动物细胞培养的取材要求
一、细胞培养的条件和要求
1.所有与细胞接触的设备、器材和溶液等,都必须保持绝对无菌,避免细胞外微生物的污染。
目前最可靠和最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。
如:玻璃制品、布类、金属制品:6.8kg20min。
橡胶制品:3.6~4.5kg10min。
培养用液,如Hanks液,水解乳蛋白:3.6~ 4.5kg10min。
实验中染菌物品和动物尸体等:6.8 kg20min。
试管、吸管等,则可采用干热灭菌;
一切不适于加热灭菌的液体,如人工合成培养液、小牛血清、胰蛋白酶等溶液,可采用过滤法除菌。
细胞培养中常用的消毒剂浓度及其使用场合
2.必须有足够的营养供应,而绝对不可有有害的物质,包括极微量的有害离子的掺入,为此必须注意器材的清洗和配液用水的质量。
细胞培养中对水的质量要求很高(见水处理)。
3.保证有适量的氧气供应。
细胞代谢需要有空气,否则细胞死亡。在用培养瓶进行静止培养,或用转瓶进行旋转培养时,只要培养的液体量不超过总容量的30%,通过与液面的空气交换,可以保证细胞有足够的氧气。当用罐子深层培养时,则必须通气,一般采用含5%CO2的空气,或根据需要将CO2、N2、O2和空气以不同比例混合,过量氧对细胞的生长也不利。
4.需随时清除细胞代谢中产生的有害产物。
细胞在代谢过程中会产生大量代谢废物,如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等,这些产物对细胞的生存有害,必须及时清除。在小量培养时,当培养基中酚红指示剂显示黄色,表示已有相当量乳酸产生,要及时更换新鲜的培养基。在大量培养时,则需随时测定葡萄糖和乳酸等含量,并调节灌流速度,使代谢产物保持在无害水平下。
5.有良好的适于其生存的外界环境,包括温度、pH、渗透压和离子浓度等。
不同的细胞对pH的要求不同,一般来说适于细胞生长的pH在6.8~7.4,过高或过低均不利于细胞生长。如上所述,细胞在代谢过程中会产生大量乳酸,使培养的pH下降。为了保持培养液的pH,常在培养液内加入各种缓冲系统,如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3(CO2)、Tricineglycine,以及加缓冲剂Hepes液(常用浓度为10~50mol/L).
6.及时分种,保持合适的细胞密度(见细胞传代)
取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或用胶原蛋白酶)处理(消化),形成分散的单个细胞,将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞就会停止分裂增殖,出现接触抑制。
此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外,原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。
当细胞从动植物中生长迁移出来,形成生长晕并增大以后,科学家接着进行传代培养,即将原代培养细胞分成若干份,接种到若干份培养基中,使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法,从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质。
培养条件:
1、无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
2、营养物质:无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因子等)。
3、血清和血浆 。(提供细胞生长必须的营养成份)
4、温度和pH。(36.5±0.5℃,7.2~7.4)
5、气体环境。(95%的空气+5%CO₂的混合气体)
扩展资料:
动物细胞有细胞核、细胞质和细胞膜,没有细胞壁,液泡不明显,含有溶酶体,动物细胞的结构有细胞膜、细胞质、细胞器、细胞核;它们的主要作用是控制细胞的进出、进行物质转换、生命活动的主要场所、控制细胞的生命活动。
细胞内部有细胞器:细胞核,双层膜,包含有由DNA和蛋白质构成的染色体。内质网分为粗面的与滑面的,粗面内质网表面附有核糖体,参与蛋白质的合成和加工;光面内质网,表面没有核糖体,参与脂类合成。
植物细胞与动物细胞区别:
1、培养基不同:植物细胞(固体培养基),动物细胞(液体培养基)。
2、培养基的成分不同:动物细胞培养必须利用动物血清,植物组织培养则不需要,而需要加入植物生长素。
3、产物不同:植物组织培养最后一般得到新的植物个体,而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性,因此得到的是只含同一种的细胞的一个细胞系(或者叫细胞群)。
4、原理不同:植物组织培养的原理为植物细胞的全能性,动物细胞培养的原理为细胞的增殖分化。
5、过程不同:植物组织培养的过程为脱分化和再分化,动物细胞培养的过程为原代培养和传代培养。
参考资料来源:百度百科——动物细胞培养
幼嫩的动物组织,剪碎,胰蛋白酶处理时间适当,使组织分散成单细胞悬浮液。
用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物的器官或组织。
注意无菌。
答:取材的基本要求 (1)取材的组织最好尽快培养。因故不能即时培养,可将组织浸泡于培养液内,放置于冰浴或4度冰箱中。如果组织块很大,应先将其切成1cm3以下的小块再低温保存,但时间不能超过24h。 (2)取材时应严格无菌操作,用无菌包装的器皿或用事先消毒好的,带少许培养液的小瓶等便于携带的物品取...
答:取材后应立即处理,尽快培养,因故不能马上培养时,可将组织块切成黄豆般大的小块,置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌,同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌,为减少污染可用抗菌素处理。三、培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为...
答:二、取材。当人们完成好动物细胞培养实验的准备工作后则应进行取材工作,在这一流程中需要要求在无菌的环境下提取出动物细胞并经过一系列的处理工作后接入培养器皿中,为了避免接触到有害物质影响实验的成功率应保证在无菌的环境中完成取材工作。三、培养。为了使动物细胞快速食物进入到生长状态中,人们在进行...
答:酶解法的优缺点:能有效去除细胞壁。但是,对原生质体有所伤害 比较动物细胞培养与植物细胞培养的异同:都属于细胞工程,都是以细胞有丝分裂的方式增值的,二者取材尽量取分化程度低的组织细胞。动物细胞培养液特有动物血清,植物细胞培养液特有植物激素。动物细胞培养需对材料用胰蛋白酶处理。
答:电热恒温培养箱六、电热恒温干燥箱七、液氮生物容器八、C02培养箱九、冰箱第三节 动物细胞用液制备一、蒸馏水二、平衡盐溶液三、天然培养基四、合成培养基五、血清细胞培养基六、无血清细胞培养基七、消化液八、稳定剂九、蛋白酶抑制剂十、pH调整液十一、20 mmol/L L一谷氨酰胺十二、抗菌素液十三、...
答:用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织,主要因为胚胎或幼龄动物的器官或组织分裂能力旺盛.故选:D.
答:动物细胞培养液的成分:葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 基本过程:取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎,并用胰蛋白酶处理(消化),处理形成单个细胞,将单个的细胞放入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,成为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到...
答:动物细胞培养的结果是得到更多的动物细胞及其代谢产物;早期胚胎培养的结果是得到早期胚胎(囊胚期之前)。两者的区别很多,如:取材、培养基的成分,培养条件等。
答:一、动物细胞培养一概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。二过程:取材→分散→配制悬液→原代培养→传代培养。每一步分别是如何处理的?⒈细胞培养前为什么要对细胞分散处理?⒉什么是细胞贴壁?什么是接触抑制?⒊什么是原代培养?什么是...
答:1、所属的生物工程范围不同 (1)动物细胞培养技术属于细胞工程中的动物细胞工程。(2)早期胚胎培养技术属于胚胎工程。 2、培养的目的不同 (1)动物细胞培养技术主要是为了大规模培养组织细胞来获得大量细胞产物(如干扰素、单克隆抗体等)或者获取细胞本身(用于检测有毒物质,生理、病理、药理等...