农杆菌转化法有脱分化再分化吗

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-07-23
农杆菌转化法的步骤

1、获取目的基因。用限制酶切割下目的基因。
2、基因表达载体的构建。将目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA连接酶连接起来。
3、将目的基因导入受体细胞。将含目的基因的重组质粒导入农杆菌(农杆菌为受体细胞)。
4、目的基因的检测与鉴定。用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定(这个方法需要导入重组后的细胞的植物体,详见第五步) 几种方法进行检验(根据要求选取不同方法)。
5、最后将成功表达的细胞导入植物体内,对植物体进行个体生物学水平鉴定。

农杆菌是一种在土壤中生活的微生物,能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物,而对大多数单子叶植物没有感染能力。当植物体受到损伤时,伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物,吸引农杆菌移向这些细胞,这时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA(可转移的DNA)可转移至受体细胞,并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这种特点,如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上,通过农杆菌的转化作用,就可以使目的基因进入植物细胞,并将其插入到植物细胞中染色体的DNA上,使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。它是将目的基因导入植物细胞采用最多的方法。

农杆菌转化是为了把目的基因导入受体细胞(植物)内
当导入后
接下来确实需要对受体细胞进行组织培养,此过程需要脱分化和再分化
但组织培养过程已经不是农杆菌转化的过程了 !

看你转化的植物适合什么样的组培方法了,有些植物需要脱分化和再分化,比如用玉米胚为材料进行转化。而有些就可以直接分化,比如油菜利用子叶柄和下胚轴为转化材料,可以直接分化成苗,不需要脱分化再分化。

  • 农杆菌转化法有脱分化再分化吗
    答:接下来确实需要对受体细胞进行组织培养,此过程需要脱分化和再分化 但组织培养过程已经不是农杆菌转化的过程了 !
  • 如图为利用农杆菌培育转基因植物的流程图,请回答:(1)提取目的基因时需要...
    答:图中将目的基因导人受体细胞所用的方法是农杆菌转化法.(3)将含有目的基因的受体细胞培育成转基因植株,还需要采用植物组织培养技术,该技术包括脱分化和再分化两个过程;植物组织培养过程需要在无菌条件下进行.(4)进行植物细胞融合时,需要用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞以去除细胞壁获得原生质体;诱...
  • 农杆菌转化实验步骤
    答:5.最后将成功表达的细胞通过脱分化和再分化形成植株或直接感染的植物体,对植物体进行个体生物学水平鉴定。
  • (2014?贵州模拟)大肠杆菌的质粒可以成功转入植物细胞,并将目的基因整合...
    答:该过程包括脱分化和再分化.脱分化和再分化取决于培养基中细胞分裂素和生长素用量的比例,这说明植物生命活动的调节是多种激素相互作用共同调节的结果.细胞分化的根本原因是基因的选择性表达.(5)检测水稻幼苗是否具有抗虫的特性,将虫子释放在水稻幼苗,观察其生长情况.若能正常生长,说明具有抗虫的特性...
  • 马铃薯是种植广泛的农作物,病毒侵染后导致产量大幅下降,培育脱毒和抗...
    答:(1)马铃薯茎尖病毒极少甚至无病毒,因此可利用马铃薯茎尖进行组织培养形成脱毒苗,该过程包括脱分化和再分化两个重要的步骤.检测病毒的基因,可采用核酸分子杂交的方法,也检测病毒的蛋白质,可采用抗原抗体杂交的方法.(2)由图可知:茎尖越小,脱毒率越高,但成苗率越低.在茎尖外植体大小为0.27mm时...
  • 马铃薯是种植广泛的农作物,病毒侵染后导致产量大幅下降,培育脱毒和抗...
    答:为了便于检出转化成功的农杆菌,需要基因表达载体上含有标记基因.目的基因在马铃薯体内能否成功转录,可采用的检测方法是分子杂交.该转基因马铃薯产生的配子中不一定含有目的基因.故答案为:(1)生长素和细胞分裂素 脱分化 再分化 抗原-抗体杂交(2)脱毒率越高,成苗率越低 0.27(3)...
  • 普通番茄属双子叶茄科植物,其细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因,控制细胞...
    答:(1)番茄属于双子叶植物,在受体细胞为双子叶植物细胞时,一般利用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞,筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常依据质粒上的标记基因表达.(2)分析图解可知,图中②、③过程分别表示植物组织培养过程中的脱分化和再分化,为保证脱分化和再分化的顺利完成,需要向培养基中...
  • 番茄营养丰富,是人们喜爱的一类果蔬.但普通番茄细胞中含有多聚半乳糖...
    答:将目的基因导入受体细胞的方法为农杆菌转化法.(4)从图中可见,mRNA1和mRNA2的结合直接阻碍了多聚半乳糖醛酸酶合成时的翻译过程,最终使番茄获得抗软化的性状.(5)②是脱分化过程、③是再分化过程,决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例,特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在...
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    答:(4)植物组织培养过程为:首先外植体通过脱分化形成愈伤组织,愈伤组织进行再分化形成胚状体,然后在经过组织器官的分化形成完整植株.植物组织培养技术依据的原理是植物细胞的全能性.故答案为:(1)目的基因 限制酶和DNA连接酶 (2)农杆菌转化法 DNA分子杂交 (3)标记基因 启动子 终止子...
  • 土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌,它带有一个...
    答:(5)检测目的基因是否翻译成蛋白质可以利用抗原-抗体杂交法,也可以直接在个体水平对转基因植物与非转基因植物进行比较.故答案为:(1)DNA分子 原核 受体(2)启动子 终止子 标记基因(3)T-DNA 土壤农杆菌(4)脱分化 再分化(5)抗原-抗体杂交 个体 ...