植物组织培养的基本过程。谢谢

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-07-05
植物组织培养一般的的流程

植物组织培养可以分为四个阶段:
(1)建立无菌体系,即外植体及培养基的消毒、接种,获得愈伤组织或器官。
(2)进行增殖,不断分化产生新的植株,或直接产生不定芽及胚状体,也可以根据需要反复进行继代培养,以达到大量繁殖的目的。
(3)将植株转移进行生根培养,可以转入生根培养基,也可以直接切取进行扦插生根。
(4)试管苗过渡,即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。

植物组织培养的流程:
第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗。
流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物,除去脂质性的物质,便于灭菌液的直接接触。当然,最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。

第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成,准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10~30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用,加之70%酒精穿透力强,也很易杀伤植物细胞,所以浸润时间不能过长。
有一些特殊的材料,如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗,多层鳞片的休眠芽等等,以及主要取用内部的材料,则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下,待酒精蒸发后再剥除外层,取用内部材料。

第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多,可根据情况选取1~2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗,涮洗要每次3min左右,视采用的消毒液种类,涮洗3~10次左右。
无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意:①酒精渗透性强,幼嫩材料易在酒精中失绿,所以浸泡时间要短,防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料,特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些,如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱,一般浸泡10分钟左右,对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿,所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08~0.12%的吐温20或80(一种湿润剂),可以降低植物材料表面的张力,达到更好的消毒效果。

扩展资料培养材料采集:
要根据培养目的适当选取材料,选择原则:易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料,不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天,最好是中午或下午取材料,决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合作用、呼吸作用旺盛的组织,有自身消毒作用,这种组织一般是无菌的。
培养材料的消毒:
从外界或室内选取的植物材料,都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带入培养基,便会造成培养基污染。因此,植物材料必须经严格的表面灭菌处理,再经无菌操作手续接到培养基上。
参考资料:植物组织培养_百度百科

培养步骤
  第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物,除去脂质性的物质,便于灭菌液的直接接触。当然,最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。  
 第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成,准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10~30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用,加之70%酒精穿透力强,也很易杀伤植物细胞,所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料,如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗,多层鳞片的休眠芽等等,以及主要取用内部的材料,则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下,待酒精蒸发后再剥除外层,取用内部材料。   
第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多,可根据情况选取1—2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗,涮洗要每次3min左右,视采用的消毒液种类,涮洗3-l0次左右。
无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意:
①酒精渗透性强,幼嫩材料易在酒精中失绿,所以浸泡时间要短,防止酒精杀死植物细胞。
②老熟材料,特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些,如种子可以浸泡5分钟。
③升汞的渗透力弱,一般浸泡10分钟左右,对植物材料的杀伤力不大。
④漂白粉容易导致植物材料失绿,所以对于幼嫩材料要慎用。
⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80(一种湿润剂),可以降低植物材料表面的张力,达到更好的消毒效果。
第四步 把消毒过的外植体接到ms培养基上、在光照培养箱中进行培养、若要得到愈伤组织、则无需光照,直接进行暗培养
第五步 愈伤组织的诱导、把形成的愈伤组织转接到生芽生根培养基上、进行再分化
第六步 得试管苗、转种、

植物细胞组织培养
一.实验目的

植物细胞和组织培养的技术性强,要求无菌操作,通过本实验可初步掌握常规的组织培养技术,加深对无菌操作的了解。

二.实验原理

植物的全能性:植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力,称为植物的全能性。

植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物组织培养按其原始意义,就是指愈伤组织培养。但发展至今,其范围日益扩大,已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养。因此,拥有几种不同水平的培养技术,即整体的、器官的、组织的、细胞的和原生质的培养技术。它们的涵义是:
1.植株培养。指以具备完整植株形态的材料(如幼苗和较大的植株)外植体的无菌培养。

2. 胚胎培养。指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。

3. 器官培养。指以植物的根,茎,叶,花,果等器官为外植体的离体无菌培养,如根的根尖和切段,茎的茎尖,茎节和切段,叶的叶原基,叶片,叶柄,叶鞘和子叶,花器的花瓣,雄蕊(花药,花丝),胚珠,子房,果实等的离体无菌培养。

4. 组织培养。指以分离出植物各部位的组织(如分生组织,形成层,木质部,韧皮部,表皮,皮层,胚乳组织,薄壁组织,髓部等),或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。这是狭义的组织培养。

5. 细胞培养。指以单个的游离细胞(如用果酸酶从组织中分离的体细胞,或花粉细胞,卵细胞)为接种体的离体无菌培养。

6. 原生质体培养。指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。

本实验选择烟草和豌豆为材料,烟草(Nicotiana)属茄科植物,是重要的工业原料,也是植物组织培养的四大典型实验植物(烟草、矮牵牛、胡萝卜、芸苔)中重要的一种,它的研究的最为广泛,也始终领先于其他的植物材料,目前,66个烟草品种中,再生成植株的有16个种,通过花药培养再生成花粉植株的有12个种,通过原生质体培养再生成植株的有20个种,通过烟草的种内和种间原生质体融合再生成杂种的植物分别为3个和12个种。豌豆(Pisum sativum)属豆科植物,是粮食、饲料和重要的蔬菜作物,也是遗传学家和植物生理学家感兴趣和乐于采用的实验植物,豌豆的根、茎、子叶、下胚轴、上胚轴、花芽等外植体,皆可形成愈伤组织,其中茎尖、幼胚、幼叶等器官可成功的再生成植株。茎尖培养可包括小至十几微米的茎尖分生组织(生长点)和大至几十毫米的茎尖或更大的芽培养。在实践应用上,常采用生长点的培养使患病植物去病毒,以达到挽救优良品种,提高产量和质量之目的。

三.实验材料

仪器设备

1.酒精灯、100ml三角烧瓶,9厘米培养皿;

2.镊子、剪刀、解剖针;

3.双筒解剖显微镜;

4.光照培养箱或温室;

材料和试剂

1.材料 烟草无菌苗、豌豆幼苗。

2.试剂

(1)MS培养基,植物激素:NAA、6-BA等;

(2)饱和漂白粉液(次氯酸钠);

(3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;

(4)无菌水

四.实验步骤

1.烟草无菌苗的快速切繁—继代培养:(要求完全无菌操作)
每组一瓶烟草无菌苗,请细心操作,以免污染。
(1) 在实验台上,点着酒精灯,将双手用酒精棉球擦拭消毒,打开生长好无菌烟草苗的三角瓶,三角瓶的瓶口使用前后需在酒精灯外焰上烧过灭菌。
(2) 用灭菌的镊子轻轻捏出1株幼苗,用灭菌的剪刀将无菌苗剪成0.5-1厘米的小段,要求每段至少包含一个生长点,直接剪入盛有MS培养基的三角瓶中,每一个切段必须直接接触培养基,三角瓶口重新烧过灭菌,并重新封好口。
(3) 在光照培养箱中15~25℃,16小时光照条件下培养4周,可长成完整植株,能用于田间移栽。
2.豌豆苗的茎尖培养
⑴ 取发芽6天的豌豆幼苗10株,简取1厘米左右的茎尖,浸入70%的酒精中1分钟,再浸入饱和次氯酸钠溶液中消毒15分钟,(此步以后要求无菌)用无菌水中冲洗5次,在灭菌的滤纸上吸干水分,放入灭菌的培养皿中。
⑵ 在双目解剖镜下,用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥,用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥。
⑶ 将挑好的茎尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)的培养基上诱导愈伤组织形成,用封口膜将培养皿封好。
[4]在恒温培养箱中,26℃下,培养六周,形成愈伤组织,经继代后,可用于生根培养。

第一步,将采来的植物材料除去不用的部分
第二步是对材料的表面浸润灭菌
第三步是用灭菌剂处理

网上有的教的、

  • 植物组织培养的基本过程。谢谢
    答:培养步骤 第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时...
  • 植物组织培养的一般过程有哪些?
    答:1. 准备阶段:在开始前,研究者需查阅文献,参考已有的成功案例,并结合实际情况,制定出具体的培养计划。培养基及其配方需经过消毒处理,确保无菌。2. 外植体选择与消毒:选取适宜的植物部位作为外植体,并在采集后进行预处理。接着,使用适当的消毒剂对外植体进行消毒,之后将其切割成小块或分离出特定组...
  • 植物细胞与组织培养的基本过程包括哪些步
    答:植物组织培养的基本流程为:离体 的植物器官、组织或细胞(外植体)—脱 分化形成愈伤组织—再分化形成根、芽等器官—长成植物体。1.植物细胞的脱分化。离体的植物组织或细胞,在培养了 一段时间以后,会通过细胞分裂,形成愈 伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无 规则,是一种高度液泡化的呈无定形状 态...
  • 植物组织培养的过程
    答:过程如下:进行植物组织培养时,把多余部分去除,植株表面洗净,分成小株,切口处用多菌灵消毒,之后用纱布包好。容器进行消毒处理,植株消毒时要在接种箱里进行,浸泡在酒精中10-30s,表面湿润后捞出接种到培养基中,在培养室培养保证器官形成。当形成球茎和芽时要进行切割,进行继代培养,并添加生长素来...
  • 请分别简述,植物组织培养、植物细胞培养、植物原生质体培养的过程。
    答:3 愈伤组织在分化形成植株(要一定光照,细胞分裂素/生长素 比值高时,形成芽 ,低时,形成根)条件:整个过程中要确保无菌,且必须有植物生长所需营养:无机盐,糖类等,尤其是激素)原理:细胞全能性 植物细胞培养:目的与植物组织培养不同,前者要获得植株,而细胞培养要获得细胞次级代谢产物 1 2与...
  • 进行植物组织培养一般要经历哪几个阶段?
    答:由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的脱分化,或者叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗,移栽到地里,可以发育成完整的植物体。 植物组织培养一般的的流程 植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS...
  • 植物组培的四个过程是什么?
    答:植物组培的四个主要过程包括:外植体准备与消毒:将母体植物采集的叶片或茎段进行无菌处理,去除表面杂菌和泥沙,然后用75%酒精或漂白 粉等消毒剂对外表进行消毒,以减少外植体在培养过程中受到污染的风险。脱分化(去分化):将消毒后的外植体在无菌条件下切割成小片,大小约为0.5-1cm,并接种在含有植物...
  • 简单概述植物组织培养过程.
    答:一、采集培养材料 组织培养可以利用多种植物材料,包括根、茎、叶、花、芽和种子等。对于不同类型的植物,采集的材料有所不同。例如,木本花卉中,阔叶树种可取自一年生枝条,而针叶树种则常取种子内的子叶或胚轴。在快速繁殖中,茎尖是最常用的材料,通常切成0.5厘米大小的块状。若培养无病毒苗木,通常...
  • 组织培养的步骤是怎样的?
    答:操作过程始终在无菌条件下进行,外植体消毒要彻底,但不过分伤害其组织,整个过程严把无菌关。组织分化的控制:利用植物体的一小块组织培育出一棵完整的植株,需要经过细胞的分裂、生长和分化,包括组织和器官的生长和分化,这一系列的变化都是在植物激素的调控下进行的。在组织培养中使用的植物生长调节物质...
  • 请分别简述,植物组织培养、植物细胞培养、植物原生质体培养的过程。
    答:植物组织培养:1 植物进行切割形成外植体(芽 茎 根尖等)2 外植体离体培养脱分化形成愈伤组织(这里需要高浓度的生长素和细胞分裂素强烈促进形成愈伤组织,同时要暗培养,防止分化成其他组织)3 愈伤组织在分化形成植株(要一定光照,细胞分裂素/生长素 比值高时,形成芽 ,低时,形成根)条件:整个过程中...