在组培中为什么外植体接种于培养基中几天后，外植体就由绿变成淡黄色呢？
★植物组织培养（PlantTissueCulture）：是指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。（主要有原生质体（Protoplast），悬浮细胞，组织（愈伤组织Callus、茎尖分生组织），器官（胚，花药，子房，根和茎）的培养。其中最常见的是愈伤组织培养。）
★愈伤组织（Callus）：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
★植物细胞全能性（Cellulartotipotency）：任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植珠所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。（Haberlandt,1902）
★微（快）繁步骤（micropropagation）：
母株（完整）→外植体（母株的一小部分，种子亦可）→接种到培养基上→长芽（继代增殖）→长根（试管外生根亦可）→练苗，驯化→完整植株
★组培发展简史：细胞学说：Schleiden和Schwann。1.探索：20世纪初，Haberlandt提出“细胞全能性”（1902）；1904年，Hanning培养萝卜和辣根菜的胚成功；Laibach（1925,1929）亚麻种间杂种胚培养成功，证明胚培养在植物远缘杂交上可利用；1922年，Robiins（美）和Kotte（德）离体根尖培养成功。2.奠基：Gautheret，White和Nobecourt，组培奠基人。White和Gautheret发现了B族维生素和生长素；Skoog（1944）和Skoog和崔（1951）等发现腺嘌呤和生长素的比例控制芽和根的形成，Overbeek等（1941）首次将椰子汁（CM）作为添加剂，Steward等在胡萝卜组培也使用CM；1952年，Morel和Martin首次证实通过茎尖离体培养可获无病毒植株；1953-1954年，Muir单倍体培养获得成功；1955年，Miller分离出激动素（KT）；1957年，Skoog和Miller提出植物激素控制器官形成的概念；1958年，Steward首次证实Haberlandt的细胞全能性设想；Wickson和Thimann指出CTK打破腋芽休眠；Murashige发展快繁技术；1958-1959年，Reinert和Steward胡萝卜愈伤组培中形成体细胞胚。3.迅速发展：1971年，Takebe首次由烟草原生质体获得再生植株；1972年，Carlson获得烟草的第一个体细胞杂种；1964年，Guha和Maheshwari由毛曼佗罗离体花药培养胚；1960年，Morel提出离体无性繁殖兰花。……（具体seesee书本或课件）
★组培意义：1、基础理论研究（试验体系的准确性和可重复性，广泛用于细胞、组织的代谢生理及其它生化等方面的研究（如分化问题））。2、应用研究（无性繁殖系快速繁殖的生产、试管苗的商品化，遗传育种，种质保存，克服远缘杂交，种质资源创新，获得转基因植株）。
★组培应用前景：1、作物育种上的应用（1、花药和花粉培养2、胚胎培养3、细胞融合4、基因工程5、培养细胞突变体6、种质保存）2、作物脱毒和快繁上的应用（马铃薯，兰花）3、在植物有用产物生产上的应用4、在遗传、生理、生化和病理研究上的应用。
★植物激素调控：auxin/CTK>1(促进生根)；=1(愈伤组织)；<1(促进发芽)
★脱分化（dedifferentiation）：在组织培养中，不分裂的静止细胞，放在一定的培养基上后，细胞重新进入分裂状态。一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。
★再分化（redifferentiation）：一个成熟的植物细胞经历了脱分化后，能再分化而形成完整植株的过程。
★再分化途径：1、器官发生方式（是指在外植体或愈伤组织的不同部位分别独立形成茎、芽和根，它们为单极性结构，各有维管束与外植体或愈伤组织相连，但在不定芽和不定根之间没有共同的维管束将两者连在一起。）2、胚胎发生方式（外植体直接或通过愈伤组织或悬浮培养产生胚状体。）
★胚状体（embryoid）：是指在组织培养中起源于一个非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成的具有双极性的胚状结构。其特点有：1、不同于合子胚，因为它不是两性细胞融合产生。2、不同于孤雌/雄胚，因为它不是无融合生殖的产物。3、不同于器官发生方式形成的茎芽和根，因为它经历了与合子胚相似的发育过程且成熟的胚状体是双极性结构。
★器官发生途径：1、茎尖或茎段培养产生腋芽。2、直接不定芽发生：器官的小块组织在培养基上培养直接诱导产生不定芽。3、间接不定芽发生：器官的小块组织在培养基上培养后先去分化形成愈伤组织，再经分化诱导产生不定芽或不定根。
★胚胎发生方式：1、直接胚胎发生（从培养物中的器官组织，细胞或原生质体直接分化成胚，中间不经过愈伤组织）2、间接胚胎发生（外植体先愈伤化，然后由愈伤组织细胞分化成熟）
球型胚（globalembryo）→心型胚（heart-stageembryo）→鱼雷型胚（torpedo-stageembryo）→子叶型胚（cytoledon-stageembryo）
★人工种子：是指利用细胞的全能性将离体培养所产生的体细胞或具有发育成完整植株能力的分生组织（胚状体，茎和茎段）包裹在一层含有营养物质并具有保护功能的外膜内形成在适宜条件下能够发育成完整植株的小颗粒。
结构包括人工种皮，胚状体（分生组织），人工胚乳。
★植物组织培养应用步骤：1、获得无菌外植体，建立起无菌培养体系。2、进行增殖，不断产生不定芽或胚状体。3、生根培养。4、试管苗移栽。
★外植体选择的原则：1、必须含有活细胞。2、幼嫩组织所含活跃分裂的细胞比例高。3、母珠必须健康并且无任何腐烂或生病的迹象。4、母珠必须活跃生长并且不会立即进入休眠。
★外植体的确定选择：1、茎尖（园艺植物组织培养中应用最多，繁殖率高，不易发生遗传变异，但取材有限）；2、茎段（采用嫩茎的切段促进腋芽萌发，取材容易）；3、叶（幼嫩叶片组织通过愈伤组织或不定芽分化产生植株，取材容易，操作方便，但易发生变异）；4、花球和花蕾；5、种子、根、块根、块茎、花瓣等。
★消毒的原则：消毒剂与外植体应接触足够长的时间以除去外植体表面的微生物，但应尽量减少对外植体细胞的破坏。
★消毒方法：冲洗植物材料除去泥土等大的颗粒→浸入70-75％乙醇，有利于植物表面的浸湿→用5-20％NaClO溶液（加1滴表面活性剂）表面消毒5-10min→用无菌水冲洗至少3遍→与消毒剂接触过的切面在转移到无菌培养基前应切去，因为消毒剂会杀死外露的细胞从而影响营养吸收→切取外植体，通常为10mm的茎段和直径10mm的叶片部分（太大激素作用减弱，太小则不易成活）。
★消毒注意事项：1、表面消毒剂对植物组织是有害的，应正确选择消毒剂的浓度和处理时间，以减少组织的死亡。2、在表面消毒后，必须用无菌水漂洗材料3次以上以除去残留杀菌剂，但若用酒精消毒，则不必漂洗。3、与消毒剂接触过的切面在转移到无菌基质前需将其切除，因为消毒剂会阻碍植物细胞对基质中营养物质的吸收。4、若外植体污染严重则应先用流水漂洗1小时以上或先种子培养得到无菌种苗，然后用其各个部分建立组织培养。5、HgCl2效果最好，但对人的危害最大，用后要用水冲洗至少5次。
★茎尖培养：切取茎的先端部分或茎的分生组织部分进行无菌培养。
步骤：无菌培养的建立→芽的诱导→生根培养→试管苗的移栽（遗传变异）
注意点：试管苗移栽过程中，由异养→自养，恒温→温差，无菌→有菌，光弱→光强，湿度高→湿度低，应该保持苗的水分平衡（加塑料薄膜和使用喷雾机），选择适当的基质，注意光、温的条件。
★安祖花：叶片→诱导愈伤组织→诱导芽→诱导根生根
↓↑
增殖→切根→芽的增殖→再培养→壮苗→生根之前
不定胚的诱导：组织片→含有2,4-D的培养基上→产生不定胚→去除2,4-D的培养基上→球型胚→心型胚→鱼雷型胚→植物体。
不定芽的诱导：用BA诱导，在球、心、鱼雷时要去除BA。
★胚胎培养的意义：1、对于胚乳发育不良或胚与胚乳间不亲和的材料进行离体胚培养，有助于远缘杂交获得成功。2、为研究胚在各个发育时期的营养需要提供了一个很好的机会。3、能对整个胚及其各部分的再生潜力进行研究。
★胚培养中的两个重要问题：1、胚剥离的方法：剥离的最佳时间是授粉后13-15天。2、培养基的成分：找到合适的培养基，在胚培养中加入蔗糖（能源、保持适当渗透压）。
★花药培养方法：
取材地点：大田和温室
取材：大多采用单核期的花粉培养，因诱导产生愈伤组织或胚状体的频率较高。
花粉时期的确定：常采用醋酸洋红-碘化钾染色，再压片镜检。实际操作中常根据花蕾长度、大小与花粉年龄的相关性确定。
预处理：低温、高温或交叉处理
培养基：有MS，Nitsch，Miller，B5和N6。低浓度的生长素和细胞分裂素相结合，高浓度的蔗糖对花粉的诱导生长有一定作用。培养基中加入活性炭对提高诱导频率也有一定效果。
消毒、接种和培养：花药→在烧杯中研碎（有溶剂）→过滤→浓度梯度离心→收集中间层→离心
单倍体的鉴定和加倍处理：单倍体用2％秋水仙素处理24小时，愈伤组织细胞自然加倍。
★花粉花药培养的意义：1、在单倍体细胞中只有一个染色体组，表现型和基因型一致，一旦发生突变，无论是显性还是隐性，在当代就可表现出来，因此单倍体是体细胞遗传研究和突变育种的理想材料。2、在品种间杂交育种过程中，通过F1代花药培养得到单倍体后，经染色体加倍立即成为纯合二倍体，从杂交到获得不分离的杂种后代单株只需要2个世代和常规育种相比，显著缩短了育种年限。
★花药培养步骤（用改良的NLN培养基）：
F1代花药→形成小孢子→分离小孢子→形成愈伤组织→形成胚→单倍体植株→纯合二倍体
↓
形成胚→单倍体植株→染色体加倍形成纯合二倍体
★原生质分离：酶（纤维素酶，离析酶）
步骤：叶片表面消毒→去除表皮→叶碎片漂浮在含有酶和渗透压稳定剂的溶液中→培育→原生质体沉到培养皿底部→除去酶溶液→将原生质体移入CPW清洗→离心→清洗基质两次→重悬浮于培养基→除去小的个体，用血球计计数→调整到合适的密度重悬浮于培养基。
★原生质体的培养：
培养基：MS＋NAA2.0ppm＋BA0.5ppm＋3％蔗糖＋9％甘露醇
注意：1、原生质体分离后，非常脆弱，需要渗透压保护剂的保护直到细胞壁形成。
2、针对不同的研究对象，培养基中生长素和细胞分裂素的水平要做适当调整。
影响原生质体培养的因素：营养需求（NH4＋不能过多），渗压剂，培养密度（105/mL），
贮藏条件（通常在黑暗处）。
培养方法：液体基质培养法，半液体基质培养法，固体基质培养法，看护培养。
固体培养的步骤：原生质体移入培养基→1体积含原生质体的培养基与1体积含琼脂糖（40℃）的培养基混和→倒转培养皿在25℃下培养→原生质体重新产生细胞壁并分裂成细
胞团→细胞团于琼脂糖基质中传代培养，培养基中应减少渗压剂以利于愈伤组织的形成→诱导分化成植物的根，茎。
★原生质体分离培养的意义：1、除去了细胞壁为植物细胞之间的融合扫平了障碍，同时叶为制造新杂种开辟了道路。2、原生质体可摄入外源DNA，细胞器、细菌或病毒颗粒，这些特性与植物全能性相结合为高等植物的遗传饰变打下基础。3、获得细胞无性系和选育突变体的优良起始材料。
★原生质的融合概念：从同一个种或不同种分离得到的原生质体在适当的条件下融合得到细胞核物质和细胞质物质的混和。
★体细胞杂交：完全不经过有性过程，只通过体细胞融合制造杂种的方法称为体细胞杂交。
★原生质体融合方法：自发融合，诱发融合（NaNO3处理，高PH-高浓度钙离子处理，PEG处理，电融合）
PEG法：
取材（1、从绿色叶片上分离得到的原生质体。2、来源于同种或不同种的细胞悬浮培养物上分离出的无色原生质体）－这样异核体和母体就可分辨开。
→分别取在含有13％甘露醇的CPW上悬浮培养的原生质体（密度2×105）4mL，混和在100g的转速下离心10min，将原生质体放入0.5％基质→加入30％（w/v）PEG2mL，使原生质体的外膜不稳定，放置10min→每隔5min加入原生质体培养基稀释PEG以促进原生质体融合。每次稀释后轻微摇动原生质体就会重悬浮→混和物在100g下离心10min，离心后在不含PEG的培养基中清洗→离心，在相同的培养基上重悬浮。
PEG法的缺点：有毒，融合率低：不超过1％
对称融合：父母均未处理，对后代贡献一样。
不对称融合：父母本在后代中贡献不同，射线处理，化学处理
IOA（不影响核的分裂而影响细胞质分裂）
★胞质杂种：利用原生质体融合技术，使两种不同来源的核外遗传成分（细胞器）与一个特定的核基因组结合在一起，就形成胞质杂种。
体细胞杂种和胞质杂种的鉴定方法：形态学，细胞学，分子遗传学。
★园艺植物脱毒：
热处理脱毒：
原理：在高于正常温度下，植物组织中的很多病毒可被部分或完全钝化，而很
少伤害甚至不伤害寄主组织。
方法：热水处理（对休眠芽效果好），热空气处理（对活跃生长的茎尖效果好）
热空气处理方法：空气温度35-40℃，持续时间：随处理对象不同而变化，几分钟-几星期。
注意点：不能一下子放入高温中，要逐步加温使之适应。并保持湿度和光照。
局限性：1、并不是所有的病毒都对热处理敏感
2、对等径和线状的病毒及类菌质体引起的病害是有效的。
3、热处理后只有一小部分植株能够存活
★茎尖分生组织：指茎的最幼龄叶原基上方的一部分，最大直径约100μm，最大长度为
250μm。
★茎尖：由顶端分生组织及其下方的1-3个叶原基一起构成的。
★茎尖培养脱毒：
原理：病毒在植物体内的分布是不均匀的，在受感染的植物中顶端分生组织通常不含或仅含低浓度的病毒，其它的植物组织离茎尖的距离越远则病毒含量越高。
影响茎尖培养脱毒效果的因素：培养基，外植体大小（脱毒效果跟外植体大小呈负相关，茎尖的成活率与茎尖大小呈正相关），贮存条件（光照培养优于暗培养），外植体的生理状态（活跃生长的芽，顶芽的效果比腋芽好，切割芽的时间）
★通过愈伤组织培养脱毒：
原理：在由受感染的组织形成的愈伤组织中，并非所有的细胞都均匀一致地带有该种病原体。
产生原因：1、病毒的复制速度跟不上细胞的增殖速度
2、有些细胞通过突变获得了抗病毒的特征。
★脱毒植物的鉴定：外观判断法，指示植物法（接种鉴定法），抗血清鉴定法，电镜检查法，
分光光度法，酶联血清免疫吸附反应鉴定法。
指示植物法：利用病毒在其它植物上产生的枯斑作为鉴别病毒的标准。
指示植物：专门选用以产生局部病斑的寄主称为指示植物。
★无毒原种的保存：种在温室或防虫罩内灭过菌的土壤中，隔离区内，通过组织培养繁殖。
组培常见英汉对照
abortion（败育）adenine（腺嘌呤）agar（琼脂）anther（花粉）apical（顶端的）aseptic(无菌的)auxin（生长素）axillarybud（腋芽）callus，calli（愈伤组织）cellulartotipotency（细胞全能性）cellulase（纤维素酶）cellulose（纤维素）centrifuge（离心）chloroplast（叶绿体）chromosomedoubling（染色体加倍）colony（细胞团，菌落）cybrid（cytoplasmichybrid,胞质杂种）cytokinin（细胞分裂素）cytoplasm（细胞质）degeneration（败育）dedifferentiation（脱分化）redifferentiation（再分化）dicotyledonous（双子叶的）dihaploid（二单倍体）diploid（二倍体）dissect（剥离）dormancy（休眠）eliminate（除去）embryo（胚胎）embryoid（胚状体）embryogenesis（胚胎发生方式）epidermis（表皮，上表皮）excise（切除）explant（外植体）filterpaper（滤纸）gelose（琼脂糖）genetype（基因型）germplasm（种质）globalembryo（球型胚）haploid（单倍体）heterokaryon（异核体）homozygous（纯合的）hormone（激素）interspecific（种间的）intraspecific（种内的）invitro（体外）invivo（活体）kinetin（激动素）macerozyme（离析酶）malesterile（雄性不育）medium（培养基）membrane（膜）meristem（分生组织）meristemculture（茎尖培养）micropropagation（微繁）microspore（小孢子）monocotyledon/moncots（单子叶植物）nodculture（茎段培养）organelle（细胞器）organgenesis（器官发生方式）osmotic（渗透的）pith（髓）plantlet（小植株，苗）pollenculture（花粉培养）pollinate（授粉）protocorm（PLB）原球茎protoplastfusion（原生质体融合）rapidpropagation（快繁）regeneration（再生）self-incompatibility（自交不亲和）shoottip（茎尖）sodiumhypochlorite（NaClO）somaticembryo（体细胞胚）somatichybridization（体细胞杂交）somatichybrid（体细胞杂种）stem（茎）stemtipculture（茎尖培养）sterilant（消毒剂）steriledistilledwater（蒸馏水）sterilization（消毒）stockplant（母株）subculture(继代)sucrose（蔗糖）terminalbud（顶芽）transfer（转移）viruseradication（脱毒）
常用缩略语
ABA（脱落酸）CM（椰子汁）CPW（细胞-原生质体清洗液）
DMSO（二甲基亚砜）IAA（吲哚乙酸）IBA（吲哚丁酸）
KT（激动素）NAA（萘乙酸）PEG（聚乙二醇）
LH（液氮）CH（水解酪蛋白）GA3（赤霉素）
玫瑰组织培养的方法
2.1外植体选取从生长在田间或盆栽的优良品种植株上，选取生长健壮、无病虫害的当年生枝条的茎尖和幼茎。取材最好在晴天正午，并且取用植株上部的幼茎。阴雨天或靠近地面的幼茎，表面污染较为严重，难于消毒。玫瑰除用茎尖和幼茎做外植体外，也可以用叶片、叶柄、根、茎、原生质体、胚、花药、子房、花萼和花托做外植体[7]。
2.2消毒灭菌及无菌苗的建立取玫瑰外植体，用5%～10%的次氯酸钠浸泡10～30min或用01%～02%的HgCl浸泡5～15min。用无菌水清洗7～10次后接种。也可先用75%的酒精浸泡20～30s再采用上述方法消毒。消毒灭菌完毕后，将幼茎切割成05～10cm长的至少带有一个节的切段，接种于培养基中[6]。
2.3愈伤组织的诱导Hill(1967)最早报道从杂交茶香月季(hybridtearose)的茎上诱导了愈伤组织，该实验证明在培养基中添加2，4-D或添加NAA和激动素KT均能很快诱导出愈伤组织。随后不同实验以不同品种为试验材料，从叶、叶柄、根、茎、原生质体、合子胚、花药、子房、花瓣、花萼、和花托成功地诱导了愈伤组织。[7]
2.3.1愈伤组织的成功诱导与品种的基因型有关?摇Lloyd等(1988)曾研究Roseprsica与xanthina，hybrida，Clarissa，Rcabrosa的愈伤发生能力，发现只有Rosepersica与xanthina在MS基本培养基上，添加低浓度的BAP和NAA时，节间能产生愈伤，愈伤组织脆弱，呈淡黄绿色。Kunitake等(1993)研究了RoserugosaThunb，Rosemultiflora，Roseallbacv，SemiplenaRosehybridacv，DuplesRoseharisonii，Rosespinosissi的未成熟种子的愈伤发生能力，发现只有RoserugosaThurb能产生愈伤组织，品种Rontl和Soraya比品种Baccara和Mercedes更易产生愈伤(Kintzios等，1999)。[7]
2.3.2外植体类型?摇Aren等(1993)详细地调查了RosehybridacvMeirutral不同外植体的愈伤诱导率，发现不同外植体愈伤产生的能力不同，叶为90%，根为70%，节间为55%，花药为19%。
2.3.3激素激素也是影响愈伤生成的重要因素，Rout等(1991)以Landora为材料，在添加BA和NAA，2，4-D的MS的培养基上，外植体在接种的7～12d后，在近轴面的叶柄和中脉处产生愈伤，愈伤组织诱导频率高达92%。在接种后15～20d，外植体茎切端处产生愈伤，诱导率为76%。生长素种类和浓度对愈伤产生能力的影响同样很大。早期实验多采用NAA结合BAP或BA等，近年来多采用2，4—D，并证明2，4—D是诱导愈伤的必要因素(Kintzios等，1999;Rout等，1996;vanderSalm等，1996;Vises—suwan等，1997)。进一步研究发现2，4-D对愈伤的诱导效果依赖于月季的基因型，如2，4—D浓度从113umol/L增加到181umol/L降低了Rosehybrida栽培种“Care-freeBeauty”的愈伤诱导频率，但该浓度则对另一个品种“GrandGala”无影响。对于“RedSunblaze”而言，当浓度从113umol/L增加到452umol/L，则表现出愈伤的诱导率提高了，随后当2，4—D再增加，则显著地降低愈伤的诱导频率。愈伤组织在诱导愈伤组织的培养基上能得到很好继代培养(subculture、Li等，2002)。VanderSalm等(1996)证明2，4—D对诱导Rosepersica与xanthina和Moneyway产生愈伤是非常必要的，进一步添加低浓度的BA有正效应，但如BA浓度过高，则产生抑制作用。与以上实验结果不同，Kintzios等(1999)则发现2，4—D对愈伤诱导有负影响作用，可能因为采用的外植体是成熟的叶片。
2.3.4合子胚的发育时期对愈伤的形成能力也有影响?摇如处于心形胚的合子胚，其愈伤诱导率只有2%，子叶胚时的合子胚愈伤诱导率达到85%。[7]
2.4不定芽的诱导月季的常规繁殖方式主要靠扦插、嫁接和压条等，繁殖系数低，远远满足不了生产的需要。80年代初，采取组织培养方法快速繁殖月季苗，用侧芽、顶芽、并诱导生根。第一报道月季不定芽形成见Elliott(1970)，他在聚花月季(Rosemultiflora)上成功地诱导了不定芽的形成，并诱导幼苗生根。Zieslin和Halevy(1976)报道细胞分裂素有利于提高不定芽的数量，但也诱导花器官败育或退化的频率。不定芽的诱导与供试材料的基因型有关，同时还与外植体的取材部位有关，来源于枝条中部的侧芽的繁殖速率最快(Bressan等，1982)。培养基中添加蔗糖有增加丛芽数量的作用(Langford和wainwright，1987);加入低浓度的GA能进一步改善芽繁殖，95%的外植体能产生7个以上的不定芽(Rout等1990)。能提高芽繁殖数量的物质还有月桂酸甲酯(Voyiatzi等，1995)、乙烯(Kevers等，1992)等。诱导不定芽的培养基为MS培养基添加低浓度的激素BAP03～05mg/L，NAA0004～03mg/L或IAA或GA00～20mg/L。[7]Martin等(1981)调查了2125个玫瑰侧芽做外植体获得的无菌苗三年间在大田生长的情况，没有发现变异植株，这说明侧芽方式繁殖的玫瑰植株性状很稳定。
2.5增殖培养玫瑰的增殖培养，一靠无菌苗切段繁殖，二靠诱导不定芽，形成从生苗;三靠愈伤组织形成体细胞胚或原球胚。将已长大的月季嫩茎切成带1～2个节的茎段，投入新鲜的增殖培养基上，5～6周进行一次继代增殖，增殖系数平均达4～6。在外植到培养10～15d内第一叶的叶原基伸长，第二叶片叶原基可见;15～20d侧芽伸长;25～30d长度达6～10mm，继代增殖会按几何级数增长起来。[5]增殖培养基可用不定芽诱导培养基，如MS+BA03～05+NAA0004～03mg/L。
2.6壮苗与生根壮苗培养的培养基为：MS+BA03～05+NAA001～01或MS+BA03～05+IBA03。[4]也可以壮苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合二为一。玫瑰组培苗增殖与壮苗需光照10～12h，光照强度2000lx，温度24～26℃。[4]
玫瑰在组培过程中，其生根能力因品种特性、所用植物材料及培养基成分而有较大差异，许多研究结果表明，玫瑰茎段微繁殖容易生根，使用植物激素IAA，IBA或NAA含量01～05mg/L，蔗糖含量2%～25%的MS培养基有利于玫瑰茎段生根。另外，光照、温度等对玫瑰微繁殖生根也有直接影响，Bressan等(1982)研究指出，光照时间每天12h以上，光照强度适宜则有利于生根。一般情况下，玫瑰茎段组织培养8～10d内则可生根。[6]加入适量的活性炭有利于玫瑰生根。
2.7炼苗与大田移栽炼苗和大田移植是玫瑰微繁殖获得成功的最后阶段。[6]组培幼苗由人为培养环境转移到天然生长环境中，环境条件发生巨大变化，湿度大幅度降低，温度不恒定，光照强烈，微生物多，故需炼苗过渡。一般玫瑰微繁殖炼苗需经过室内三天的取盖炼苗，然后将苗从瓶中取出，洗去根部培养基，定植在珍珠岩、泥炭、蛭石或沙土中，用3～5%的多菌灵喷洗。炼苗时要注意基质中的水分含量，水分太少，不能满足苗生长发育;水分太多，导致烂苗。炼苗中、后期要注意通气，给予足够的光照，其幼苗成活率可达80%以上。
目前文心兰、蝴蝶兰、铁皮石斛、金线莲等组培技术较成熟，有兴趣去百度文库或中国知网等下载这方面材料看看，祝好运！
第一 你组培的是什么植物！第二 黄化时植物材料是否是存活状态！ 第三外植体接入后的光照情况如何！
答：你是学生还是打算学组培搞生产。学生的话多跟做过的同学及老师交流，组培过程会遇到很多问题，污染、褐化及玻璃化等，如果是为了毕业建议你买些草本植物，如鸡冠花种子，很容易组培又能开花。如果为了生产收入，建议你在老师推荐下去组培厂里实习，这样更实用 目前文心兰、蝴蝶兰、铁皮石斛、金线莲等组培技术...
答：3. 在选择外植体时，通常优先考虑带芽的外植体，因为它们更易于培养成功，并且可以较快地产生新的植株。4. 外植体的大小也是需要考虑的因素。例如，茎尖的大小通常在0.1至0.5毫米之间，而叶片和花瓣的大小则在0.5至1平方厘米左右，茎段的大小则在0.5至1厘米之间。适当大小的外植体有利于培养过程的成...
答：2、植物组培又称为植物克隆，是指通过无菌操作将植物体的各类结构材料——外植体（根尖、茎段、茎尖、幼叶、幼胚、花药等）接种于人工配制的培养基上，在人工控制的环境条件下进行离体培养的技术与方法。由于植物细胞中包含该物种的全部遗传信息，具备发育成完整植株的潜能，即植物细胞具有全能性。因此，通...
答：外植体指的是在植物组织培养中，作为离体培养材料的器官或者组织的片段，也指在继代培养的时候，移入新培养基的组织切段，这种切段是经过培养的。在离体培养繁殖种苗时，培养材料一般选取生长健壮的无病虫的植株上正常的器官或组织，可以提高成功的几率，增加其实用价值。外植体取材的不同状态具体表现为外植...
答：愈伤组织培养就是将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，使细胞脱分化形成 愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。（二）器官和组织培养 器官和组织培养是通过培养器官和组织的类别来分类的。如果培养的是花药，称为花药培养；如果 是胚珠，称为胚珠培养；如果培养的外植体是叶，称为叶...
答：外植体一般采用茎尖、嫩叶等分生能力比较强的组织。取下来后经消毒处理，接种到培养基中，诱导愈伤组织，并分化成小苗。植物培养基多用MS培养基加上不同浓度的激素。具体品种激素种类和浓度不一样的。组培苗长大并生根后，通过炼苗处理就可以移栽到土里面了。
答：接种时，要在无菌条件下将外植体接种到培养基上，每瓶4-10个，接种后封口。培养基温度通常保持在25℃，但需根据不同花卉种类和材料部位进行调整。增殖阶段是关键，通过继代培养可提高繁殖率，1个月后可能进行再次增殖。不定芽和侧芽需转至生根培养基进行生根，约1个月后可获得健壮的根系。最后，试管苗...
答：经过一段时间的生长、分化最后长成一个完整的植株．利用这种技术，只需要少量植物材料，就可以在短期内诱导出大量“试管苗”．所以成本不高．这种方法繁殖速度快，受季节影响小，而且诱导变异也比较容易．所以繁殖周期不长．在植物组织培养过程中，接种到培养基上的植物材料统称为外植体；故答案为：√ ...
答：接种后,瓶、管用无菌药棉或盖封口,培养皿用无菌胶带封口。 (三)温度培养基大多应保持在25℃左右,但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。增殖外植体的增殖是组培的关键阶段,在新梢等形成后为了扩大繁殖系数,需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中,增殖培养基一般在分化培养基上加以改良,以利于增殖率...
