进行分子实验时，如酶切反应、PCR扩增等，加入酶时应注意哪些问题?
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-02
冰上操作，充分混匀，控制用量，控制反应时间
冰上操作:使用过程中注意对酶的保护，以免失活
充分混匀:充分混匀才能使酶充分发挥作用
控制用量:过多的酶会导致星活性(比如用限制性内切酶的酶切实验)，即酶切错误;PCR中酶加得过多也容易导致非特异扩增
控制反应时间:根据具体的酶、具体的实验确定相应的反应时间
进行分子实验时,如酶切反应、PCR扩增等,加入酶时应注意哪些问题?_百度...
答：冰上操作:使用过程中注意对酶的保护，以免失活 充分混匀:充分混匀才能使酶充分发挥作用 控制用量:过多的酶会导致星活性(比如用限制性内切酶的酶切实验)，即酶切错误;PCR中酶加得过多也容易导致非特异扩增 控制反应时间:根据具体的酶、具体的实验确定相应的反应时间 ...
进行分子实验时,如酶切反应、PCR扩增等,加入酶时应注意哪些问题?_百度...
答：冰上操作：使用过程中注意对酶的保护，以免失活 充分混匀：充分混匀才能使酶充分发挥作用 控制用量：过多的酶会导致星活性（比如用限制性内切酶的酶切实验），即酶切错误；PCR中酶加得过多也容易导致非特异扩增 控制反应时间：根据具体的酶、具体的实验确定相应的反应时间 ...
分子克隆获取目的基因时什么时候用酶切,什么时候用PCR?
答：连接T-vector之前进行PCR得到带A的PCR产物，然后进行转化，对expression vector和质粒进行相同酶切，连接，转化。在整个clone中有时会用PCR来鉴定，如目的基因是否转入进感受态细胞。
植物分子生物实验室会用到哪些生物试剂
答：PCR：dNTP，Mg2+，ExTaq,Exbuffer（Extaq酶为例）酶切反应：RNA酶水，限制性内切酶，相应的buffer 载体：按实验室要求进行采购 感受态细胞：可采购，或者自己制备，方法也很简单 植物RNA提取：一般用Trizol试剂，按protocol来吧 RT-PCR：采购反转录试剂盒 realtime pcr:采购试剂盒 蛋白相关实验：配蛋白...
分子生物学实验中怎样快速有效的验证酶切后连接反应成功?
答：连接产物转化大肠杆菌感受态细胞并涂布于带有相应抗生素抗性的LB平板上，待菌落长出后，可以使用菌落PCR（或菌液PCR）验证目的片段是否连入载体中。 不过当连入片段大于2kb时，就不适合菌落/液PCR了。
双酶切时,是直接用pcr产物就可以,还是需要
答：1 做转化质粒的时候一般不加连接酶。对PCR产物进行酶连接反应时，注意保持低温状态，因为T4连接酶长时间放置在常温下容易活性降低，建议在冰盒中操作。2 对含有AMP-RESISTENCE的质粒涂布时，一般培养基会放置在培养箱中一段时间后才会到感受态中，3对照的设立：为验证双酶切是否成功，可做如下对照：A 酶...
用PCR做基因克隆,如何判断酶切效果好坏
答：首先需要知道是双酶切还是单酶切1、单酶切 一般这种情况会根据实际大小进行判断，对于质粒来讲，有三种情况，线性质粒、超螺旋、开环结构三种，其在琼脂糖凝胶重的大小是不一样的，大小顺序，从上往下看：开环>线性>超螺旋。一般单酶切之后，此时的情况类似于开环结构，显示的是整个质粒的全长，此时...
我不懂PCR的意义?生物化学方面的词
答：聚合酶链反应(英文全称:Polymerase Chain Reaction),简称PCR。聚合酶链反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础...
PCR实验过程中的注意事项
答：PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究.酶切分析：根据PCR产物中限制性内切酶的位点,用相应的酶切、电泳分离后,获得符合理论的片段,此法既能进行产物的鉴定,又能对靶基因分型,还能进行变异性研究. 分子杂交：...
PCR是什么?
答：PCR的改进与完善 Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的 Klenow片段,其缺点是:①Klenow酶不耐高温,90℃会变性失活,每次循环都要重新加。②引物链延伸反应在37℃下进行,容易发生模板和引物之 间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。此种以Klenow酶催化的PCR技术虽较传统的基因扩增...
冰上操作:使用过程中注意对酶的保护，以免失活
充分混匀:充分混匀才能使酶充分发挥作用
控制用量:过多的酶会导致星活性(比如用限制性内切酶的酶切实验)，即酶切错误;PCR中酶加得过多也容易导致非特异扩增
控制反应时间:根据具体的酶、具体的实验确定相应的反应时间
答：冰上操作:使用过程中注意对酶的保护，以免失活 充分混匀:充分混匀才能使酶充分发挥作用 控制用量:过多的酶会导致星活性(比如用限制性内切酶的酶切实验)，即酶切错误;PCR中酶加得过多也容易导致非特异扩增 控制反应时间:根据具体的酶、具体的实验确定相应的反应时间 ...
答：冰上操作：使用过程中注意对酶的保护，以免失活 充分混匀：充分混匀才能使酶充分发挥作用 控制用量：过多的酶会导致星活性（比如用限制性内切酶的酶切实验），即酶切错误；PCR中酶加得过多也容易导致非特异扩增 控制反应时间：根据具体的酶、具体的实验确定相应的反应时间 ...
答：连接T-vector之前进行PCR得到带A的PCR产物，然后进行转化，对expression vector和质粒进行相同酶切，连接，转化。在整个clone中有时会用PCR来鉴定，如目的基因是否转入进感受态细胞。
答：PCR：dNTP，Mg2+，ExTaq,Exbuffer（Extaq酶为例）酶切反应：RNA酶水，限制性内切酶，相应的buffer 载体：按实验室要求进行采购 感受态细胞：可采购，或者自己制备，方法也很简单 植物RNA提取：一般用Trizol试剂，按protocol来吧 RT-PCR：采购反转录试剂盒 realtime pcr:采购试剂盒 蛋白相关实验：配蛋白...
答：连接产物转化大肠杆菌感受态细胞并涂布于带有相应抗生素抗性的LB平板上，待菌落长出后，可以使用菌落PCR（或菌液PCR）验证目的片段是否连入载体中。 不过当连入片段大于2kb时，就不适合菌落/液PCR了。
答：1 做转化质粒的时候一般不加连接酶。对PCR产物进行酶连接反应时，注意保持低温状态，因为T4连接酶长时间放置在常温下容易活性降低，建议在冰盒中操作。2 对含有AMP-RESISTENCE的质粒涂布时，一般培养基会放置在培养箱中一段时间后才会到感受态中，3对照的设立：为验证双酶切是否成功，可做如下对照：A 酶...
答：首先需要知道是双酶切还是单酶切1、单酶切 一般这种情况会根据实际大小进行判断，对于质粒来讲，有三种情况，线性质粒、超螺旋、开环结构三种，其在琼脂糖凝胶重的大小是不一样的，大小顺序，从上往下看：开环>线性>超螺旋。一般单酶切之后，此时的情况类似于开环结构，显示的是整个质粒的全长，此时...
答：聚合酶链反应(英文全称:Polymerase Chain Reaction),简称PCR。聚合酶链反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础...
答：PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究.酶切分析：根据PCR产物中限制性内切酶的位点,用相应的酶切、电泳分离后,获得符合理论的片段,此法既能进行产物的鉴定,又能对靶基因分型,还能进行变异性研究. 分子杂交：...
答：PCR的改进与完善 Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的 Klenow片段,其缺点是:①Klenow酶不耐高温,90℃会变性失活,每次循环都要重新加。②引物链延伸反应在37℃下进行,容易发生模板和引物之 间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。此种以Klenow酶催化的PCR技术虽较传统的基因扩增...
