为什么我的细胞培养的时间一长，就会出现污染？？
有几种可能性:
1.可能是所用的培养液用的时间太久,里面的必须营养成分谷氨酰胺缺失------配制好的培养液在4度冰箱放置两周后,大部分谷氨酰胺就已破坏,在缺少谷氨酰胺时会出现细胞生长不良等现象.以前我养的细胞也出现过纤维化 变脏等现象,我换成新鲜培养基后它就变好 了.
2.PH值不合适.比如原来生长条件是一个PH,现在改变较大.
3.传代时细胞密度太小.有些细胞在相互接触状态下长得比较好.
你可以改用新配制的培养液,并把细胞传密些先养养试试.
细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。个体细小，有增多趋势。镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素有抗药性，多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。
培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。
采用组织细胞培养法生产疫苗，如果没有除去潜在病毒的组织培养物，会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。若二倍体细胞系有SV40或多发瘤病毒，B淋巴细胞含EB病毒，细胞和会发生变异、转化，形成异倍体的细胞系。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。 五、非同种细胞污染
由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，操作不当，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。如“灵长类”细胞系发现猴和鼠类细胞的混合物，ERK/KD细胞是从兔肾中分离出来的，而现在却认为是HeLa细胞。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。 非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。 第二节污染来源及鉴别 一、污染来源
细胞培养过程中污染的来源主要有以下几条途径。 1、不洁的动物组织标本
很多动物组织本该是无菌的(直接与外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系统除外)，但由于取材时不小心也会有污染的机会。组织本身含有细菌，如取材时不用浓的抗生素洗液洗涤浸泡，也会带菌，造成细胞污染。 2、空气
空气中含有大量的微生物，如果操作室与外界隔离不严或消毒不充分下，很容易造成污染。另外，净化工作台使用过久，滤板未定期更换或长久不更换，滤气受尘埃堵塞，工作时不带口罩或外界气流过强，污染空气进入操作区，也会导致污染。春夏季南方地区多雨，空气湿度大，含菌量多，工作不注意也易造成污染。
3、清洗消毒
培养用物品、材料洗刷不净，培养用液和器材灭菌不彻底也会引入微生物和有毒物质。 4、操作
来自操作者的污染主要有以下几方面：
器材和溶液使用前未仔细检查是否污染过，或者是否已经消毒灭菌处理过，或者虽经处理，时隔已久又末重新处理。
操作者未戴口罩、帽子，呼出气中排出细菌和支原体。
另外，建议去订一批新的板。
首先我们应该知道你养的是什么细胞。是原代，还是细胞系。因为原代较容易造成污染；其次，应该发张图片让大家看看具体是什么污染。
否则很难回答好你的问题。
这里很难解释清楚，可以给我短信，希望能我们可以共同解决这个问题！
1先我们应该知道你养的是什么细胞。是原代，还是细胞系。因为原代较容易造成污染；其次，应该发张图片让大家看看具体是什么污染。
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2如果总是那时出现污染 就有可能是你的24孔板没有消毒彻底 或操作不规范。
污染不会凭空出现 有污染总会是哪个操作步骤带菌啦 仪器的灭菌和整个实验过程都要细致、要严格按操作规范来进行
3楼主的细胞是被虫子污染。你平时应该经常有观察，总是在半个月就出虫？是虫，不是污染的细胞？板使用之前先照紫外光看看，照2小时应该能杀虫卵。整个实验室是否彻底消毒过，如果别人也是这样的情况，就消毒一下。另外培养箱要彻底消毒。还有注意放置的位置。培养箱里也会出现交叉污染。不知道你是不是和别人共用培养箱，如果有别的比较强悍的细胞也放在培养箱里，你要把自己的细胞放在那些细胞的上层，最强悍的细胞就放到一楼，最弱的细胞放顶楼。
1先我们应该知道你养的是什么细胞。是原代，还是细胞系。因为原代较容易造成污染；其次，应该发张图片让大家看看具体是什么污染。
否则很难回答好你的问题。
这里很难解释清楚，可以给我短信，希望能我们可以共同解决这个问题！
2如果总是那时出现污染 就有可能是你的24孔板没有消毒彻底 或操作不规范。
污染不会凭空出现 有污染总会是哪个操作步骤带菌啦 仪器的灭菌和整个实验过程都要细致、要严格按操作规范来进行
3楼主的细胞是被虫子污染。你平时应该经常有观察，总是在半个月就出虫？是虫，不是污染的细胞？板使用之前先照紫外光看看，照2小时应该能杀虫卵。整个实验室是否彻底消毒过，如果别人也是这样的情况，就消毒一下。另外培养箱要彻底消毒。还有注意放置的位置。培养箱里也会出现交叉污染。不知道你是不是和别人共用培养箱，如果有别的比较强悍的细胞也放在培养箱里，你要把自己的细胞放在那些细胞的上层，最强悍的细胞就放到一楼，最弱的细胞放顶楼。
另外，建议去订一批新的板。
如果总是那时出现污染 就有可能是你的24孔板没有消毒彻底 或操作不规范。
污染不会凭空出现 有污染总会是哪个操作步骤带菌啦 仪器的灭菌和整个实验过程都要细致、要严格按操作规范来进行。
要检查一下培养皿消毒是否干净，我原来做细胞培养也经常污染，而且操作台也要很干净。消毒一定要彻底，我原来做的时候用烘箱消毒105摄氏度先消毒30分钟间隔30分钟再消毒30分钟，做两次，才会很好。
操作的时候还要严格按操作规程，口罩、手套必须带。
我建议你转到24孔钣的时候要用紫外线灯对操作间严格的消毒
补充，一次性的一样要消毒。你最好能发张照片，看看那是什么物种。
答：随着时间的延长，培养液内的细菌会越来越多，随着营养物质的减少和细菌代谢产物的增多，培养液会变得越来越不适宜细菌繁殖，此时会有一些细菌死亡，死亡的细菌会沉在底部。此外，细菌的某些代谢产物，也可能与培养基的成分发生反应产生沉淀，一些无动力的细菌也会沉淀在底部。
答：如果是分离瘤细胞的原代培养出现老化现象严重，那么很可能是培养体系的问题。另外，初学者建议每得到一种新细胞，都要对其进行间隔8hr一次的生长曲线描绘，有助于你对该细胞的生长的四个时期建立良好的认识。可根据现有培养体系的差异对自己的细胞培养的时间进行修正。
答：是为了了解微生物的习性以及细菌和某些疾病的关系。一般细胞是没有细菌的但是为了防止意外发生还是需要观察培养一段时间再进行处理的。细胞培养技术又叫细胞克隆技术。细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长，在培养的过程中细胞不再形成组织。
答：不是同一种操作。细胞换液：随着细胞培养时间的的延长，培养基中的营养物被消耗，细胞的代谢产物愈来愈多，尤其是细胞呼吸反应释放出的CO2及其它酸性代谢产物的增加，培养液的pH值越来越低，培养液的颜色越来越黄。此时就需要对细胞进行换液。换液时吸掉旧培养液，用PBS 洗涤细胞一至二次，加入适量的...
答：细胞状态不好的细胞举例如下：细胞形态：传代越多你就会发现细胞的形态都会有或多或少的变化,会有细胞变异,不规则形状变多.细胞内部会有更多的颗粒出现.然后就是根据细胞的传代时间的变化,多久长满一瓶等等很多小细节来看细胞的状态.培养箱和无菌操作台这些硬件条件就不说了，养细胞首先要选好血清，不同...
答：毒害组织本身，导致组织变褐甚至死亡。可添加活性炭、硝酸银等吸附有害物质的成分或维生素C等抗氧化剂来改善组织生长状态，也可勤换培养基来改善。5、也可能是你接种的植物在接种之前的消毒过程，消毒剂浓度过高或消毒时间过长，导致的植物组织在接种前就已经坏死，接种后也会发黑腐烂。
答：动物细胞会有一定的损伤的。尤其是时间很长，细胞会大量死亡的。动物细胞相当于植物细胞和微生物要脆弱很多，体外培养条件要求是很严格。
答：细胞贴壁，有丝分裂，接触抑制，原代培养一般传代至10代左右。动物细胞体外培养时，生物反应器是整个培养过程的关键设备，为细胞提供了一个适宜的生长环境，使之快速增殖并形成所需的生物组织制品。由于动物细胞在其形态结构、培养方法以折弯机及所需的力学环境等方面均不同于微生物细胞，因而传统的微生物...
答：在细胞分裂的时候，染色体两端的 端粒 会因为分裂而变短，所以应该是培养时间越长，染色体越短。这也是衰老的原因
答：尿素进出细胞的方式有点特殊，我们一般接触到的小分子物质进出细胞涉及到的方式是主动运输，需要载体和能量，但是尿素进出方式是自由扩散，不需要载体和能量，主要和浓度有关系，是从高浓度向低浓度扩散，小鼠肝细胞代谢过程中产生的尿素自然就会通过自由扩散的方式进入到培养液中。
