养raw264.7巨噬细胞要注意什么?

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-07-27
关于RAW264.7巨噬细胞转染的问题

跟您细胞的状态有关,RAW246.7是单核-巨噬细胞,如果培养条件不好,就容易被诱导分化,这也直接影响转染效率,我们实验室一般都会选择RFect-siRNA瞬时转染,本身RAW264.7巨噬细胞也是比较皮实的,比普通贴壁细胞略微难度要大一点。

用含10% 胎牛血清的无酚红DMEM培养液培养,其中含50 U/ml青霉素和50 μg/ml庆大霉素。3 d换液1次, 细胞汇片后, 用胰酶二乙胺四乙酸(EDTA)消化液消化细胞,根据不同的实验目的接种于不同规格的培养板上。

品牌:
1、血清:进口品牌主要有HyClone,Gibco。其中,Gibco进国内比较早;而HyClone品质与Gibco相当,价格比Gibco要便宜,具体的价格你可以自己问当地代理商。
2、DMEM:目前国内大部分都是用的Hyclone的培养基,价格很便宜,而且质量很好。

1、该细胞不建议使用胰酶消化,胰酶会刺激分化;
2、 超过3天不传代细胞容易分化;
3、 培养时,存在少量分化细胞,属于正常现象。

  • 养raw264.7巨噬细胞要注意什么?
    答:1、该细胞不建议使用胰酶消化,胰酶会刺激分化;2、 超过3天不传代细胞容易分化;3、 培养时,存在少量分化细胞,属于正常现象。
  • 细胞技术讨论——RAW264.7的基因敲除心得
    答:所以在RAW264.7细胞的培养过程中,要及时换液和传代,否则,饥饿的细胞状态会急剧恶化,出现大量伪足,且不可逆转,最后,细胞生长速度会变得十分缓慢。【ATCC官网RAW264.7细胞培养照片】由于我们对RAW264.7细胞传代和换液的频率控制的比较好,大幅的改善了RAW264.7细胞的状态。下图是RAW264.7的细胞状态...
  • 小鼠巨噬细胞好养吗
    答:正确的传代方法是养好RAW264.7的关键,每一步操作都要细致入微,稍有不慎细胞就分化了。RAW264.7不能用胰酶消化,许多实验室用细胞刮传代,这是一种非常经典好用的方法。普诺赛在养RAW264.7细胞这十几年里,摸索出一个更不错的方法:吹打传代。吹打传代操作简单,对养细胞的新手们更友好,也能更...
  • raw264.7细胞的信息和培养方法,详细的培养基和血清
    答:1、血清:进口品牌主要有HyClone,Gibco。其中,Gibco进国内比较早;而HyClone品质与Gibco相当,价格比Gibco要便宜,具体的价格你可以自己问当地代理商。2、DMEM:目前国内大部分都是用的Hyclone的培养基,价格很便宜,而且质量很好。
  • 请教一下 :我要开始养RAW264.7小鼠单核巨噬细胞,是该用1640还是DMEM做培...
    答:用DMEM可以。DMEM培养基体外培养的巨噬细胞存活率和成层率高、吞噬能力强,与RPMI 1640相比,DMEM可作为一种简单而实用的体外分离培养巨噬细胞的培养基。但是培养基的具体成分,血清加入量等最好你询问一下细胞来源处,这样更利于细胞生长。
  • 硬核| 细胞培养笔记
    答:首先,倒掉旧的培养基,加入 3 ml 新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走。然后再加入 3 ml 的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地沿着瓶底过一遍,然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。巨噬细胞我只吹打,不消化。其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内。培养瓶事...
  • 关于RAW264.7巨噬细胞转染的问题
    答:跟您细胞的状态有关,RAW246.7是单核-巨噬细胞,如果培养条件不好,就容易被诱导分化,这也直接影响转染效率,我们实验室一般都会选择RFect-siRNA瞬时转染,本身RAW264.7巨噬细胞也是比较皮实的,比普通贴壁细胞略微难度要大一点。
  • 基因编辑RAW 264.7细胞系——助力炎症以及破骨细胞生成相关研究_百度...
    答:1. 破骨细胞生成研究:RAW 264.7已被证明在RANKL诱导下容易分化为破骨细胞。与原发性破骨细胞前体不同,RAW 264.7的分化无需添加巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)。2. 炎症研究:RAW264.7是筛选抗炎活性物和研究炎症最常用的体外研究模型。在诱导剂(如脂多糖LPS)的作用下,RAW264.7...
  • 有哪位做过RAW264.7巨噬细胞的转染吗
    答:请先把细胞养好,我实验室用Advanced Transfection Reagent转染试剂AD60015做了24孔板转染RAW264.7小鼠单核巨噬白血病细胞的转染,转染体系大概总结如下 转染质粒DNA:pcDNA3.1-GFP 质粒DNA大小:8000bp 转染完全培养基用量:500ul 转染试剂用量:2.5ul 转染细胞密度:80 ...
  • 如何转染好RAW264.7细胞
    答:好多同学都说RAW264.7细胞难转染,相关文献也提到RAW264.7细胞能做瞬转,我师姐实验室用RFect-siRNA方法转染COS-7细胞效果不错,我觉得转染RAW264.7细胞应该也可以,如果楼主考虑用电转的话需要控制好电场强度,电场强度过高会增加细胞的死亡率,实验前需要测定RAW264.7细胞的最佳电场强度。