紫外分光光度计测量DNA在260和280纳米的吸光度的意义及区别?

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-08-05
吸光度260/280是什么意思

OD260/280比值指260nm和280nm下吸光光度比值。OD是optical density(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度, OD=lg(1/trans),其中trans为检测物的透光值。
一般来说OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白质的吸光度。 A260/A280与OD260/OD280的意思是一样的。A代表吸光值,而OD是光密度值,一个意思。

扩展资料
1、纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白质、酚等污染)符合要求的纯度较高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间,低于此范围表明蛋白质含量超标,高于此范围表明样品中含有RNA。
2、纯RNA:OD260/OD280≈2.0(<1.7时表明有蛋白质或酚污染;>2.0时表明可能有异硫氰酸残存)。
符合要求的纯度较高的纯化RNA其OD260/OD280在1.7-2.0之间,低于此范围表明样品中有蛋白质或苯酚,如果比值能达到1.9-2.0,RNA的纯度就已经很高了。
参考资料来源:百度百科-OD260/280比值

紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的: 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理,掌握测定方法. 原理: 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链 寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值 (OD260/OD280),估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽,若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰. 紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液,对浓度更小的样品,可采用荧光分光光度法. 试剂与仪器: 提取的质粒DNA,紫外分光光度仪. 操作步骤: 1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零. 2) 取质粒DNA样品2μl,用水稀释100倍,转入分光光度计的石英比色杯中. 3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为μg/μl,则样品DNA浓度为OD 值的10倍,即如 OD260=0.1,则样品浓度即为1μg/μl. 4) 若OD260/OD280大于1.8,说明仍有RNA,可以考虑用RNA酶处理样品,若小于1.8,说 明样品中含有蛋白质或酚,应再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉淀纯化DNA.

DNA的碳环结构使它在OD260处有特异吸收,对标准样品来说,浓度为1μg / ml时,当OD260=1时, dsDNA浓度约为50μg / ml
ssDNA浓度约为37μg / ml
RNA浓度约为40μg / ml
经验值:
纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白质、酚等污染)
纯RNA:1.7 <OD260/OD280<2.0(<1.7时表明有蛋白质或酚污染;>2.0时表明可能有异硫氰酸残存)

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    答:DNA/RNA吸收光谱峰在260 nm处,据计算,测定此波长下DNA溶液的OD值,当OD260=1时,双链DNA含量约为50 μg/ml ,单链DNA与RNA含量为40 μg/ml ,寡核甘酸的含量为33 μg/ml ,据此可用紫外分光光度计测定溶液中DNA或RNA的含量。由于蛋白质的吸收峰在280 nm处,在测定 DNA或RNA含量时,还常...
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    答:这个,我测DNA浓度的时候只关注两个数值。一,A260/A280,如果在1.8+—0.2范围内,这就说明提取的DNA还比较纯净。最好是1.8 二,浓度,37ug/ml就是37ng/ul,如果你是用1ml菌液小提的话,这个是低了很多。一般小提在100-200ng/ul吧 ...
  • 紫外分光光度计检测DNA最高值不在260,为什么?
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