干扰素γ及白细胞介素4 mRNA表达的变化。各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株原代培养（primary culture）又名初代培养。其特点是细胞或组织刚离开机体。但毕竟还有许多细胞尚无法获得细胞系（株），促进儿茶酚胺...
答：摘??要:??目的 建立人前脂肪细胞原代培养方法,以更深入地研究人体脂肪组织增生的生物学特征。??方法 选用成人的腹部脂肪组织,采用原代消化细胞培养法培养出棱形细胞;同时取皮肤组织,进行成纤维细胞培养作为对照。??结果 培养出的棱形细胞成分均一,增殖旺盛,分化率高。经形态学动态变化的观察,生长曲线及油红O脂肪染...
答：第2章是培训纲要，明确了目标和不同级别的练习，从基础操作到高阶技术，以及特殊领域的实践。第3章深入解析细胞生物学，包括细胞在培养环境中的生存条件、黏附、增殖、分化和信号传递等核心概念。4.1-4.5章阐述了实验室设计与布局，包括实验室规划、设施建设和维护，以及无菌操作的重要性。第5章专门...
答：因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术 细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由...
