如何判断提取质粒DNA的纯度
首先：可以通过分光光度计
A 260 / A 280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是 280 nm.纯净的样品,比值大于 1.8（DNA）或者2.0（RNA）.如果比值低于 1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响.A 230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0.A 320检测溶液的混浊度和其他干扰因子.纯样品,A 320 一般是 0.
若要判断完整性--可以先做琼脂糖凝胶电泳,再做限制酶切（要求更高）
紫外分光光度计定量。
方法用大肠杆菌DH5α感受态细胞克隆丰量的pMD-18T重组质粒，紫外分光光度计定量后，根据重组质粒分子量计算其拷贝数，稀释成梯度浓度的荧光实时定量PCR的标准品，取1.0×106、1.0×104和1.0×102拷贝/μl高中低3个浓度的标准品，反复冻融1、6、11、15次和21次后，以冻融后的质粒标准品为模板同时进行real-time PCR扩增定量，比较量值变化。
高中值稳定，低浓度波动相对较大，高浓度质粒最大变化量为0.06个数量级；中浓度质粒最大变化量为0.18个数量级；低浓度质粒最大变化量为0.34个数量级。
扩展资料：
质粒DNA提取的要求规定：
1、以CaCl2沉淀法去除大分子RNA，Q-Sepharose和SOURCE两步离子交换层析法去除染色体DNA、小分子RNA、蛋白质等杂质。
2、有效去除质粒DNA制备过程中产生的杂质,可应用于药剂水平质粒DNA的制备。
3、L.P.Elwell的实验条件稍作改进，温和地制备清亮裂解液并抽提质粒DNA，应用Sephacryl S-1000作凝胶过滤，获得了纯度高、产量大，无染色体DNA。
参考资料来源：中国知网-反复冻融质粒标准品对荧光实时定量PCR实验的
可以通过紫外吸收检测。
因为核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm得OD值的比值，估计核酸的纯度。
纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。
270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。
扩展资料：
在判断过程中，也有可能出现质粒DNA提取纯度失败的情况，具体可能是有以下几个原因：
1、菌体量可能过大,裂解不充分,或裂解液与中和液比例不适当；
2、混合时过于剧烈,可能会带来基因组DNA片段的污染；
3、Rnase失活,可能带来RNA污染；
4、离心不充分（有絮状物在上层）,或在离心后吸取上清时,将沉淀吸入,会带来蛋白质污染.
参考资料来源：百度百科——质粒DNA纯化
1、用紫外分光光度计测浓度和纯度 2、跑电泳看条带
大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA提取出来。区别：
1.大提用于大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而小提用的菌液量很少，一般1.5-5ml。
2.一般试剂盒中大提比小提多了溶菌酶、异丙醇（回收沉淀核酸）、含一定量PEG的氯化物（回收质粒DNA）及乙酸铵等，其作用及目的都是有利于细菌的裂解和质粒的纯化，所以大提的产物比小提的量多很多，而且纯度很高。
3.小提一般用于质粒鉴定和对纯度要求不是很高的实验，大提用于质粒的大量提取和转染等纯度要求很高的实验。
答：可以通过紫外吸收检测。因为核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm得OD值的比值，估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1....
答：1、用紫外分光光度计测浓度和纯度 2、跑电泳看条带
答：样品浓度不同。Ratio值是指260nm波长和280nm波长的比值，用来评估DNA样品中核苷酸的纯度。Ratio值越高，说明样品中RNA污染越少，DNA纯度越高。如果Ratio值差距很大，因为在样品提取或纯化的过程中，各个样品的DNA浓度不同，导致Ratio值差异。因此，在提取质粒DNA时，需要控制好操作步骤和各阶段的处理条件，...
答：看单酶切后的质粒是不是比原质粒跑得快从而鉴定出质粒有没有被切开.这个也分子生物学领域应用很广泛,PCR-RFLP方法就是基于这个原理进行限制性内切酶图谱方面的鉴定的.
答：紫外分光光度法 ：DNA的吸收峰在260nm处，蛋白的吸收峰在280nm处，因此可以用OD260/OD280判断DNA纯度，一般认为比值在1.8~2.0之间时，纯度较高 材料：含有pSK II质粒的大肠杆菌菌株的菌液、含有MP3质粒的大肠杆菌菌株的菌液 试剂：①细菌的培养：LB培养基、氨苄青霉素 ②细菌的裂解与收集：溶液I（...
答：用琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒DNA。琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向...
答：跑电泳啊，如果有多条条带说明东西不纯。在保证纯度的情况之下测OD值，再转换成质量，似乎是1OD等于33.8ug???然后根据质粒的大小，计算质粒的分子量。把质量除以分子量，就得到摩尔数了。
答：有很多商品化的试剂盒可以采用,一般试剂盒提出的DNA纯度基本都满足实验要求.DNA纯度,可以通过跑胶,测OD值,或nano检测等方法帮助确认.
答：反复冻融1、6、11、15次和21次后，以冻融后的质粒标准品为模板同时进行real-time PCR扩增定量，比较量值变化。高中值稳定，低浓度波动相对较大，高浓度质粒最大变化量为0.06个数量级；中浓度质粒最大变化量为0.18个数量级；低浓度质粒最大变化量为0.34个数量级。
答：在质粒提取方面，市场上的品牌繁多，如TIANGEN和Omega，选择时需根据实验需求，如是否要求无内毒素、是否用于测序等。以TIANGEN为例，根据提取目的，选择适合的中提、大提试剂盒。详细步骤可参考TIANGEN试剂盒说明书或在线搜索提质粒的教程视频，例如B站或官方平台。最后，测定质粒DNA的浓度和纯度，通常使用...
