人类染色体标本制备实验报告观察不到的原因
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-02
做染色体制片观察的时候 老是看不到清晰的一条一条的染色体 怎么回事?
一.实验步骤及控制措施
1.标本采集、接种与培养：
将患者采血部位进行常规消毒，用5mL一次性无菌注射器或采血针采血约3mL，注入5mL无菌的肝素锂抗凝管，颠倒混匀。加强门诊、住院部标本采集人员的培训，标本必须无菌采集，避免溶血、凝血。
在生物安全柜内，用一次性无菌注射器（2.5mL）抽取抗凝血，向培养瓶内（含5mL人体外周血淋巴细胞培养基）接种，每瓶0.4mL，至少接种两瓶，接种后轻轻水平摇动几次混匀。分别直立于两个37±0.5℃培养箱内培养66~72h，注意第二天观察培养液有无凝血、溶血或长菌等现象。所有用于细胞培养的培养液和细胞学处理的试剂，必须做预试验，新批号试剂到货后必须做批间验证试验。
2.细胞的收获、制片：
培养终止前需在生物安全柜内向培养基中加入秋水仙素，秋水仙素的最终浓度为0.1~0.5μg/mL，轻轻摇动混匀，37±0.5℃培养箱中处理1.5h。秋水仙素处理完毕后，小心地从温箱取出培养瓶，用吸管吸取培养物入离心管，离心：1500r/m×10min。弃上清液，然后加入37℃温育的0.075mol/L的KCl低渗液8~10mL，用吸管吹打成细胞悬液，置37℃水浴处理25min。在每个离心管中加入1.5mL的卡诺固定液( 甲醇: 乙酸 3:1)，轻轻吸吹混匀，室温下放置10min。离心：1500r/m×10min，弃上清液。然后在离心管中加入卡诺固定液8mL，立即用吸管轻轻吹打成单个细胞悬液，室温下放置30min，离心：1500r/m×10min，弃上清液，如此重复3次。秋水仙素处理时间过长，分裂细胞多，染色体短小；反之，则少而细长。两种情况都不宜观察形态及计数，故秋水仙素的浓度及时间要准确掌握。低渗使红细胞膜破裂，淋巴细胞膨胀，低渗处理浓度及时间要适当。但固定后混匀细胞一定要轻，否则引起细胞破裂、染色体丢失。
在离心管中滴入新鲜固定液0.2~0.5 mL，用吸管将淋巴细胞团轻轻吹打成细胞悬液，从冰箱内取出冰片，每片滴加悬液2~3滴，75℃烤片2~3h。载玻片一定要洁净冰浴，否则染色体分散不好。制片过程中，如发现细胞膨胀得不大，细胞膜没有破裂，染色体聚集一团伸展不开，可将固定时间延长数小时或适当提高冰醋酸比例。
3.显带和染色
将50mL pH为7.4的1/15M磷酸盐缓冲液倒入立式染色缸内，加入2.5%胰蛋白酶溶液0.5mL，混匀。胰酶消化后用10%Giemsa染液染色3min，然后用镊子夹出玻片，用自来水轻轻冲洗两面，电吹风吹干。每次显带均应做预实验处理，以决定正确的显带时间，不可盲目处理所有玻片。显带效果的判断，应多观察几个长度适中的分裂相，不能仅凭1、2个分裂相的显带效果决定下一步显带时间。
二.培养失败后的原因分析
就2015年而言，截至目前1500例标本，有10例标本培养制片后不能用于染色体分析。外周血染色体制备为手工项目，其过程繁琐，每一环节都要严格把关。本室工作人员均经过严格培训，考核合格后才能上岗。这10例培养失败的标本，其原因均已排除由工作人员操作失误导致。而实验室的设施环境均满足实验要求。因此，我们对这六位患者进行电话回访，发现共同特点是使用了抗炎药物，尤其是儿科住院患者占多数。
抗生素类药物可能对淋巴细胞的转化产生抑制作用而影响培养质量。对这部分患者，我们建议停药后至少两周再重新采血复查。有4例患者经重新采血培养后淋巴细胞量增多，可以用于染色体分析，均已发报告。1例患者重新采血后仍未见有效的分裂相，电话回访得知还在继续服用中成抗炎药。还有5例患者至今仍未复查。
三.纠正及预防措施
对于外周血染色体制备失败的病例，我们首先排除人为失误及实验室设施环境的影响，在同等条件下再考虑是否是病例本身的原因。因此采用的纠正措施是：告知患者标本培养失败，原因可能与使用抗炎药物有关，建议停药至少两周后重新采血复查。
目前我室在采集标本前均询问患者病史，因此通过询问是否使用抗炎药物来预防培养失败率。告知染色体检查不是急查项目，可以停药后再来检查。
总之， 要制备出良好的染色体标本进行核型分析，对细胞培养、制片和显带， 每一个步骤都不能忽视。需在操作过程中不断的总结经验，以便提高外周血染色体标本制备的成功率。
遗传组 杨丽/文
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失败的标本，其原因均已排除由工作人员操作失误导致。而实验室的设施环境均满足实验要求。因此，我们对这六位患者进行电话回访，发现共同特点是使用了抗炎药物，尤其是儿科住院患者占多数。
抗生素类药物可能对淋巴细胞的转化产生抑制作用而影响培养质量。对这部分患者，我们建议停药后至少两周再重新采血复查。有4例患者经重新采血培养后淋巴细胞量增多，可以用于染色体分析，均已发报告。1例患者重新采血后仍未见有效的分裂相，电话回访得知还在继续服用中成抗炎药。还有5例患者至今仍未复查。
对于外周血染色体制备失败的病例，我们首先排除人为失误及实验室设施环境的影响，在同等条件下再考虑是否是病例本身的原因。因此采用的纠正措施是：告知患者标本培养失败，原因可能与使用抗炎药物有关，建议停药至少两周后重新采血复查。
目前我室在采集标本前均询问患者病史，因此通过询问是否使用抗炎药物来预防培养失败率。告知染色体检查不是急查项目，可以停药后再来检查。
总之， 要制备出良好的染色体标本进行核型分析，对细胞培养、制片和显带， 每一个步骤都不能忽视。需在操作过程中不断的总结经验，以便提高外周血染色体标本制备的成功率。
1.
在制备细胞悬液过程中有染色体的丢失。如用吸管吹散细胞时用力过大造成细胞破裂, 使得染色体弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失。
2.
在距离载玻片一定高度滴片时因高度过高,使得染色体过于分散而导致丢失。
3.
滴完片在敲打载玻片的过程中导致染色体的丢失。
4.
染色时,由于在染液中染了30min,部分染色体可能会随染液丢失。 实验中没有观察到完全展开好的染色体,染色体大多呈棒状而不是V字形,这说明在对染色体展平的步骤没有做好,以后应改进。
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在制备细胞悬液过程中有染色体的丢失。如用吸管吹散细胞时用力过大造成细胞破裂, 使得染色体弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失。
2.
在距离载玻片一定高度滴片时因高度过高,使得染色体过于分散而导致丢失。
3.
滴完片在敲打载玻片的过程中导致染色体的丢失。
4.
染色时,由于在染液中染了30min,部分染色体可能会随染液丢失。 实验中没有观察到完全展开好的染色体,染色体大多呈棒状而不是V字形,这说明在对染色体展平的步骤没有做好,以后应改进。
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人类染色体标本制备实验报告观察不到的原因
答：秋水仙素加入量过多,染色体太短;加人太少,染色体瘦长或无中期分裂相。
人类染色体标本制备实验报告观察不到的原因
答：对于外周血染色体制备失败的病例，我们首先排除人为失误及实验室设施环境的影响，在同等条件下再考虑是否是病例本身的原因。因此采用的纠正措施是：告知患者标本培养失败，原因可能与使用抗炎药物有关，建议停药至少两周后重新采血复查。目前我室在采集标本前均询问患者病史，因此通过询问是否使用抗炎药物来预防...
遗传实验室染色体检查报告单看不明白?
答：不是的，Y染色体本就比X染色体短。抽烟影响健康，本人的染色体不会突变，基因会变，只在精子检验才看的出，而且基因突变在染色体上一般是看不出的，只有基因检查才看得出。
人类非显性带染色体核型配对实验原理要求
答：非显带染色体：染色体标本制作好后，不经处理直接染色，整条染色体均匀着色（相对于后面的显带染色体而言）。人中期细胞染色体（数目2N=46，结构特点）正常人体细胞染色体的观察与计数：每位同学发一张正常人外周血淋巴细胞染色体制片，进行染色体观察和计数。染色体在细胞周期中经历着凝缩和舒展的周期性变化。...
...分裂过程中染色体行为的观察及制片技术实验报告压片是要注意哪些问...
答：4. 观察和记录：使用显微镜观察压片，记录观察到的染色体数目、形态、行为等信息，拍摄照片。5. 压片后的处理：实验结束后，要将压片用清水洗净，晾干备用。同时，实验使用的工具要进行清洗和消毒，避免对实验造成污染。6. 实验结果分析与报告：根据观察结果，分析减数分裂过程中染色体的数目、形态、行为等...
徐道觉的遗憾的徐道觉
答：一天晚上，徐道觉照常到实验室做研究。在一些治疗性流产的胚胎组织（皮肤和脾）培养标本中，他按照常规操作步骤用盐溶液冲洗细胞时，竟然在显微镜下看到了铺展很好的染色体！他简直不敢相信自己的眼睛，到实验室外的咖啡馆里喝了一杯咖啡，清醒头脑之后再回到实验桌上，仍然观察到了同样的现象。没有1个分裂...
请有经验的朋友们帮我看一下我的染色体检查报告单,谢谢大家了。_百度...
答：人类第9号染色体异染色质区倒位(inv(9))及增长(9qh+)的发生率依种族而有差异性，且因其携带者之外表多无异常，一直被视为染色体的正常多型性。就是说，一般情况下不产生畸形。但可能与以后的一些慢性病有关。这样的情况现在临床还没有办法治疗。半年以后可以再次考虑妊娠 ...
人类染色体制备成功的关键有哪些?
答：染色体数目会在一定的生理、病理或外界条件下发生改变。有些先天性疾病是由于染色体数目的变异引起的，如先天愚型是由于第21对染色体上多了一个所引起的。因此开展染色体的研究，在临床上对疾病的早期诊断以及开展产前遗传咨询和对提高民族的素质等十分重要。 人体共有23对染色体，其中22对为常染色体，剩余一...
人体哪些细胞可以制备人类染色体标本
答：人体哪些细胞可以制备人类染色体标本 自主复制DNA序列：自主复制DNA序列具有一个复制起始点,能确保染色体在细胞周期中能够自我复制,从而保证染色体在世代传递中具有稳定性和连续性.着丝粒DNA序列：着丝粒DNA序列与染色体的分离有关.着丝粒DNA序列能确保染色体在细胞分裂时能被平均分配到2个子细胞中去.端粒DNA序列...
小鼠骨髓细胞染色体标本制备和观察实验报告
答：首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素，处死小鼠，剪下四肢，剔除肉等，剪碎骨，加生理盐水，离心取细胞（离心管底部），再经低渗处理，染色，滴冰片，镜检。很麻烦，具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备)。
没有找到处于分裂期的细胞~那种一团团的是间期，或者是已经成熟不再分裂的细胞。你取材的时期要调一下，一般分几次取材比较好~另外要注意取材部位啊，分生区比成熟区细胞更多处于分裂期~还有可能是压片有问题，细胞没有被分散开，或者显微镜倍数没调好~
染色过浅或者显微镜未调置好。
外周血淋巴细胞培养及染色体制备技术已广泛应用于细胞遗传学研究及染色体疾病诊断。由于该技术要求细胞培养时间较长、制备过程复杂，因而易受温度、湿度、PH值、溶血和凝血等因素影响而导致实验失败。因此，控制好每一个实验步骤，对于实验的成败至关重要。而个别标本仍然存在无法进行核型分析的现象，对于这部分标本重点分析其失败原因。一.实验步骤及控制措施
1.标本采集、接种与培养：
将患者采血部位进行常规消毒，用5mL一次性无菌注射器或采血针采血约3mL，注入5mL无菌的肝素锂抗凝管，颠倒混匀。加强门诊、住院部标本采集人员的培训，标本必须无菌采集，避免溶血、凝血。
在生物安全柜内，用一次性无菌注射器（2.5mL）抽取抗凝血，向培养瓶内（含5mL人体外周血淋巴细胞培养基）接种，每瓶0.4mL，至少接种两瓶，接种后轻轻水平摇动几次混匀。分别直立于两个37±0.5℃培养箱内培养66~72h，注意第二天观察培养液有无凝血、溶血或长菌等现象。所有用于细胞培养的培养液和细胞学处理的试剂，必须做预试验，新批号试剂到货后必须做批间验证试验。
2.细胞的收获、制片：
培养终止前需在生物安全柜内向培养基中加入秋水仙素，秋水仙素的最终浓度为0.1~0.5μg/mL，轻轻摇动混匀，37±0.5℃培养箱中处理1.5h。秋水仙素处理完毕后，小心地从温箱取出培养瓶，用吸管吸取培养物入离心管，离心：1500r/m×10min。弃上清液，然后加入37℃温育的0.075mol/L的KCl低渗液8~10mL，用吸管吹打成细胞悬液，置37℃水浴处理25min。在每个离心管中加入1.5mL的卡诺固定液( 甲醇: 乙酸 3:1)，轻轻吸吹混匀，室温下放置10min。离心：1500r/m×10min，弃上清液。然后在离心管中加入卡诺固定液8mL，立即用吸管轻轻吹打成单个细胞悬液，室温下放置30min，离心：1500r/m×10min，弃上清液，如此重复3次。秋水仙素处理时间过长，分裂细胞多，染色体短小；反之，则少而细长。两种情况都不宜观察形态及计数，故秋水仙素的浓度及时间要准确掌握。低渗使红细胞膜破裂，淋巴细胞膨胀，低渗处理浓度及时间要适当。但固定后混匀细胞一定要轻，否则引起细胞破裂、染色体丢失。
在离心管中滴入新鲜固定液0.2~0.5 mL，用吸管将淋巴细胞团轻轻吹打成细胞悬液，从冰箱内取出冰片，每片滴加悬液2~3滴，75℃烤片2~3h。载玻片一定要洁净冰浴，否则染色体分散不好。制片过程中，如发现细胞膨胀得不大，细胞膜没有破裂，染色体聚集一团伸展不开，可将固定时间延长数小时或适当提高冰醋酸比例。
3.显带和染色
将50mL pH为7.4的1/15M磷酸盐缓冲液倒入立式染色缸内，加入2.5%胰蛋白酶溶液0.5mL，混匀。胰酶消化后用10%Giemsa染液染色3min，然后用镊子夹出玻片，用自来水轻轻冲洗两面，电吹风吹干。每次显带均应做预实验处理，以决定正确的显带时间，不可盲目处理所有玻片。显带效果的判断，应多观察几个长度适中的分裂相，不能仅凭1、2个分裂相的显带效果决定下一步显带时间。
二.培养失败后的原因分析
就2015年而言，截至目前1500例标本，有10例标本培养制片后不能用于染色体分析。外周血染色体制备为手工项目，其过程繁琐，每一环节都要严格把关。本室工作人员均经过严格培训，考核合格后才能上岗。这10例培养失败的标本，其原因均已排除由工作人员操作失误导致。而实验室的设施环境均满足实验要求。因此，我们对这六位患者进行电话回访，发现共同特点是使用了抗炎药物，尤其是儿科住院患者占多数。
抗生素类药物可能对淋巴细胞的转化产生抑制作用而影响培养质量。对这部分患者，我们建议停药后至少两周再重新采血复查。有4例患者经重新采血培养后淋巴细胞量增多，可以用于染色体分析，均已发报告。1例患者重新采血后仍未见有效的分裂相，电话回访得知还在继续服用中成抗炎药。还有5例患者至今仍未复查。
三.纠正及预防措施
对于外周血染色体制备失败的病例，我们首先排除人为失误及实验室设施环境的影响，在同等条件下再考虑是否是病例本身的原因。因此采用的纠正措施是：告知患者标本培养失败，原因可能与使用抗炎药物有关，建议停药至少两周后重新采血复查。
目前我室在采集标本前均询问患者病史，因此通过询问是否使用抗炎药物来预防培养失败率。告知染色体检查不是急查项目，可以停药后再来检查。
总之， 要制备出良好的染色体标本进行核型分析，对细胞培养、制片和显带， 每一个步骤都不能忽视。需在操作过程中不断的总结经验，以便提高外周血染色体标本制备的成功率。
遗传组 杨丽/文
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失败的标本，其原因均已排除由工作人员操作失误导致。而实验室的设施环境均满足实验要求。因此，我们对这六位患者进行电话回访，发现共同特点是使用了抗炎药物，尤其是儿科住院患者占多数。
抗生素类药物可能对淋巴细胞的转化产生抑制作用而影响培养质量。对这部分患者，我们建议停药后至少两周再重新采血复查。有4例患者经重新采血培养后淋巴细胞量增多，可以用于染色体分析，均已发报告。1例患者重新采血后仍未见有效的分裂相，电话回访得知还在继续服用中成抗炎药。还有5例患者至今仍未复查。
对于外周血染色体制备失败的病例，我们首先排除人为失误及实验室设施环境的影响，在同等条件下再考虑是否是病例本身的原因。因此采用的纠正措施是：告知患者标本培养失败，原因可能与使用抗炎药物有关，建议停药至少两周后重新采血复查。
目前我室在采集标本前均询问患者病史，因此通过询问是否使用抗炎药物来预防培养失败率。告知染色体检查不是急查项目，可以停药后再来检查。
总之， 要制备出良好的染色体标本进行核型分析，对细胞培养、制片和显带， 每一个步骤都不能忽视。需在操作过程中不断的总结经验，以便提高外周血染色体标本制备的成功率。
1.
在制备细胞悬液过程中有染色体的丢失。如用吸管吹散细胞时用力过大造成细胞破裂, 使得染色体弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失。
2.
在距离载玻片一定高度滴片时因高度过高,使得染色体过于分散而导致丢失。
3.
滴完片在敲打载玻片的过程中导致染色体的丢失。
4.
染色时,由于在染液中染了30min,部分染色体可能会随染液丢失。 实验中没有观察到完全展开好的染色体,染色体大多呈棒状而不是V字形,这说明在对染色体展平的步骤没有做好,以后应改进。
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在制备细胞悬液过程中有染色体的丢失。如用吸管吹散细胞时用力过大造成细胞破裂, 使得染色体弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失。
2.
在距离载玻片一定高度滴片时因高度过高,使得染色体过于分散而导致丢失。
3.
滴完片在敲打载玻片的过程中导致染色体的丢失。
4.
染色时,由于在染液中染了30min,部分染色体可能会随染液丢失。 实验中没有观察到完全展开好的染色体,染色体大多呈棒状而不是V字形,这说明在对染色体展平的步骤没有做好,以后应改进。
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人类染色体标本制备实验报告观察不到的原因
答：秋水仙素加入量过多,染色体太短;加人太少,染色体瘦长或无中期分裂相。
答：对于外周血染色体制备失败的病例，我们首先排除人为失误及实验室设施环境的影响，在同等条件下再考虑是否是病例本身的原因。因此采用的纠正措施是：告知患者标本培养失败，原因可能与使用抗炎药物有关，建议停药至少两周后重新采血复查。目前我室在采集标本前均询问患者病史，因此通过询问是否使用抗炎药物来预防...
答：不是的，Y染色体本就比X染色体短。抽烟影响健康，本人的染色体不会突变，基因会变，只在精子检验才看的出，而且基因突变在染色体上一般是看不出的，只有基因检查才看得出。
答：非显带染色体：染色体标本制作好后，不经处理直接染色，整条染色体均匀着色（相对于后面的显带染色体而言）。人中期细胞染色体（数目2N=46，结构特点）正常人体细胞染色体的观察与计数：每位同学发一张正常人外周血淋巴细胞染色体制片，进行染色体观察和计数。染色体在细胞周期中经历着凝缩和舒展的周期性变化。...
答：4. 观察和记录：使用显微镜观察压片，记录观察到的染色体数目、形态、行为等信息，拍摄照片。5. 压片后的处理：实验结束后，要将压片用清水洗净，晾干备用。同时，实验使用的工具要进行清洗和消毒，避免对实验造成污染。6. 实验结果分析与报告：根据观察结果，分析减数分裂过程中染色体的数目、形态、行为等...
答：一天晚上，徐道觉照常到实验室做研究。在一些治疗性流产的胚胎组织（皮肤和脾）培养标本中，他按照常规操作步骤用盐溶液冲洗细胞时，竟然在显微镜下看到了铺展很好的染色体！他简直不敢相信自己的眼睛，到实验室外的咖啡馆里喝了一杯咖啡，清醒头脑之后再回到实验桌上，仍然观察到了同样的现象。没有1个分裂...
答：人类第9号染色体异染色质区倒位(inv(9))及增长(9qh+)的发生率依种族而有差异性，且因其携带者之外表多无异常，一直被视为染色体的正常多型性。就是说，一般情况下不产生畸形。但可能与以后的一些慢性病有关。这样的情况现在临床还没有办法治疗。半年以后可以再次考虑妊娠 ...
答：染色体数目会在一定的生理、病理或外界条件下发生改变。有些先天性疾病是由于染色体数目的变异引起的，如先天愚型是由于第21对染色体上多了一个所引起的。因此开展染色体的研究，在临床上对疾病的早期诊断以及开展产前遗传咨询和对提高民族的素质等十分重要。 人体共有23对染色体，其中22对为常染色体，剩余一...
答：人体哪些细胞可以制备人类染色体标本 自主复制DNA序列：自主复制DNA序列具有一个复制起始点,能确保染色体在细胞周期中能够自我复制,从而保证染色体在世代传递中具有稳定性和连续性.着丝粒DNA序列：着丝粒DNA序列与染色体的分离有关.着丝粒DNA序列能确保染色体在细胞分裂时能被平均分配到2个子细胞中去.端粒DNA序列...
答：首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素，处死小鼠，剪下四肢，剔除肉等，剪碎骨，加生理盐水，离心取细胞（离心管底部），再经低渗处理，染色，滴冰片，镜检。很麻烦，具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备)。
