紫外吸收检测DNA的浓度和纯度原理是什么?

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-08-06
紫外吸收法为什么能测定核酸的含量和纯度?

采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理:(1)蛋白质可作定量分析的原因:蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,所以蛋白质溶液在275 280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。在一定浓度范围内,蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比,服从朗伯-比耳定律,因此可作定量分析。该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。(2)此种方法测量的准确度差一点的原因:由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同,所处的微环境也不同,所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。据初步统计,浓度为1.0 mg/mL的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在0.3—3.0之间,平均值为1.25+/-0.51。所以此种方法测量的准确度差一点。



两种方法各有优劣。
电泳法更直观,如果你有DNA Maker,并且知道Maker的浓度,就可以使用一维条带分析软件如Quantity One分析样品中DNA的含量,而且可以很直观地了解目的DNA的纯度、大小等特性。
但是,由于电泳中染色特异性很强,对DNA、RNA之外的小分子污染情况无法检测。
紫外法可对样品中所有具紫外吸收特性的物质给出一个综合的结果。因此如果样品中有其他影响DNA后续操作的物质,样品吸光值就会有很大偏移。
值得注意的是,紫外法仅可作为一个参考,吸光值是结果,而不是原因。吸光值符合要求并不能代表DNA纯度符合要求。一般紫外分析后还是要跑个电泳,两者结合就可靠多了。

核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280),估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽,若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液,对浓度更小的样品,可采用荧光分光光度法。
生物帮上面有这方面的详细介绍, http://www.bio1000.com/zt/experiment/hesuan.html 核苷酸,核糖核酸,脱氧核糖核酸,核酸酶,核苷酸的作用。

  • 紫外吸收检测DNA的浓度和纯度原理是什么?
    答:核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280),估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA...
  • 紫外吸收法为什么能测定核酸的含量和纯度?
    答:采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理:(1)蛋白质可作定量分析的原因:蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,所以蛋白质溶液在275 280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。在一定浓度范围内,蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比,服从朗伯-比耳定律,因此可作定量分析。该法测...
  • DNA紫外吸收数据哪里有?
    答:中国期刊网上有准确的数据 搜索就可以了
  • 用紫外可见分光光度法测定某样品
    答:熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。二、原理 DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收,其吸收峰在260nm处。波长为260nm时,DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关,也随构型而有差异。对标准样品来说,浓度为1μg / ml时,DNA钠盐的OD260=0.02当OD260=1时,dsDNA浓度约为...
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    答:实验原理 DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰,蛋白质在280nm处有最大的吸收峰,盐和小分子则集中在230nm处。因此,可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度,OD值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。如用25px光径,用 H2O稀释DNA/RNA样品n倍并以H2O为空白对照,根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前...
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  • 为什么用OD260/OD280评定核酸纯度
    答:在波长260nm紫外线下,1 OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为40μg/ml;寡核苷酸为20μg/ml。可以此来计算核酸样品的浓度。通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)可以估计核酸的纯度。纯DNA的比值为1.8,纯RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8,说明...
  • DNA或RNA样品不纯,用紫外分光光度计测定其浓度和纯度的准确性会受到影响...
    答:但紫外法不能区分DNA和RNA,只能用来鉴定核酸的纯度和含量。蛋白质由于含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处,在260nm处的吸收值公为核酸的十分之一或更低,故核酸样品中蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。RNA的260nm与280nm吸收的比值在2.0以上;DNA的...
  • 测定DNA含量用什么方法?
    答:在波长260nm紫外线下,1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为20μg/ml。可以次来计算核酸样品的浓度。分光光度法不但能确定核酸的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度。DNA的比值为1.8,RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8,...
  • 简述如何通过分光光度法判断DNA的纯度。
    答:【答案】:分光光度法不但能确定核酸浓度,还可通过测定在260nm和280nm的紫外光吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度。纯净的DNA制品的A260/A280为1.8。DNA样品A260/A280为1.8~2.0时,表明样品纯度已达到要求。DNA样品A260/A280比值低于1.6时,表明有蛋白质或苯酚污染,应用苯酚-氯仿抽提,...