怎样制备微生物回收实验用的供试液
你好，微生物检测方法在中国药典2011年版二部附录XI J，具体方法为附录XI J微生物限度检查法
微生物限度检査法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅
料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、
酵母菌数及控制菌检查。
微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁
净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格
遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品
中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期
按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方
法》的现行国家标准进行洁净度验证。
供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活
剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。
除另有规定外，本检査法中细菌及控制菌培养温度为
30?35°C;霉菌、酵母菌培养温度为23?28°C
检验结果以lg,lml、10g、10ml或10cm
2为单位报告，特
殊品种可以最小包装单位报告。
检验量
检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml或cm
2
)。
除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml;膜剂
为100cm
2
?贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要
求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml(其中
10g或10ml用于阳性对照试验）。
检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂
还不得少于4片。
一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单
位）的3倍量供试品。
供试液的制备
根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法
制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不
应超过451C。供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过
1小时。
除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。
1. 液体供试品
取供试品10ml ，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至
100ml，混匀，作为1 ： 10的供试液。油剂可加人适量的无菌
聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混
合的供试品原液作为供试液。
2. 固体、半固体或黏稠性供试品
取供试品10g ，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至
100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1 ： 10的供试
液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温
使供试品分散均匀。
3. 需用特殊方法制备供试液的供试品
(1) 非水溶性供试品
方法1取供试品5g(或5ml)，加至含溶化的（温度不超
过45'C)5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无
菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加人45"的
pH7. 0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使供
试品充分乳化，作为1 ： 20的供试液。
方法2 取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙
酯（制法见附录H H无菌检査法中供试品的无菌检查项下）
和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯
的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加人45\：的pH7.0
无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇5?：L0分钟，萃取，静
置使油水明显分层，取其水层作为1 ?? 10的供试液。
(2) 膜剂供试品.
取供试品100cm
2
，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓
冲液lOOmK必要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为1 ： 10的
供试液(3) 肠溶及结肠溶制剂供试品
取供试品10g,加pH6. 8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制
剂）或pH7. 6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，
置45t:水浴中，振摇，使溶解，作为1 :
10的供试液。
(4) 气雾剂、喷II剂供试品
取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1小时，取出，迅速消
毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室
温，并轻轻转动容器,使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器
吸出全部药液，加至适量的PH7. 0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
(若含非水溶性成分，加适量的无菌聚山梨酯80)中，混匀，取
相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1 ： 10的供试液。
(5) 贴剂供试品
取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或
塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱
布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置
于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）的
稀释剂中，用力振荡至少30分钟，制成供试液。贴剂也可采
用其他适宜的方法制备成供试液。
(6) 具抑菌活性的供试品
当供试品有抑菌活性时，采用下列方法进行处理，以消除
供试液的抑菌活性，再依法检查。常用的方法如下。
① 培养基稀释法取规定量的供试液，至较大量的培养
基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。测
定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级的供试液2ml,每
lml供试液可等量分注多个平皿，倾注琼脂培养基,混匀，凝固，
培养，计数。每lml供试液所注的平皿中生长的菌落数之和即
为lml的菌落数，计算每lml供试液的平均菌落数，按平皿法
计数规则报告菌数;控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。
② 离心沉淀法取一定量的供试液，500转/分钟离心3
分钟，取全部上清液混合。用于细菌检査。
③ 薄膜过滤法见细菌、霉菌及酵母菌计数项下的"薄
膜过滤法"。
④ 中和法凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试
品，可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或
灭活剂可加在所用的稀释液或培养基中。
药典2015版应该会有，之前食品菌液都是盐水稀释的
微生物限度检查中，供试液制备方法反复提到制成1:10供试液，如“水溶性供试品：取供试品，用PH7.0无菌气化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7. 2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液”。那么这个1:10的供试液是怎么配制？下面两种做法：1、目前多数做法，固体样品，取10g，加入100ml稀释液；液体样品，取10ml，加入90ml稀释液。
2、而有些人认为1:10是比例浓度，固体样品，取10g，加入100ml供试液；液体样品，是取10ml，加入100ml供试液。
从后续实验操作过程来看，都是要求取相当于1g或1ml的供试液进行操作，另外从微生物限度判断标准来看，也是以1g或1ml含有的菌落数报告，那么，无疑，液体样品的配制，取10ml，加入90ml稀释液，这种方法是对的，利于后续实验步骤的操作。同样，固体样品，也应该是配制完成后液体体积是100ml，但容量瓶不能灭菌，无法定容，同时固体样品10g体积较小，忽略体积的话，直接加入100ml稀释液也可以。
答：1、目前多数做法，固体样品，取10g，加入100ml稀释液；液体样品，取10ml，加入90ml稀释液。2、而有些人认为1:10是比例浓度，固体样品，取10g，加入100ml供试液；液体样品，是取10ml，加入100ml供试液。从后续实验操作过程来看，都是要求取相当于1g或1ml的供试液进行操作，另外从微生物限度判断标准来...
答：必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。3.需用特殊方法制备供试液的供试品（1）非水溶性供试品方法1 取供试品5g（或5ml )，加至含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加人45 ℃的...
答：4.10微生物限度(薄膜过滤法)4.10.1取相当于每张滤膜含1g或1ml供试品的供试液，加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。若供试品每1g或1ml所含的菌数较多时，可取适量稀释剂的供试液1ml过滤。用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”。...
答：能。微生物供试液制备按1：10配比，固体样品，取1g，加入10ml稀释液，液体样品，取10ml，加入90ml稀释液，因此微生物供试液制备能1g称到10ml稀释液中。微生物是指肉眼难以看清，需要借助光学显微镜或电子显微镜才能观察到的一切微小生物。
答：应该是100cm2的吧。取100cm2的膜加入到100ml缓冲液中，供试液是1:100；计数时取10ml供试液过滤做计数培养，结果报告要用菌落数乘10，控制菌要另外取膜面积直接过滤。
答：计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。用稀释液稀释成1:10、1:l0²、l:10³等稀释级的供试液。 根据菌数报告规则取相应稀释级的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中...
答：2. PBS配方中的磷酸盐缓冲能力使得它能够作为中和剂，有效地中和消毒剂如84消毒液中的次氯酸钠和表面活性剂（例如吐温）的活性成分。3. 需要注意的是，硫代硫酸钠并不具备杀菌微生物的效能，因此在配制消毒剂的中和剂时，使用硫代硫酸钠可能不会达到预期的消毒效果。4. 如果您选择不使用PBS，而是使用水...
答：一、标准 细菌数:≤500 cfu /100cm2，霉菌和酵母菌数≤50 cfu /100cm2，大肠埃希菌不得检出 。二、供试液制备：取本品用开口面积为20cm2的灭过菌的金属模板压在内层面上，将无菌棉签用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稍沾湿，在板孔范围内擦抹5次，换1支棉签再擦抹5次，每个位置用2支棉签...
答：根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法 制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不 应超过451C。供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过 1小时。除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。1. 液体供试品 取供试品10ml ，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml...
答：2015版药典中微生物限度检查方法验证要求： 1.试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。2.若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方。
