原代细胞的介绍

动物组织经胰蛋白酶等消化、分散，获得单个细胞，再生长于培养皿中。大多数组织可以制备原代细胞，但生长的快慢及难易程度不一。肾和睾丸最常用，甲状腺细胞生长较慢，只用于某些特定的病毒如猪传染性肠胃炎病毒的培养。

原代细胞传代基本技术

1.
选用原代细胞生长状态好(90-95%)，生长数量大于5×105进行传代。

2.
吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS(pH7.4)清洗细胞培养瓶2次。

3.
1ml细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。

4.
细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养数分钟后，在显微镜下观察原代细胞的消化状态。











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请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部或底部至大部分贴壁细胞悬浮，加入细胞终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。

5.
吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，再吸出细胞悬浮液，转入15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

6.
弃离心管中液体，加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。

细胞分瓶后，加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中，置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。

原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA，RNA和遗传学研究等，还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。原代细胞在生物医药领域有不可替代性作用，市场前景广阔。