培养的H441细胞到传代的时候发现细胞染菌严重,怎么破啊,求大神,感觉操作上没有什么问题

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-07-17
在细胞传代培养过程中,如何估计是否传代和传代的方式?

4倍看密度,10倍看状态,细胞长到覆盖80-90%即可传代,不要长的过密才传,那时细胞状态已经不太好了。
细胞传代的方式,如果你在培养瓶里养的话,加入约1ml胰蛋白酶放于培养箱中消化1-2min(不同细胞消化时间及程度不同,此为多数细胞消化时间),取出后看到瓶底细胞开始脱落而未完全脱落(可在显微镜下观察,也可用手轻轻拍打瓶壁),立即加入约5ml含有FBS的培养基终止消化,并轻轻吹打瓶底至细胞全脱落,后移入离心管进行离心,弃除上清,加入新的含FBS的培养基,轻轻吹打均匀,分装至几个新的培养瓶中继续培养。
纯手打的,望选为满意答案哦,谢谢


如果不是操作问题,可以从两方面找原因
第一,你用培养基,血清,还有pbs是不是有问题,可以取少量培养基,血清,pbs在细胞培养箱中培养过夜,24h,48h,分别观察是否染菌
第二,就是细胞培养室大环境染菌,在这种情况下,实验室其他人培养细胞是否普遍染菌,还可以将培养基放入细胞培养箱中,观察染菌状况,如果是大环境污染较重,可以采取熏蒸等灭菌。

细胞污染有三种原因,第一你的操作。第二,环境,就是你的培养室,或培养箱。第三是你的细胞冻存的时候是否被污染。这是最头疼的。如果别人的养的比较好,你最好借一盘养一养。试试。

除了操作上不规范外,只能用排除法,比如看看同一实验室其他人的细胞是否染菌,将自己使用的培养液,培养瓶,PBS之类的,让同实验室其他人做一瓶对照,看看是哪个试剂的问题

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