怎样通过凝胶电泳图谱检测DNA的纯度和浓度

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-08-06
用琼脂糖凝胶电泳怎么检测DNA质量 什么是标准

DNA如果降解或者混有其他杂质比如蛋白质、RNA的话,在电泳中可以检测的到.
线性的单一DNA样品一般是单条带,质粒的话可能会有2-3条带.
如果条带变宽、变暗、或者变成弥散的DNA条带,表示DNA非特异的降解.‘
如果条带变成多条,表示可能被酶切.如果质粒被单酶切,可能变成一条亮带.
如果有蛋白质污染,上样孔可能发亮.如果有RNA污染,可能小分子量部分会有弥散.
等等.
标准是电泳条带亮度.通过亮度可以粗略计算DNA条带的含量.如果DNA有损失,对应的条带会变暗或者消失

原理:1.琼脂糖或者丙烯酰胺凝胶的分子筛作用
2.DNA分子结合SDS后在电场的作用下向正极移动
3.DNA分子的大小和形状的区别会在凝胶中区分出来,大的跑的慢,线性比环形跑的慢
电泳缓冲液TAE或者TBE:
1、0.04mol/L Tris-乙酸 0.001mol/L EDTA pH=8.5
2、Tris-硼酸(TBE)0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA pH=8.3

这个应该用分光光度计检测啊,浓度看OD260,纯度看OD260/OD280以及OD260/OD230。
要是非用电泳检测,纯度就看看点样孔是否发亮,发亮的话是有蛋白质,浓度的话可以在旁边加一个已知浓度的marker。

  • 用电泳法怎样鉴定DNA ?
    答:琼脂糖凝胶电泳可以通过限制性酶切多态性(RFLP)或者扩增片断多态性(AFLP)来鉴定检测的DNA。就是不同DNA被特定的限制性内切酶切出来的片断大小是不一样的,在琼脂糖凝胶电泳跑出来的条带也不一样,如果是相同的DNA,结果就一样。
  • 如何通过琼脂糖凝胶来鉴定质粒DNA的纯度,浓度
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    答:在DNA电泳中,DNA片段会根据其大小在凝胶中移动,较大的DNA片段移动较慢,而较小的片段移动较快。因此,通过观察条带的位置,我们可以大致估计DNA片段的大小。例如,如果一个DNA样本在电泳图中的位置靠近凝胶的底部,说明这个DNA片段较大;反之,如果条带位置靠近凝胶顶部,则表示片段较小。其次,条带的...
  • 电泳图谱清晰的关键是什么?如何正确操作?
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