单克隆抗体的制备为什么选择雌性小鼠

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-07-03
单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义

单克隆抗体制备的原理:
B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力,又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力,将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体.这种技术即称为单克隆抗体技术。
单克隆抗体制备的过程:
免疫动物
免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。
细胞融合
采用二氧化碳气体处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
选择性培养
选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。
杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化
在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存。
单克隆抗体的大量制备
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。
(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体。
(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗体的生产量。
单克隆抗体制备的意义:
用于以下各种生命科学实验并具有医用价值
(1)沉淀反应:Precipitation reaction
(2)凝集实验:haemaglutination
(3)放射免疫学方法检测免疫复合物
(4) 流式细胞仪:用于细胞的分型和细胞分离.
(5)ELISA 等免疫学检测
(6)BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的亲和力 .
(7)免疫印记(western blotting)
(8) 免疫沉淀:
(9) 亲和层析:分离蛋白质
(10) 磁珠分离细胞
(11)临床疾病的诊断和治疗;

单克隆抗体的制备过程:1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程. 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射. 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞.2、细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液. 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇.在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞.3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基.在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死亡. 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡. 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖.4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化.通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养.采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增.经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存.5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法.(1)体内诱生法 取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理.1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞.杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体.约1-2周,可见小鼠腹部膨大.用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体.(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养.在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体.但这种方法产生的抗体量有限.近年来,各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗体的生产量.可见,制备单克隆抗体需要用到B淋巴细胞、细胞融合得到的融合细胞、杂交瘤细胞(是一种肿瘤细胞),而没用到T细胞.故选:B

主要是雌性小鼠个子小,容易操作,性情温柔。在免疫过程中是没有什么优势的。
另外,用来做融合的骨髓瘤细胞最初都是从雌性小鼠身上得到的,为了更好地兼容,所以免疫也用雌鼠。

是因为雌性小鼠的免疫反应要比雄性小鼠更好,血清滴度比雄性要高2~3数量级!!!希望我的回答对你有帮助!!

这个不是很清楚···

  • 单克隆抗体的制备为什么选择雌性小鼠
    答:另外,用来做融合的骨髓瘤细胞最初都是从雌性小鼠身上得到的,为了更好地兼容,所以免疫也用雌鼠。
  • 单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义
    答:单克隆抗体制备的过程:免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。细胞融合 采用二氧...
  • 单克隆抗体制备过程
    答:单克隆抗体的制备过程分为几个关键步骤:首先,进行免疫动物。选择6-8周龄雌性Balb/c小鼠,通过免疫注射,使用目的抗原刺激其产生致敏B淋巴细胞。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,激活并增殖B淋巴细胞,形成致敏细胞。接着,进行细胞融合。小鼠经眼球摘除放血法处理后,无菌取出脾脏,与同系骨髓...
  • 单克隆抗体
    答:制备过程1. 免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处死...
  • 单克隆抗体的制备过程
    答:1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2、细胞融合 采用二氧化碳气体处死小鼠...
  • 为何单克隆抗体均为鼠源性?
    答:免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一...
  • 如何利用杂交瘤技术制备单克隆抗体
    答:(1) 抗原制备 制备单克隆抗体的免疫抗原,从纯度上说虽不要求很高,但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加,同时可以减轻筛选的工作量。因此,免疫抗原是越纯越好,应根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说,抗原的来源有限,或性质不稳定,提纯时易变性,或其免疫原性很强,或所需单抗是用于抗原不同组分的...
  • 如何选择和免疫动物以获得高效价抗体?
    答:为了获得大量抗体,通常会选择大动物;而直接用于标记诊断的抗体,通常会直接使用本动物。若需间接标记抗体,则需异源动物制备;对于罕见或少量抗体需求,纯系小鼠是理想选择。实验室常用的抗体制备,通常选用兔和羊。免疫动物应选择适龄健康雄性,雌性动物特别是妊娠期不宜用于制备,因为可能影响抗体产生。同时...
  • 动物细胞工程单克隆抗体的制备
    答:然而,B细胞的这种功能有限,通过与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,可解决这一问题。杂交瘤细胞结合了B细胞的特异性抗体产生能力和骨髓瘤细胞的无限增殖能力,通过克隆化技术,可以大量获得高效、单一的特异性抗体。制作过程涉及免疫脾细胞的制备,选择纯系Balb/c小鼠进行免疫,方法多样,如脾内...
  • 单克隆抗体制备原理
    答:首先取几只健康的老鼠,让它感染,然后从它的血液中提出效应淋巴细胞 然后用电击法让他们融合。然后把这些细胞放在选择培养基上培养。这就得到了相应的细胞 最后把这些细胞防在小老鼠体内。就可得到干扰素单克隆抗体 这种细胞有效应淋巴细胞与骨髓瘤细胞的基因,所以即能分泌干扰素,又能无限繁殖。