用紫外分光光度法测定核酸的缺点有哪些
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-08-05
紫外可见分光光度计法测核酸含量有何优缺点
在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同,紫外吸收光也随之表现出明显的差异,它们的摩尔消光系数也随之不同.所以,在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行.
核酸的摩尔消光系数（或吸收系数）,通常以ε（ρ）来表示,即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值（即光密度,或称为光吸收）.核酸的摩尔消光系数不是一个常数,而是依赖于材料的前处理、溶液的pH 和离子强度发生变化.它们的经典数值（pH = 7.0）如下：
DNA 的ε（ρ）= 6 000 8 000
RNA 的ε（ρ）= 7 000 10 000
小牛胸腺DNA 钠盐溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 6 600,DNA 的含磷量为9.2%,含1μg/mL DNA 钠盐的溶液光密度为0.020.RNA 溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 7 700~7 800,RNA 的含磷量为9.5%,含1μg /mL RNA 溶液的光密度为0.022~0.024.采用紫外分光光度法测定核酸含量时,通常规定：在260nm 波长下,浓度为1μg/mL 的 DNA 溶液其光密度为0.020,而浓度为1μg/mL 的RNA 溶液其光密度为0.024.因此,测定未知浓度的DNA （RNA）溶液的光密度OD260nm,即可计算测出其中核酸的含量.该法简单、快速、灵敏度高,如核酸3μg／mL 的含量即可测出.对于含有微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质的核酸样品,测定误差较小,若样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质,测定误差较大,应设法事先除去.
由于降解或水解作用,核酸的光密度可以增高约40％,这就是众所周知的增色效应（hyperchromic effect）.在大分子的核酸中,氢键和π-键相互作用改变了碱基的共振行为.因此,核酸的光密度低于构成它的核苷酸的光密度,该现象称为减色效应（hypochromic effect）.
紫外可见分光光度计法测核酸含量有何优缺点
答：方便，灵敏，除了知道含量，还知道组成成分。从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。在最大吸收波长...
用紫外分光光度法测定核酸的缺点有哪些
答：在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同,紫外吸收光也随之表现出明显的差异,它们的摩尔消光系数也随之不同.所以,在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行.核酸的摩尔消光系数（或吸收系数）,通常以ε（ρ）来表示,即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值（即光密度,或称为...
紫外分光光度计法测核酸含量实验误差来源有哪些?
答：5，测量时的操作误差！（人为因素）
紫外可见分光光度法测核酸含量的误差来源是什么?如何排除
答：如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。
紫外吸收法测定核酸含量
答：核酸对紫外光的最大吸收凤位于260nm处，而蛋白质位于280nm处，260nm的吸收仅为核酸的1/10，因此蛋白质含量较底时对实验影响不大；当样品中蛋白质含量较高时，将样品移至试管中，加入一定量稀盐溶液，用玻璃棒小心搅拌，使蛋白质沉淀。滴加少量25%SDS溶液，边加边轻轻搅拌。加毕，在60℃水浴中保温...
当试样中含有核苷酸类杂质时,如何用紫外分光光度计法测定核酸含量?
答：在使用紫外分光光度计法测定核酸含量时，如果试样中含有核苷酸类杂质，可能会影响测定结果。为了减小干扰，可以采取如下措施：1. 首先将试样在高速离心后，去除其中的杂质，保留核酸。2. 在选择紫外分光光度计的波长时，尽量选择纯净试样的最大吸收波长，避免同时被杂质吸收。3. 对于一些不易去除的杂质，...
DNA或RNA样品不纯,用紫外分光光度计测定其浓度和纯度的准确性会受到影响...
答：核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能...
请教紫外吸收法测定核酸含量的相关问题
答：具体到RNA测定则是将10微升RNA溶液放入样品池中选择260 nm波长与280 nm波长对其进行吸光度值扫描。一般来说，测核酸浓度都是用260nm的光吸收值来决定，同时用260/280的比值来判断有无蛋白质污染。理想的比值是1.8～2.0左右。仪器经过光度扫描后会直接生成浓度值显示在屏幕上，不需要经过后续的人工计算...
紫外分光光度法测总核酸的含量
答：紫外光度法可测出核算的质量摩尔浓度：m B =M r A 260 /εL 对于纯核酸样品，DNA在A260nm的A值为0.020，RNA则为0.022~0.024即一个A值相当于50ug/mL双螺旋DNA，40ug/mL RNA或单链DNA。此法简便、快速、灵敏度高，DNA和RNA的产物均可测定，但色素及其他具有紫外吸收的物质对测定有影响。
检测核酸纯度方法
答：（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。...
方便，灵敏，除了知道含量，还知道组成成分。
从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。
可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。
在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。
扩展资料：
物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。在一定条件下，物质的吸收系数是恒定的，且与入射光的强度、吸收池厚度及样品浓度无关。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后，可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸光度。
即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称之为比色分析。
参考资料来源：百度百科-紫外-可见分光光度法
紫外光度法可测出核算的质量摩尔浓度：m B =M r A 260 /εL 对于纯核酸样品，DNA在A260nm的A值为0.020，RNA则为0.022~0.024即一个A值相当于50ug/mL双螺旋DNA，40ug/mL RNA或单链DNA。 此法简便、快速、灵敏度高，DNA和RNA的产物均可测定，但色素及其他具有紫外吸收的物质对测定有影响。
核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（－C＝C一C＝C 一）,能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光.核酸（DNA,RNA）的最大紫外吸收值在260nm 处.遵照Lambert-Beer 定律,可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量.在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同,紫外吸收光也随之表现出明显的差异,它们的摩尔消光系数也随之不同.所以,在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行.
核酸的摩尔消光系数（或吸收系数）,通常以ε（ρ）来表示,即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值（即光密度,或称为光吸收）.核酸的摩尔消光系数不是一个常数,而是依赖于材料的前处理、溶液的pH 和离子强度发生变化.它们的经典数值（pH = 7.0）如下：
DNA 的ε（ρ）= 6 000 8 000
RNA 的ε（ρ）= 7 000 10 000
小牛胸腺DNA 钠盐溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 6 600,DNA 的含磷量为9.2%,含1μg/mL DNA 钠盐的溶液光密度为0.020.RNA 溶液（pH = 7.0）的ε（ρ）= 7 700~7 800,RNA 的含磷量为9.5%,含1μg /mL RNA 溶液的光密度为0.022~0.024.采用紫外分光光度法测定核酸含量时,通常规定：在260nm 波长下,浓度为1μg/mL 的 DNA 溶液其光密度为0.020,而浓度为1μg/mL 的RNA 溶液其光密度为0.024.因此,测定未知浓度的DNA （RNA）溶液的光密度OD260nm,即可计算测出其中核酸的含量.该法简单、快速、灵敏度高,如核酸3μg／mL 的含量即可测出.对于含有微量蛋白质和核苷酸等吸收紫外光物质的核酸样品,测定误差较小,若样品内混杂有大量的上述吸收紫外光物质,测定误差较大,应设法事先除去.
由于降解或水解作用,核酸的光密度可以增高约40％,这就是众所周知的增色效应（hyperchromic effect）.在大分子的核酸中,氢键和π-键相互作用改变了碱基的共振行为.因此,核酸的光密度低于构成它的核苷酸的光密度,该现象称为减色效应（hypochromic effect）.
答：方便，灵敏，除了知道含量，还知道组成成分。从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。在最大吸收波长...
答：在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同,紫外吸收光也随之表现出明显的差异,它们的摩尔消光系数也随之不同.所以,在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行.核酸的摩尔消光系数（或吸收系数）,通常以ε（ρ）来表示,即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值（即光密度,或称为...
答：5，测量时的操作误差！（人为因素）
答：如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。
答：核酸对紫外光的最大吸收凤位于260nm处，而蛋白质位于280nm处，260nm的吸收仅为核酸的1/10，因此蛋白质含量较底时对实验影响不大；当样品中蛋白质含量较高时，将样品移至试管中，加入一定量稀盐溶液，用玻璃棒小心搅拌，使蛋白质沉淀。滴加少量25%SDS溶液，边加边轻轻搅拌。加毕，在60℃水浴中保温...
答：在使用紫外分光光度计法测定核酸含量时，如果试样中含有核苷酸类杂质，可能会影响测定结果。为了减小干扰，可以采取如下措施：1. 首先将试样在高速离心后，去除其中的杂质，保留核酸。2. 在选择紫外分光光度计的波长时，尽量选择纯净试样的最大吸收波长，避免同时被杂质吸收。3. 对于一些不易去除的杂质，...
答：核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能...
答：具体到RNA测定则是将10微升RNA溶液放入样品池中选择260 nm波长与280 nm波长对其进行吸光度值扫描。一般来说，测核酸浓度都是用260nm的光吸收值来决定，同时用260/280的比值来判断有无蛋白质污染。理想的比值是1.8～2.0左右。仪器经过光度扫描后会直接生成浓度值显示在屏幕上，不需要经过后续的人工计算...
答：紫外光度法可测出核算的质量摩尔浓度：m B =M r A 260 /εL 对于纯核酸样品，DNA在A260nm的A值为0.020，RNA则为0.022~0.024即一个A值相当于50ug/mL双螺旋DNA，40ug/mL RNA或单链DNA。此法简便、快速、灵敏度高，DNA和RNA的产物均可测定，但色素及其他具有紫外吸收的物质对测定有影响。
答：（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。...
