如何分离细胞核与线粒体
细胞核与线粒体分级分离，原理 细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。 分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。 匀浆(Homogenization)低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。 分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中，所以每级离心得到的第一次沈淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。 分析 分级分离得到的组分，可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。 生物帮上面有这方面的内容的，stemcell http://www.bio1000.com/reseach/cell/1817.html
主要有差速离心和密度梯度离心 ：一般是先用差速离心初分离,再用密度梯度离心进一步分离.
以下详细：
细胞器的分离
细胞由细胞膜、细胞核和细胞质组成,细胞质中含有若干细胞器和细胞骨架等,这些也称作亚细胞组分.对于细胞的结构和功能的研究,是细胞生物学的基本课题,其重要的研究手段之一是分离纯的亚细胞组分,观察它们的结构或进行生化分析.分离亚细胞组分的方法主要有差速离心和密度梯度离心.
一、差速离心（differentialcentrifugation）
在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心,用于分离不同大小的细胞和细胞器.
速度逐渐提高,样品按大小先后沉淀
在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体.
由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠,而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中,一般重复2～3次效果会好一些.
差速离心只用于分离密度和大小悬殊的细胞,更多用于分离细胞器.对于精细的分离,则是密度梯度离心效果更好.
密度梯度离心（densitygradientcentrifugation）
用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离.
这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种.
A等速度沉降,B等密度沉降
二、密度梯度离心
速度沉降（velocitysedimentation）主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器.这种沉降方法所采用的介质密度较低,介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度.生物颗粒（细胞或细胞器）在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离.
等密度沉降（isopycnicsedimentation）适用于分离密度不等的颗粒.细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处,并停留在那里达到平衡,从而将不同密度的细胞或细胞器分离.介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度,而且介质的梯度要求较高的陡度,不能太平缓.这种方法适于分离细胞器,而不太适于分离和纯化细胞.
叶绿体的分离
实验方法
1.选取新鲜的嫩菠菜叶片,洗净擦干后去除叶梗和粗脉,撕成小碎块,称3g放于玻璃匀浆器中,加入10ml0.35MNaCl溶液,匀浆3～5min.
2.匀浆液用4层纱布过滤于50ml烧杯中.
3.将滤液平分到2个离心管中,天平配平,1000r/min下离心2min.弃去沉淀.
4.将上清液在3000r/min下离心5min.弃去上清,沉淀即为叶绿体.
5.将沉淀用0.35MNaCl溶液悬浮,取一滴叶绿体悬液滴于载片上,加盖片观察：
①在普通光镜下观察；②在荧光显微镜下观察.
实验结果
1.普通光镜下,可看到叶绿体为绿色橄榄型,在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色颗粒,即基粒.
2.荧光显微镜下,选用蓝色激发滤光片,叶绿体发出火红色荧光
细胞核与线粒体的分级分离
一、原理
细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。
分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。
匀浆(Homogenization)低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。
分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中，所以每级离心得到的第一次沈淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。
分析 分级分离得到的组分，可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。
二、细胞核的分离提取
(一)操作步骤
1．用颈椎脱位的方法处死小白鼠后，迅速剖开腹部取出肝脏，剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9％NaCl的烧杯中，反复洗涤，尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。
2．将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，用量筒量取8ml预冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液，先加少量该溶液于平皿中，尽量剪碎肝组织后，再全部加入。
3．剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，左手持之，右手将匀浆捣杆垂直插入管中，上下转动研磨3～5次，用3层纱布过滤匀浆液于离心管中，然后制备一张涂片①，做好标记，自然干燥。
4．将装有滤液的离心管配平后，放入普通离心机，以2500rpm，离心15分钟；(1)缓缓取上清液，移入高速离心管中，保存于有冰块的烧杯中，待分离线粒体用；(2)同时涂一张上清液片②做好标记，自然干燥；(3)余下的沉淀物进行下一步骤。
5．用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液悬浮沉淀物，以2500rpm离心15分钟弃上清，将残留液体用吸管吹打成悬液，滴一滴于干净的载玻片上，涂片③，自然干燥。
6．将①、②、③涂片用l％甲苯胺兰染色后盖片即可观察。
(二)结果
分别于高倍镜下观察三张涂片，描述镜下所见。
三、高速离心分离提取线粒体
(一)操作步骤
1．将装有上清液的高速离心管，从装有冰块的烧杯中取出，配平后，以17000rpm离心20分钟，弃上清，留取沉淀物。
2．加入0．25mol／L蔗糖一0．003mol／L氯化钙液lml，用吸管吹打成悬液，以17000rpm离心20分钟，将上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入0.1ml 0．25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液混匀成悬液(可用牙签)。
3．取上清液和沉淀物悬液，分别滴一滴于干净载玻片上(分别标记④、⑤涂片)，各滴一滴0.02％詹纳斯绿B染液盖上盖片染20分钟。
(二)结果
油镜下观察，颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。
答：分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。匀浆(Homogenization)低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即0.25mol／L蔗糖一0.003mo...
答：在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体.由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠,而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中,一般重复2～3次效果会好一些.差速离心只用于分离密度和大小悬殊的细胞,更多用于分离细胞器.对于精细的...
答：细胞核沉降系数大，首先是低速离心，分离出细胞核；线粒体沉降系数小，然后是高速离心，分离出线粒体．故选：B．
答：细胞核和线粒体分离的时候正常来说用到的方法都是差速离心法，还有要通过吸水胀破的形式才会让细胞中的这些物质流出来。
答：分离各种细胞器的方法1、分离各种细胞器常用的方法是差速离心法。在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些...
答：运用差速离心法分离细胞器，细胞器沉降由上到下的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法，此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。因为细胞内不同的...
答：（1）从细胞匀浆中分离出细胞器常用的方法是差速离心法． 观察线粒体时，可用健那绿染液进行染色，然后放在光学显微镜下观察即可．（2）在细胞分裂过程中，DNA复制发生在（分裂）间（或细胞分裂间）期，需要核糖核苷酸、酶、ATP等物质从细胞质经核孔进入细胞核．（3）M蛋白嵌合在线粒体内膜上，而有氧...
答：主要是某些化学键的断裂与重排，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核细胞。结果应该是有蛋白质，DNA，脂类物质。涂片的不同应该是细胞核的有无，染色后的分布。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。
答：分离细胞器的方法如下：一、分离细胞器的方法为差速离心或密度梯度离心。二、线粒体：结构包括线粒体内膜、外膜（上分布有基粒）、线粒体基质.线粒体内膜和线粒体基质中含有氧。叶绿体：结构包括叶绿体外被、类囊体和基质3部分组成,外被上分布着光合作用需要的色素,类囊体和基质上有光合作用需要的酶,...
答：为了分离出微粒体，首先通过机械匀浆将细胞裂解，使得各种膜性细胞器破裂。在这一过程中，细胞器如细胞核、线粒体和过氧化物酶体等会被去除，这是因为它们在高速离心下会分离出来。接下来，悬浮液经过较低速度的离心处理，这一过程使得上层的结构形成了囊泡，其表面特征光滑，反映了它们可能与蛋白质的...
