如何通过琼脂糖凝胶来鉴定质粒DNA的纯度，浓度
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-08-06
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋、开环、直链跑胶快慢次序是什么？
在保证纯度的情况之下测OD值，再转换成质量，似乎是1OD等于33.8ug???然后根据质粒的大小，计算质粒的分子量。把质量除以分子量，就得到摩尔数了。
请问:怎样提取微生物的质粒(DNA)?
答：9.RNase A（RNA酶A）：不含DNA酶(DNase-free) RNase A的10mg/ml,TE配制,沸水加热15min,分装后贮存于-20℃.10.6×loading buffer（上样缓冲液）：0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,40%（W/V）蔗糖水溶液.11.1% 琼脂糖凝胶：称取1g琼脂糖于三角烧瓶中,加100ml 0.5×TBE,微波炉加热至完全...
如何利用琼脂糖凝胶电泳技术鉴定质粒dna的大小
答：只能粗略地估计。选择合适的大分子量marker，用于电泳时比对即可。
如何鉴定提取质粒DNA的质量和含量
答：紫外分光光度计定量。方法用大肠杆菌DH5α感受态细胞克隆丰量的pMD-18T重组质粒，紫外分光光度计定量后，根据重组质粒分子量计算其拷贝数，稀释成梯度浓度的荧光实时定量PCR的标准品，取1.0×106、1.0×104和1.0×102拷贝/μl高中低3个浓度的标准品，反复冻融1、6、11、15次和21次后，以冻融后...
质粒dna在琼脂糖凝胶中应为一条带,但有时出现三条带的原因有哪些_百度...
答：质粒DNA原则上是一条带，但通常跑胶会看到三条，这是正常情况。因为质粒是环形的DNA，稍有降解就会变成一条为线性，再厉害些，就成了线性DNA，三者在琼脂糖凝胶中速率不同，自然会出现三条带。标准就是三条带，有时候两条。因为质粒有不同的构象：超螺旋、环形、线形，电泳速度是不一样的。
提取到的质粒DNA有几种问分子状态,在凝胶电泳所得图片中如何区分?
答：在松散环状DNA的基础上进一步盘曲折叠形成的紧致的环状DNA）其实这三种结构分子量相同，由于空间结构的差异导致在琼脂糖凝胶电泳中迁移率不同，因此出现三条条带。标准的质粒提取实验中只存在后两种结构，线性DNA是由于提取操作过于剧烈或缓冲溶液pH不适宜造成的DNA断裂。过于震荡可造成电泳条带拖尾现象。
基因工程实验Ⅱ大肠杆菌质粒DNA的抽提及检测『Protocol』
答：⑥纯化后的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计鉴定 电泳法 ：带负电荷的DNA分子在外加电场的作用下向正极泳动，不同分子量大小与构型的DNA分子泳动速率不同，因此可以在琼脂糖凝胶上呈现不同的条带。在凝胶中加入核酸染料可以方便我们观察，因为核酸染料可以嵌入到DNA碱基之间，避免被凝胶中的氢...
凝胶电泳的实验原理
答：3、 DNA分子的构象 DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而开环双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还...
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳图分析
答：那是他们提取的时候变性时间太长，变性的质粒DNA电泳的时候走在超螺旋DNA的前面，染色较淡。变形的原因通常是上样量太大，也有可能是凝胶、缓冲液的原因。
麻烦你能告诉我 DNA 的吗?
答：其中10´加样缓冲液（或6´加样缓冲液）在酶等试剂里都有，一般不用自己配置。实验二 质粒DNA电泳鉴定 1．目的 学会常用的DNA琼脂糖凝胶电泳、。2．原理 DNA双螺旋分子骨架两侧带有含负电荷的磷酸根，在电场中会向正极方向移动。不同长度的DNA由于受到凝胶介质的阻力不同，表现为不同的...
如何鉴定提取质粒DNA的质量和含量?
答：Nano（紫外分光光度计，测定OD260/280）或琼脂糖凝胶电泳
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋、开环、直链跑胶快慢次序依次是超螺旋、直链、开环。
琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关，分子构象越大，摩擦阻力越大，第一条带是超螺旋带应该最亮，因为超螺旋结构完整紧密，跑得最快。第二条带为直链线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA，不如超螺旋紧密，跑得相对慢 。第三条带为开环质粒，DNA双链的其中一根断开，导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构，结构臃肿，跑得最慢。
扩展资料：
琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率在于摩擦阻力的问题，琼脂就像有孔海绵分子筛，细菌质粒提取中电泳会出现三条带，最快的是超螺旋带，它是完整的，因为它的构型紧密，跑得快。 第二条带在中间，是直链带，即环状双链DNA 两条链均断开，其分子构象变为线性，不如超螺旋紧密，跑得就慢一点。最慢的是开环带，即环状双链DNA 有一条链断开，拖着一条尾巴，显得很臃肿，所以跑得最慢。
参考资料：
百度百科——DNA
一般都有3条带。据推测跑在最前边的是cccDNA（共价闭合环），中间的是OC（开环），最后的有点拖带，稍宽，早期多认为是线状的，但后来专家认为断链质粒发生几率很低，形不成条带，因此现在一般认为是处于复制过程中的1.5倍左右的条带。
以上均为推测，每人真的去证明。
但若将质粒提取液单酶切，将会得到整齐的一条带。我实验室经常用这种方法估计质粒的纯度。
在保证纯度的情况之下测OD值，再转换成质量，似乎是1OD等于33.8ug???然后根据质粒的大小，计算质粒的分子量。把质量除以分子量，就得到摩尔数了。
答：9.RNase A（RNA酶A）：不含DNA酶(DNase-free) RNase A的10mg/ml,TE配制,沸水加热15min,分装后贮存于-20℃.10.6×loading buffer（上样缓冲液）：0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,40%（W/V）蔗糖水溶液.11.1% 琼脂糖凝胶：称取1g琼脂糖于三角烧瓶中,加100ml 0.5×TBE,微波炉加热至完全...
答：只能粗略地估计。选择合适的大分子量marker，用于电泳时比对即可。
答：紫外分光光度计定量。方法用大肠杆菌DH5α感受态细胞克隆丰量的pMD-18T重组质粒，紫外分光光度计定量后，根据重组质粒分子量计算其拷贝数，稀释成梯度浓度的荧光实时定量PCR的标准品，取1.0×106、1.0×104和1.0×102拷贝/μl高中低3个浓度的标准品，反复冻融1、6、11、15次和21次后，以冻融后...
答：质粒DNA原则上是一条带，但通常跑胶会看到三条，这是正常情况。因为质粒是环形的DNA，稍有降解就会变成一条为线性，再厉害些，就成了线性DNA，三者在琼脂糖凝胶中速率不同，自然会出现三条带。标准就是三条带，有时候两条。因为质粒有不同的构象：超螺旋、环形、线形，电泳速度是不一样的。
答：在松散环状DNA的基础上进一步盘曲折叠形成的紧致的环状DNA）其实这三种结构分子量相同，由于空间结构的差异导致在琼脂糖凝胶电泳中迁移率不同，因此出现三条条带。标准的质粒提取实验中只存在后两种结构，线性DNA是由于提取操作过于剧烈或缓冲溶液pH不适宜造成的DNA断裂。过于震荡可造成电泳条带拖尾现象。
答：⑥纯化后的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计鉴定 电泳法 ：带负电荷的DNA分子在外加电场的作用下向正极泳动，不同分子量大小与构型的DNA分子泳动速率不同，因此可以在琼脂糖凝胶上呈现不同的条带。在凝胶中加入核酸染料可以方便我们观察，因为核酸染料可以嵌入到DNA碱基之间，避免被凝胶中的氢...
答：3、 DNA分子的构象 DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而开环双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还...
答：那是他们提取的时候变性时间太长，变性的质粒DNA电泳的时候走在超螺旋DNA的前面，染色较淡。变形的原因通常是上样量太大，也有可能是凝胶、缓冲液的原因。
答：其中10´加样缓冲液（或6´加样缓冲液）在酶等试剂里都有，一般不用自己配置。实验二 质粒DNA电泳鉴定 1．目的 学会常用的DNA琼脂糖凝胶电泳、。2．原理 DNA双螺旋分子骨架两侧带有含负电荷的磷酸根，在电场中会向正极方向移动。不同长度的DNA由于受到凝胶介质的阻力不同，表现为不同的...
答：Nano（紫外分光光度计，测定OD260/280）或琼脂糖凝胶电泳
