dna是怎么合成的?

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-08-04
DNA在体内通过半保留复制的方式不断合成新的DNA链。在体外人工基因合成无需模板,不受基因来源限制也可以进行DNA合成。人工基因合成的方法是基于亚磷酰胺的DNA合成法,也是今天Oligo自动化生产所采用的主要方法。该方法包括(1)去保护。酸催化去除DMT(二甲氧基三苯基甲基)基团,以便下一轮碱基(dA、dC、dG和dT)添加。(2)碱基偶联。将含有DMT保护基团护的亚磷酰胺通过四唑活化剂加到未保护的5′ OH末端。(3)加帽。将游离的5′ OH乙酰化,以防止进一步的链延伸所造成的单碱基缺失。(4)氧化。通过碘液将磷酸三酯氧化为磷酸盐,进入一个反应循环。由于随着链延长所带来的化学反应效率、合成纯度以及产率的下降,目前该方法合成的Oligo长度一般不超过200个核苷酸(nt)。随后,通过人工进行PCR片段扩增和组装合成基因。

1.
底物:dATP、dTTP、dCTP、dGTP
2.
模板:解开成单链的DNA母链
3.
引物:用于提供3'端的羟基,供DNA聚合酶识别,使dNTP可以继续结合,在DNA的生物合成中一般引物为RNA。
4.
酶:拓扑异构酶(用于解开DNA超螺旋),DNA解旋酶(也称dnaB蛋白,解开DNA双螺旋用于复制),引物酶(用于合成一小段RNA作为DNA合成的起始引物),DNA聚合酶III(用于DNA链的延伸),DNA聚合酶I(用于切除冈崎片段中的RNA引物,并以前一片段的3'端羟基继续合成DNA),DNA链接酶(用于链接DNA之间的磷酸二酯键)。
5.
蛋白因子:dnaA蛋白(用于识别复制起点9bp重复序列,DNA在其周围缠绕,并促使DNA双链在13bp重复序列区解开),单链结合蛋白(SSB,与单链DNA结合形成复制叉),复制因子X(n蛋白),复制因子Y(n'蛋白),n"蛋白,i蛋白,蛋白和dnaC(这五种蛋白与dnaB蛋白和引物酶组装成引发体)。
由于DNA的半不连续复制,使得在每次的复制过程中都会因为在切除末端的RNA引物后,由于缺少3'端羟基会缺失一小段DNA,为保证DNA的完整性,生物体内的一种逆转录酶端粒酶会以其中的RNA为模板,逆转录出重复的DNA序列用于维持DNA的稳定。

  • DNA是怎样合成的?
    答:DNA的合成是一个复杂的过程,可以自然发生在生物体内的DNA复制,也可以在实验室内通过化学方法人工合成。下面分别介绍这两种情况:生物体内DNA的自然合成 - DNA复制 引发:DNA复制开始于特定的复制起点,这里启动蛋白识别并结合富含AT的序列,随后招募其他蛋白质形成前复制复合物,其中包括DNA解旋酶帮助解开DNA...
  • dna是怎么合成的?
    答:人工基因合成的方法是基于亚磷酰胺的DNA合成法,也是今天Oligo自动化生产所采用的主要方法。该方法包括(1)去保护。酸催化去除DMT(二甲氧基三苯基甲基)基团,以便下一轮碱基(dA、dC、dG和dT)添加。(2)碱基偶联。将含有DMT保护基团护的亚磷酰胺通过四唑活化剂加到未保护的5′ OH末端。(...
  • DNA复制的过程是什么?
    答:1、起始阶段:解旋酶在局部展开双螺旋结构的DNA分子为单链,引物酶辨认起始位点,以解开的一段DNA为模板,按照5'到3'方向合成RNA短链。形成RNA引物。2、DNA片段的生成:在引物提供了3'-OH末端的基础上,DNA聚合酶催化DNA的两条链同时进行复制过程,由于复制过程只能由5'->3'方向合成,因此一条链能够...
  • dna合成的原料到底是什么?
    答:一分子磷酸,一分子脱氧核糖(五碳糖),一分子碱基合成一分子脱氧核糖核苷酸,然后很多个脱氧核糖核苷酸合成DNA。1、物理性质:DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这一特性,可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时,吸光度...
  • dna的复制都是5’到3‘的,那么为什么dna的合成要先连接3‘端的核苷酸...
    答:在 DNA 的合成过程中,确实是从 5' 端到 3' 端进行合成的,这是由于 DNA 分子的结构特点所决定的。DNA 分子是由两条互补的链组成的,每条链都是由一系列的核苷酸单元组成的。每个核苷酸单元由一个磷酸基、一个五碳糖(脱氧核糖)和一个氮碱基组成。在 DNA 合成的过程中,新的核苷酸单元需要与...
  • DNA是由什么合成的?
    答:DNA是由核酸的单体聚合而成的聚合体。 b. 每一种核酸由三个部分所组成:含氮盐基+五碳糖+磷酸根。 c. 核酸的含氮盐基又可分为四类:鸟粪嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C) d. DNA的四种含氮盐基组成具有物种特异性。即四种含氮盐基的比例在同物种不同个体间是一致的,但...
  • dna的复制原料和过程分别是什么?
    答:1、DNA复制是指DNA双链在细胞分裂以前的分裂间期S期进行的复制过程,复制的结果是一条双链变成两条一样的双链,每条双链都与原来的双链一样。这个过程通过边解旋边复制和半保留复制机制得以顺利完成。2、转录 (1)概念:在细胞核中,以DNA的一条链为模板,按照碱基互补配对原则,合成RNA的过程。(2)...
  • DNA合成是什么?
    答:DNA病毒的遗传物质也是DNA,极少数为RNA. a. DNA是由脱氧核苷酸的单体聚合而成的聚合体。 b. DNA的单体称为脱氧核苷酸,每一种脱氧核苷酸由三个部分所组成:一分子含氮碱基+一分子五碳糖(脱氧核糖)+一分子磷酸根,DNA都是由C、H、O、N、P五种元素组成的。 c. DNA的含氮碱基又可分为四...
  • dna聚合酶合成dna的原料是什么?
    答:DNA聚合酶合成DNA的原料不是核苷酸,而是三磷酸核苷。DNA复制过程中 , DNA双链解螺旋后 ,每一条链上所暴露出来的碱基各自与一个游离于核中的三磷酸脱氧核糖核苷酸 ( dTTP、dGTP、 dATP、dGTP)按碱基配对原则配对。之所以参与反应的是三磷酸脱氧核苷酸 ( dNTP),是因为 DNA的聚合反应需要能量 ,在 DNA...
  • 基因分离的化学合成是怎样做的?
    答:化学方法合成DNA片段是一种十分成熟和简便的技术,利用DNA合成仪,根据待合成的DNA片段预定的核苷酸序列,可自动地将4种核苷酸单体按3′→5′磷酸酯键连接成寡核苷酸片段。目前常用此方法合成引物、寡核苷酸接头(linker)以及基因片段等。根据某基因测定的核苷酸序列,或者根据蛋白质氨基酸序列推导的核苷酸序列...