结核分枝杆菌的微生物学检查程序
结核杆菌是德国科学家柯赫（Robert Koch)发现的。 早在1882年，德国细菌学家柯赫（Robert Koch，1843-1910）就已证明结核分枝杆菌是结核病的病原菌。本菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见。随着抗结核药物的不断发展和卫生生活状况的改善，结核的发病率和死亡率曾一度大幅下降。 结核分枝杆菌（M.tuberculosis），俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300人/10万，居各种疾病死亡原因之首，建国后人民生活水平提高，卫生状态改善，特别是开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，结核病的发病率和死亡率大为降低。 但应注意，世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势。拓展资料：柯赫（Robert Koch， 1843～1910） 德国细菌学家。曾做过医生、大学教授、研究所长。对微生物学有卓越贡献，和巴斯德一起被公认为近代微生物学的奠基人。结核分枝杆菌不发酵糖类。与牛分枝杆菌的区别在于结核分枝杆菌可合成烟酸和还原硝酸盐，而牛分枝杆菌不能。热触酶试验对区别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌有重要意义。结核分枝杆菌大多数触酶试验阳性，而热触酶试验阴性； 非结核分枝杆菌则大多数两种试验均阳性。热触酶试验检查方法是将浓的细菌悬液置68℃水浴加温20分钟，然后再加H2O2。观察是否产生气泡，有气泡者为阳性。
主要是标本涂片染色显微镜检查。显微镜检查可从患者鼻粘膜或皮损处取材，用抗酸性染色后检查。一般瘤型和界线类患者标本中可找到细菌在细胞内存在，有诊断意义。结核样型患者中很少找到细菌。欲提高检查的阳性率，也可以用金胺染色后以荧光显微镜检查。麻风菌素试验(lepromin test)对诊断没有重要意义，因与结核菌有交叉反应，但可用于麻风的分型和了解预后。方法是应用麻风结节经生理盐水提取制成麻风菌素(lepromin)作皮肤试验，取0.1 ml注射于前臂皮内。反应有两种：一种为早期反应，出现于注射后3～4d，红肿直径5mm以上者为阳性，表明患者对麻风菌素敏感; 另一种为后期反应，出现于3～4周，表明患者对麻风有免疫。
（1）病料采集：取病畜禽的组织，肝，肺，脾等体液、分泌物及局部病灶的渗出液。
（2）镜检：对原始病料涂片进行革兰氏染色，镜检，应为革兰氏阴性。用印度墨汁等染料染色，可见清晰的荚膜。
（3）培养：同时接种鲜血琼脂和麦康凯琼脂培养基，37℃培养24h，观察细菌的生长情况，菌落特征、溶血性，并染色镜检。
（4）生化试验：多杀性巴氏杆菌在48h内可分解葡萄糖、果糖、单奶糖、蔗糖和甘露糖，产酸不产气。
微生物学的主要任务：
1、在自然界物质循环中的作用。
2、空气和水净化、污水处理。
3、工农业生产：细菌、代谢产物、代谢活性。
4、对生命科学的贡献。
扩展资料：
微生物必须借助于显微镜才能看见的生物。在空气、陆地、河流和海洋里都有微生物分布，在人、畜和植物体内也有许多种微生物存在，有些是致病的，对人类有害，但是也有许多微生物对人类有益。
如制酒用的酒曲就是用某些微生物做的，整个发酵工业都离不开微生物。存在于土壤中的微生物叫作土壤微生物，它的种类也很多，大致可以分成细菌、真菌、放线菌等几大类，还有一些藻类、线虫等也可归入土壤微生物中。
标本的选择应根据感染部位而异，可取痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸腔积液、腹腔积液、分泌液或组织细胞。结核患者各感染部位的标本中大多数混有其他细菌，因此，必须采取适宜的方法抑制污染菌。
痰收集最好是患者清晨的第一口痰，置于清洁干燥无菌的玻璃瓶内送检。尿液收集应取晨尿送检，必要时作无菌导尿送检，诊断泌尿道结核通常需3～5份标本。胃液采集可于空腹时抽取，置无菌管中送检。脑脊液、胸腔积液、腹腔积液及关节液等需无菌抽取并置于无菌试管中送检。
脑脊液标本静置后，表面可有细薄凝块，取凝块作涂片或接种培养。采集脓液时应直接从溃疡处取脓汁或分泌物。深部脓肿用无菌注射器抽取，置无菌试管中送检。棉拭子采集的标本应直接放置在肉汤中培养。
形态学检查方法：
(1)直接涂片染色镜检：用接种环取患者痰液中浓厚部分或离心沉淀的尿沉淀物2～3接种环涂片，作厚涂片进行齐-尼抗酸染色。为提高镜检敏感性，也可用金胺“O”染色，在荧光显微镜下结核分枝杆菌呈现金黄色荧光。
镜检时应仔细查遍整个涂片或观察至少100个视野。结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色，其他细菌和细胞为蓝色。经免疫荧光染色的结核分枝杆菌，在黑色背景中呈亮黄色。涂片镜检结果应报告“找到抗酸杆菌或未找到抗酸杆菌”。
扩展资料：
结核分枝杆菌的培养特性：
结核分枝杆菌专性需氧。最适温度为37℃，低于30℃不生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。在一般培养基中每分裂1代需时18～24小时，营养丰富时只需5小时。
初次分离需要营养丰富的培养基。常用的有罗氏（Lowenstein-Jensen）固体培养基，内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。孔雀绿可抑制杂菌生长，便于分离和长期培养。蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长。
根据接种菌多少，一般2～4周可见菌落生长。菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明。在液体培养基中可能由于接触营养面大，细菌生长较为迅速。一般1～2周即可生长。临床标本检查液体培养比固体培养的阳性率高数倍。
参考资料来源：百度百科-结核分枝杆菌
标本 标本的选择根据感染部位。可取痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸、腹水。其他肺外感染可取血或相应部位分泌液或组织细胞。
直接涂片镜检 标本直接涂片或集菌后涂片，用抗酸染色。若找到抗酸阳性菌即可初步诊断。抗酸染色一般用ziehl-neelsen法。为加强染色，可用ik(intensified kinyoun)法染色。将石炭酸复红染色过夜，用0.5% 盐酸乙醇脱色30s，则包括大多结核分枝杆菌l型也可着色。为提高镜检敏感性，也可用金胺染色，在荧光显微镜下结核分枝杆菌呈显金黄色荧光。
浓缩集菌 先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% naoh（痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核分枝杆菌l型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。
分离培养 将经中和集菌材料接种于固体培养基，器皿口加橡皮塞于37℃培养，每周观察1次。结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2～4周长成肉眼可见的落菌。液体培养可将集菌材料滴加于含血清的培养液，则可于1～2周在管底见有颗粒生长。取沉淀物作涂片，能快速获得结果，并可进一步作生化、药敏等测定和区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。国内学者已证明结核分枝杆菌l型可存在于血细胞内或粘附于细胞表面。这种患者往往血沉加快，用低渗盐水溶血后立即接种高渗结核分枝杆菌l型培养基能提高培养阳性率。
动物试验 将集菌后的材料注射于豚鼠腹股沟皮下，3～4周后若局部淋巴结肿大，结核菌素试验阳转，即可进行解剖。观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变，并作形态、培养等检查。若6～8周仍不见发病，也应进行解剖检查。
快速诊断 一般涂片检查菌数需5x103～4/ml,培养需1x102/ml,标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果，且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应（pcr）扩增技术应用于结核分枝杆菌dna鉴定，每ml中只需含几个细菌即可获得阳性，且1?2d得出结果。操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。又细菌l型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出dna，以致造成pcr假阴性。用组织磨碎器充分研磨使细胞破裂后，则可出现阳性。目前有条件的单位使用bactec法，以含14c棕榈酸作碳源底物的7h12培养基，测量在细菌代谢过程中所产生的14c量推算出标本中是否有抗酸杆菌，5～7d就可出报告。
答：（1）病料采集：取病畜禽的组织，肝，肺，脾等体液、分泌物及局部病灶的渗出液。（2）镜检：对原始病料涂片进行革兰氏染色，镜检，应为革兰氏阴性。用印度墨汁等染料染色，可见清晰的荚膜。（3）培养：同时接种鲜血琼脂和麦康凯琼脂培养基，37℃培养24h，观察细菌的生长情况，菌落特征、溶血性，并染色...
答：浓缩集菌 先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% naoh（痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核分枝杆菌l型与非结核分枝杆菌...
答：微生物学检查是诊断结核病的关键，通常通过直接涂片镜检、浓缩集菌培养、动物试验和快速诊断技术如PCR来进行。直接涂片和培养能够初步找到抗酸阳性菌，而PCR则能快速且敏感地检测出少量结核杆菌。尽管TIGRA有其优势，但目前尚不能完全取代传统的结核菌素试验，仍需进一步研究和改进。
答：医学Koch是指以Robert Koch（罗伯特·科赫）的名字命名的实验室方法，主要用于诊断结核病和其他微生物感染的疾病。该方法基于科学家罗伯特·科赫的工作，他是结核分枝杆菌的发现者，并因此获得了诺贝尔奖。医学Koch的主要原则是，要在感染病人的身体中发现病原体，并通过一系列试验确认它的存在。医学Koch的试...
答：平板凝集试验（也称为凝聚试验）是一种常见的微生物学诊断方法。它可以用来检测和识别细菌的菌株，并测定其抗药性。平板凝集试验通常用于检测和识别以下细菌：淋巴结结核（Mycobacterium tuberculosis）肺结核（Mycobacterium tuberculosis）肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）感染性心内膜炎（Streptococcus pneumoniae...
答：1.形态学检查：①细菌染色检查法：革兰染色法；抗酸染色法是鉴定结核和麻风等分枝杆菌属细菌的重要方法；②暗视野检查，易于观察不染色活菌，故常用于检查活菌、螺旋体及其动力。2.病原菌的分离培养。3.生化试验用糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验等对细菌的酶系统和其代谢产物的检查。4.血清学...
答：4、气相色谱法 气相色谱应用到微生物的检测中，主要是依据不同微生物的化学组成或其产生的代谢产物各异，利用上述色谱检测可直接分析各种体液中的细菌代谢产物、细胞中的脂肪酸、蛋白质、氨基酸、多肽、多糖等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。5、高效液相色谱法 利用高效液相...
答：1.1 直接涂片镜检病原微生物体形体积微小,大多无色半透明状,将其染色后可借助显微镜观察其大小、形态、排列等。直接涂片染色镜检简便快速,对那些具有特殊形态的病原微生物感染仍然适用,例如淋球菌感染、结核分枝杆菌、螺旋体感染等的早期初步诊断。直接涂片镜检不需要特殊的仪器和装置,在基层实验室里仍然是十分重要的病...
答：欲提高检查的阳性率，也可以用金胺染色后以荧光显微镜检查。麻风菌素试验(lepromin test)对诊断没有重要意义，因与结核菌有交叉反应，但可用于麻风的分型和了解预后。方法是应用麻风结节经生理盐水提取制成麻风菌素(lepromin)作皮肤试验，取0.1 ml注射于前臂皮内。反应有两种：一种为早期反应，出现于...
答：使得观察结果更为直观和准确。这种染色法因其对酸性环境的抵抗性而得名，能够有效地区分出在酸性环境下不易被染色的特定细菌，如结核分枝杆菌，对于诊断和研究这类细菌感染疾病具有重要意义。通过抗酸染色，微生物学家可以清楚地观察到细菌的形态和分布，从而为疾病的诊断和治疗提供关键信息。
