求助诱导细胞凋亡，Annexin
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-04
求助，推荐一下细胞凋亡的诱导方法
2、特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时,有些细胞（如神经元细胞）很容易受到损伤,导致晚期凋亡或坏死比例非常高,不能反映真实结果.实验的解决方法：先低速离心,吸取细胞培养板中的液体,留少许液体,加入适量PI和Annexin-V染色10min后,将漂浮细胞吸至离心管中,离心洗涤两次,用PBS漂洗贴壁细胞两次,加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中,离心洗涤,再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测.应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例,增加早期凋亡细胞比例.
3、由于Annexin-V为钙离子依赖的磷脂结合蛋白,只有在钙离子存在的情况下与PS的亲和力才大,因而在消化细胞时,建议一般不采用含EDTA的消化液.
4、必须设置阴性对照和补偿对照（分别单染）.
求助诱导细胞凋亡,Annexin
答：加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中,离心洗涤,再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测.应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例,增加早期凋亡细胞比例.3、由于Annexin-V为钙离子依赖的磷脂结合蛋白,只有在钙离子存在的情况下与PS的亲和力才大,因而在消化细胞时,建议一般不采用含EDTA的消化液.4、必须设置阴...
请教ANNEXIN V-PI法检测凋亡的原理和相关试剂盒使用步骤
答：有关Annexin -PI凋亡细胞的检测使用的是BIODAI的较多，具体的步骤如下：1) 悬浮细胞：300g，4℃，离心5min，收集细胞。贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300g，4℃，离心5min，收集细胞。胰酶消化时间不宜过长(见注意事项)，以防引起假阳性。2) 用预冷的PBS洗涤细胞两次，每次均在300g，...
请教ANNEXIN V-PI法检测凋亡的原理和相关试剂盒使用步骤
答：将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用...
诱导细胞凋亡为什么要加tnf
答：诱导细胞凋亡要加tnf的原因：增加促凋亡活性，加速培养细胞TNFα诱导的凋亡。肿瘤坏死因子（TNF）是一类具有多种生物效应的细胞因子，它通过和细胞膜上的特异性的受体结合，实现促进细胞生长，分化，调亡及诱发炎症等生物学效应。TNF-α属于TNF家族，可以激活Caspase蛋白酶、JNK和转录因子NF-kB三条信号通路...
求凋亡检测指标Annexin V的工作原理?
答：Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。之前做过这方面的实验，你可以去看看absin品牌的试剂盒，他家这个试剂盒文献发表好像都将近30篇了 ...
PI(碘化丙啶);死细胞荧光探针
答：首先，诱导细胞进入凋亡过程，离心后收集，用PBS洗涤并计数。值得注意的是，PI染料只适用于悬浮细胞，贴壁细胞在处理过程中可能引发非预期的细胞损伤，因此处理时需格外小心。接着，将1-5 × 105个细胞重悬，再次离心，洗涤后加入 Annexin V Binding Buffer。随后，将5 μL Annexin V荧光染液和5 μL ...
x线照射后细胞开始凋亡的时间?有效的检测指标是什么?
答：X射线诱导细胞凋亡，其凋亡开始的时间取决于X射线的剂量。检测凋亡最简单的方法就是看贴壁细胞是否变圆、浮起来。但此种方法不够灵敏，也不够准确。可以PI单染，被染细胞即死亡细胞，但无法分辨凋亡细胞和死亡细胞。也可用AnnexinV/PI双染色，流式细胞仪检测凋亡细胞。此方法最为准确。
细胞凋亡的检测
答：1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都适用),可与DNA染料...
Annexin V-FITC/PI双染色用激光共聚焦显微镜检测的实验方法
答：荧光显微镜下观察。贴壁细胞也可以先在盖玻片上培养（根据盖玻片大小，置于24孔或12孔细胞培养板内），然后诱导细胞凋亡。染色细胞在细胞培养板内进行。先用PBS冲洗两次，加入400μl Binding Buffer于孔中。再加入5μl Annexin V-EGFP与10μl Propidium Iodide，混匀. 避光室温反应10分钟。3． 将盖玻片...
求细胞凋亡的一些系统的检测方法,最好全!谢了!
答：流式细胞分析操作方法：1) 培养细胞用所需方法处理以诱导凋亡。应同时设置阴性对照。2) 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用冰冷PBS洗涤细胞后，取5~10万重悬的细胞，1000g离心5 min，弃上清，加入100 μl Annexin V染色液轻轻重悬细胞。室温(20-25℃)...
我们一般是这样建立凋亡模型的：
100 μM H2O2处理1h 10%细胞早期凋亡
100 mM H2O2处理1h 90%细胞晚期凋亡
市售30% H2O2是10 M
（推荐诺唯赞的TUNEL BrightGreen，很好用，我们整个实验室都在用）
比较抗癌药物诱导胰腺癌细胞凋亡的能力，以期找到一种疗效较好的化疗药物。方法：根据临床常用的最高及最低剂量，分别将羟基喜树碱、三氧化二胂、紫杉醇、全反式维甲酸、奥曲肽及5－Fu与胰腺腺泡癌细胞SW1990系共同培养6、12、24h，利用光镜及电下的形态学方法及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）确定细胞凋亡，并利用AO－EB双重荧光染色法及PI和Annexin－VFITC双重标记下的流式细胞术定量测定细胞凋亡率。结果：上述药物均可诱导SW1990细胞凋亡，凋亡诱导能力由强到弱依次为紫杉醇、5－氟尿嘧啶、羟基喜树碱、三氧化二砷、全反式维甲酸和奥曲肽，各药物的凋亡诱导能力呈剂量和时间的依赖性，其中紫杉醇的作用最强且最快。结论：紫杉醇可能是一种疗效较好的胰腺癌化疗药物。
1、必须活细胞检测,不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜.2、特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时,有些细胞（如神经元细胞）很容易受到损伤,导致晚期凋亡或坏死比例非常高,不能反映真实结果.实验的解决方法：先低速离心,吸取细胞培养板中的液体,留少许液体,加入适量PI和Annexin-V染色10min后,将漂浮细胞吸至离心管中,离心洗涤两次,用PBS漂洗贴壁细胞两次,加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中,离心洗涤,再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测.应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例,增加早期凋亡细胞比例.
3、由于Annexin-V为钙离子依赖的磷脂结合蛋白,只有在钙离子存在的情况下与PS的亲和力才大,因而在消化细胞时,建议一般不采用含EDTA的消化液.
4、必须设置阴性对照和补偿对照（分别单染）.
答：加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中,离心洗涤,再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测.应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例,增加早期凋亡细胞比例.3、由于Annexin-V为钙离子依赖的磷脂结合蛋白,只有在钙离子存在的情况下与PS的亲和力才大,因而在消化细胞时,建议一般不采用含EDTA的消化液.4、必须设置阴...
答：有关Annexin -PI凋亡细胞的检测使用的是BIODAI的较多，具体的步骤如下：1) 悬浮细胞：300g，4℃，离心5min，收集细胞。贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300g，4℃，离心5min，收集细胞。胰酶消化时间不宜过长(见注意事项)，以防引起假阳性。2) 用预冷的PBS洗涤细胞两次，每次均在300g，...
答：将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用...
答：诱导细胞凋亡要加tnf的原因：增加促凋亡活性，加速培养细胞TNFα诱导的凋亡。肿瘤坏死因子（TNF）是一类具有多种生物效应的细胞因子，它通过和细胞膜上的特异性的受体结合，实现促进细胞生长，分化，调亡及诱发炎症等生物学效应。TNF-α属于TNF家族，可以激活Caspase蛋白酶、JNK和转录因子NF-kB三条信号通路...
答：Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。之前做过这方面的实验，你可以去看看absin品牌的试剂盒，他家这个试剂盒文献发表好像都将近30篇了 ...
答：首先，诱导细胞进入凋亡过程，离心后收集，用PBS洗涤并计数。值得注意的是，PI染料只适用于悬浮细胞，贴壁细胞在处理过程中可能引发非预期的细胞损伤，因此处理时需格外小心。接着，将1-5 × 105个细胞重悬，再次离心，洗涤后加入 Annexin V Binding Buffer。随后，将5 μL Annexin V荧光染液和5 μL ...
答：X射线诱导细胞凋亡，其凋亡开始的时间取决于X射线的剂量。检测凋亡最简单的方法就是看贴壁细胞是否变圆、浮起来。但此种方法不够灵敏，也不够准确。可以PI单染，被染细胞即死亡细胞，但无法分辨凋亡细胞和死亡细胞。也可用AnnexinV/PI双染色，流式细胞仪检测凋亡细胞。此方法最为准确。
答：1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都适用),可与DNA染料...
答：荧光显微镜下观察。贴壁细胞也可以先在盖玻片上培养（根据盖玻片大小，置于24孔或12孔细胞培养板内），然后诱导细胞凋亡。染色细胞在细胞培养板内进行。先用PBS冲洗两次，加入400μl Binding Buffer于孔中。再加入5μl Annexin V-EGFP与10μl Propidium Iodide，混匀. 避光室温反应10分钟。3． 将盖玻片...
答：流式细胞分析操作方法：1) 培养细胞用所需方法处理以诱导凋亡。应同时设置阴性对照。2) 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用冰冷PBS洗涤细胞后，取5~10万重悬的细胞，1000g离心5 min，弃上清，加入100 μl Annexin V染色液轻轻重悬细胞。室温(20-25℃)...
