DNA含量的测定方法

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-08-05
测定DNA含量用什么方法?

组成核酸分子的碱基,均具有一定的吸收紫外线特性,最大吸收值在波长为250~270nm之间。核酸的最大吸收波长是260nm,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。在波长260nm紫外线下,1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为20μg/ml。可以次来计算核酸样品的浓度。分光光度法不但能确定核酸的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度。DNA的比值为1.8,RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8,说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。当然也会出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况,所以有必要结合凝胶电泳等方法鉴定有无RNA。或用测定蛋白质的方法检测是否存在蛋白质。紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液。对于很稀的溶液可采用荧光光度法。

外分光光度计 OD260/280比值,如果浓度够大的话可以适当稀释,是OD260在0.1到1之间最好。
OD260值为1时,双链DNA一般为50ng/ul.单链DNA一般为40ng/ul,需要具体测的话还是用荧光定量DNA检测试剂盒,用多功能酶标仪检测。
还有一种就是跑电泳,根据已知浓度条带的亮度对比你提的DNA亮度,这个需要分析软件,肉眼是无法正确比较的。

那要看你用什么方法测定DNA和RNA:
(1)紫外吸收法也就是测量OD(260)和OD(280)的吸收值,这样的方法其它的杂质对测量结果影响大一点,因为其它杂质在这两个吸收波长也有吸收。
(2)荧光法,用PicoGreen荧光染料,测定DNA,RNA浓度比较灵敏,并且适合测量低浓度和微量DNA和RNA,并且受其它杂质的影响不大,缺点要有专门的荧光检测仪器,试剂比较昂贵。
纯化DNA可以买试剂盒,主要有膜吸附法,磁珠分离法,都很方便。

紫外分光光度计
od260/280比值,如果浓度够大的话可以适当稀释,是od260在0.1到1之间最好,od260值为1时
双链dna一般为50ng/ul.单链dna一般为40ng/ul,需要具体测的话还是用荧光定量dna检测试剂盒,用多功能酶标仪检测,还有一种就是跑电泳,根据已知浓度条带的亮度对比你提的dna亮度,这个需要分析软件,肉眼是无法正确比较的。

DNA测序的方法简介



  • 测定DNA含量用什么方法
    答:测定DNA含量用分光光度计检测法。检测步骤如下:1、预热紫外分光光度计10-20分钟。2、取所需的比色杯,其中一只装入3毫升水溶液,作为空白液,用来校正分光光度计零点及调整透光度至100。3、 DNA含量的测定:取3微升的DNA样品加入比色杯,加蒸馏水至3000微升,混匀;将比色杯置入分光光度计中,调...
  • 测定DNA含量用什么方法?
    答:分光光度法不但能确定核酸的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度。DNA的比值为1.8,RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8,说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。当然也会出现既含蛋白质...
  • DNA制品可用哪几种方法测定其含量,试从原理,准确性方面加以比较_百度...
    答:测定DNA浓度的方法有两种,即利用分光光度计法测定DNA的紫外光吸收值;另一种方法是测定样品中溴化乙锭发射的荧光的强度来计算核酸的含量.紫外光吸收法:因为组成核酸的碱基(G,A,T,C)在260nm处具有强吸收峰,所以通过测定260nm的吸收峰即可对DNA进行定量.但有时也会因为所处溶液的pH值不同而导致吸光系...
  • 二苯胺显色法测定dna含量优缺点
    答:二苯胺显色法是一种常用的测定DNA含量的方法,其优点在于操作简便、快速、灵敏度高,且结果准确可靠。该方法的原理是DNA在酸性条件下可被溴化钾氧化成脱氧核糖,而脱氧核糖在高温碱性条件下与二苯胺反应生成蓝色化合物,通过测定该蓝色化合物的吸光度可计算出DNA的含量。然而,二苯胺显色法也存在一些缺点。
  • DNA含量的测定方法
    答:(1)紫外吸收法也就是测量OD(260)和OD(280)的吸收值,这样的方法其它的杂质对测量结果影响大一点,因为其它杂质在这两个吸收波长也有吸收。(2)荧光法,用PicoGreen荧光染料,测定DNA,RNA浓度比较灵敏,并且适合测量低浓度和微量DNA和RNA,并且受其它杂质的影响不大,缺点要有专门的荧光检测仪器,...
  • 测定DNA含量可以用什么方法?
    答:是OD260在0.1到1之间最好。OD260值为1时,双链DNA一般为50ng/ul.单链DNA一般为40ng/ul,需要具体测的话还是用荧光定量DNA检测试剂盒,用多功能酶标仪检测。还有一种就是跑电泳,根据已知浓度条带的亮度对比你提的DNA亮度,这个需要分析软件,肉眼是无法正确比较的。
  • 核酸含量的测定方法及原理都有哪些?
    答:核酸定量常用方法及原理如下:1、光吸收法:核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收,吸收强度与核酸浓度成正比,因此可以用于核酸定量。2、定P法:核酸中P含量约为9.5%,因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质...
  • 测定DNA含量可以用什么方法?
    答:是OD260在0.1到1之间最好。OD260值为1时,双链DNA一般为50ng/ul.单链DNA一般为40ng/ul,需要具体测的话还是用荧光定量DNA检测试剂盒,用多功能酶标仪检测。还有一种就是跑电泳,根据已知浓度条带的亮度对比你提的DNA亮度,这个需要分析软件,肉眼是无法正确比较的。
  • 测DNA含量绘标准曲线时,怎么算DNA的浓度
    答:DNA及RNA含量测定方法:取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。用lml水做空白。把样品杯放在分光光度计比色槽上。每ul中DNA或RNA浓度(ug)将是OD值的10倍,例如稀释后样品在260nm处OD值为0.2,则原DNA或RNA样品浓度为2ug/ul。如果想要检测样品的纯度,那么还要再测一次280nm处OD值,计算二者的比率...
  • 如何用紫外吸收法测定DNA含量
    答:首先,分光光度计测量的样品必须是均一的,摇匀后再测量结果会准确些。它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算...