细菌的分子生物学鉴定要怎么做？
是的，要做PCR。
首先你要提出细菌的DNA。
方法如下：
1、液体培养及保种：从斜面上挑取菌苔于液体培养基中放摇床上震荡（转速160r/min）培养16小时。吸取菌液于1.5ml的经过灭菌的EP管中，再加甘油（30-40%）进行保种。（-80摄氏度保藏2年）
2、提取DNA（CTAB法）：
（1）取1.5ml菌液于1. 5ml离心管中，12000r/min离心2min，弃上清。
（2）向沉淀物中加入350ul双蒸水，重新悬浮沉淀。
（3）加入20ul10%SDS和3ul的蛋白酶K（20mg/ml），溶菌酶3ul，混匀，于50℃温育1h。
（4）加入50ul 5mol/L NaCl溶液，充分混匀，再加入50ul CTAB/NaCl溶液，混合后再65℃温育30min。
（6）冷却后加入等体积的酚(沉淀蛋白质)：氯仿：异戊醇（增强酚的作用）（25:24:1），小心上下颠倒混匀，12000r/min离心5min，将上清液转移到新的EP管，重复此步骤2-3次，直至分层界面无白色沉淀。
（7）加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），小心颠倒混匀，12000r/min离心5min将上清液转移到新的EP管。（纯化作用）
（8）加入0.6倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，12000r/min离心15min弃上清。
（9）向离心管中加入75%乙醇，12000r/min离心5min洗涤DNA沉淀，小心弃上清，重复洗涤1次，弃上清将离心管倒置于吸水纸上，晾干。
（10）加入50ul（双蒸水）/ TE Buffer溶解DNA于4℃保存。
（11）电泳检测
6、PCR扩增：（细菌的通用引物为27F和1492R）将提取得到的DNA进行PCR扩增，电泳检测扩增得到的16S rDNA（如果菌类分明，条带清晰，PCR原液可直接送去测序，双向测通，得到测序序列后到NCBI的BLAST页面比对，得出鉴定结果）
7、酶切带型分型确定操作单元：将扩增产物用HhaI和HaeIII两种限制性内切酶进行酶切，电泳检测酶切产物，酶切带型相同的分为一个操作单元。
8、连接转化：从每一个操作单元中选取一株菌的16S rDNA进行连接实验。将连接产物转入感受态细胞中，将感受态细胞涂布于含有Amp的平板上，倒置培养12-16h。
9、克隆子挑选及PCR鉴定：从上一步的平板上挑取单菌落于含有Amp的液体培养基中震荡培养12h，以培养液为模板直接进行PCR扩增鉴定（1000-2000bp）。将含有目的片段的克隆子菌液低温保存。
10、测序：将含有目的片段的克隆子菌液送去测序。
11、序列拼接：运用DNAMAN软件对测序得到的序列进行拼接。
12、建树：对拼接得到的序列用Blast进行比对，最后将比对得到的所有序列运用MEGA6建立系统发育树。
一般可以从形态和分子水平鉴定。形态观察可以从不同的菌型鉴定是杆菌、球菌等。最好的办法是做菌落PCR，特异性得到细菌的16s rDNA，然后通过基因测序手段得到16s rDNA序列，通过NCBI比对序列查找相似菌株，再建立系统进化树，从而得出种属关系。
是的，要做PCR。首先你要提出细菌的DNA。
方法如下：
1、液体培养及保种：从斜面上挑取菌苔于液体培养基中放摇床上震荡（转速160r/min）培养16小时。吸取菌液于1.5ml的经过灭菌的EP管中，再加甘油（30-40%）进行保种。（-80摄氏度保藏2年）
2、提取DNA（CTAB法）：
（1）取1.5ml菌液于1. 5ml离心管中，12000r/min离心2min，弃上清。
（2）向沉淀物中加入350ul双蒸水，重新悬浮沉淀。
（3）加入20ul10%SDS和3ul的蛋白酶K（20mg/ml），溶菌酶3ul，混匀，于50℃温育1h。
（4）加入50ul 5mol/L NaCl溶液，充分混匀，再加入50ul CTAB/NaCl溶液，混合后再65℃温育30min。
（6）冷却后加入等体积的酚(沉淀蛋白质)：氯仿：异戊醇（增强酚的作用）（25:24:1），小心上下颠倒混匀，12000r/min离心5min，将上清液转移到新的EP管，重复此步骤2-3次，直至分层界面无白色沉淀。
（7）加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），小心颠倒混匀，12000r/min离心5min将上清液转移到新的EP管。（纯化作用）
（8）加入0.6倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，12000r/min离心15min弃上清。
（9）向离心管中加入75%乙醇，12000r/min离心5min洗涤DNA沉淀，小心弃上清，重复洗涤1次，弃上清将离心管倒置于吸水纸上，晾干。
（10）加入50ul（双蒸水）/ TE Buffer溶解DNA于4℃保存。
（11）电泳检测
6、PCR扩增：（细菌的通用引物为27F和1492R）将提取得到的DNA进行PCR扩增，电泳检测扩增得到的16S rDNA（如果菌类分明，条带清晰，PCR原液可直接送去测序，双向测通，得到测序序列后到NCBI的BLAST页面比对，得出鉴定结果）
7、酶切带型分型确定操作单元：将扩增产物用HhaI和HaeIII两种限制性内切酶进行酶切，电泳检测酶切产物，酶切带型相同的分为一个操作单元。
8、连接转化：从每一个操作单元中选取一株菌的16S rDNA进行连接实验。将连接产物转入感受态细胞中，将感受态细胞涂布于含有Amp的平板上，倒置培养12-16h。
9、克隆子挑选及PCR鉴定：从上一步的平板上挑取单菌落于含有Amp的液体培养基中震荡培养12h，以培养液为模板直接进行PCR扩增鉴定（1000-2000bp）。将含有目的片段的克隆子菌液低温保存。
10、测序：将含有目的片段的克隆子菌液送去测序。
11、序列拼接：运用DNAMAN软件对测序得到的序列进行拼接。
12、建树：对拼接得到的序列用Blast进行比对，最后将比对得到的所有序列运用MEGA6建立系统发育树。
答：最常用的方法是热变性法，其次是高效液相色谱法和浮力密度法。(2)DNA-DNA杂交：DNA杂交可得出DNA之间核苷酸顺序的互补程度，从而推断不同细菌基因组间的同源性。目前最常用的是复性速率法，同一菌的复性率为100%；80%～90%的同源为同一种内同一亚种的细菌；60%～70%同源性为同一种内不同亚种的细菌...
答：是的，要做PCR。\x0d\x0a首先你要提出细菌的DNA。\x0d\x0a方法如下：\x0d\x0a1、液体培养及保种：从斜面上挑取菌苔于液体培养基中放摇床上震荡（转速160r/min）培养16小时。吸取菌液于1.5ml的经过灭菌的EP管中，再加甘油（30-40%）进行保种。（-80摄氏度保藏2年）\x0d\x0a2、提取...
答：1.dna-dna杂交，该技术被认为是细菌分类和鉴定的“黄金法则”，主要方法如下：标记法、吸光度法、荧光强度法等。2.16srrna法：细菌核糖体的rna有三种类型，(23s、16s、5s)rrna，其中16s被认为作为生物系统发育和分类指标最为合适。3.细菌核心基因（看家基因），包括gyrb、rpob、groel、recn等。
答：1、细菌常规鉴定方法 1. 1 免疫诊断技术 1. 1. 1凝集试验 目前常用的是葡萄球菌协同凝集试验(SPA - CoA) ,金黄色葡萄球菌细胞壁的A 蛋白(SPA) 能与动物血清中IgG的Fc 结合,成为致敏的颗粒载体,特异性IgG的Fc 与SPA 结合后, F (ab’) 2 段暴露在葡萄球菌表面,与相应细菌反应呈现凝集现象,此...
答：菌种鉴定的方法一般有常规鉴定和分子生物学方法：（1）常规鉴定：菌落形态观察、革兰氏染色、菌毛染色、糖类分解实验、吲哚实验、淀粉水解实验、V-P实验、甲基红实验、柠檬酸盐利用实验、硝酸盐还原实验、接触酶实验等 （2）分子生物学方法：细菌16SrDNA菌种鉴定：提取DNA，特定引物PCR扩增，PCR产物纯化测序...
答：一、分子生物学鉴定方法 分子生物学鉴定方法是一种基于细菌基因序列的鉴定方式。随着基因测序技术的快速发展，这种方法因其准确性和高效性而受到广泛应用。通过提取细菌的DNA序列，利用特定的引物进行PCR扩增，然后与已知的细菌基因序列数据库进行对比，可以迅速鉴定出细菌的种类。二、生物芯片技术鉴定 生物芯片...
答：（3）常见的生化鉴定：如糖发酵试验、吲哚（靛基质）试验、淀粉水解试验、V-P试验、甲基红（M、R）试验、柠檬酸盐利用试验、硝酸盐还原试验、接触酶试验、氧化酶试验。（4）血清学鉴定：检定抗原型或血清型。（5）分子生物学鉴定：利用分子生物学手段进行细菌的种属、亚型的鉴定。（6）动物试验：测定...
答：1. 显微镜观察法：这是一种通过显微镜观察细菌形态、大小、排列方式等特征来鉴定细菌的方法。通过对细菌样本进行染色处理，然后在显微镜下观察其形态特征，如菌体形状、鞭毛数量等，可以初步判断细菌的种类。这种方法操作简便，但准确性相对较低。2. 分子生物学鉴定法：随着分子生物学技术的发展，DNA序列分析...
答：1、传统方法 常规宏观菌落形态学观察,细菌的个体形态学观察，即通过显微镜观察。血清型鉴定,细菌毒力的测定.2、仪器自动化鉴定 如VITEK系统、MIDl系统、BIOLOG系统、 SENSITl.TRE系统、AUTOSCEPTOR系统以及MICROSCAN系统等 3、分子生物学鉴定 主要是核酸检测技术，包括基因测序、指纹图谱技术、基因探针技术、...
答：菌落形态，菌丝，孢子体，致病性，革兰氏染色的阴阳，DNA序列等。。。
