植物组织培养操作的过程

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-07-10
植物组织培养的流程

植物组织培养的流程:
第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗。
流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物,除去脂质性的物质,便于灭菌液的直接接触。当然,最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。

第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成,准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10~30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用,加之70%酒精穿透力强,也很易杀伤植物细胞,所以浸润时间不能过长。
有一些特殊的材料,如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗,多层鳞片的休眠芽等等,以及主要取用内部的材料,则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下,待酒精蒸发后再剥除外层,取用内部材料。

第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多,可根据情况选取1~2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗,涮洗要每次3min左右,视采用的消毒液种类,涮洗3~10次左右。
无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意:①酒精渗透性强,幼嫩材料易在酒精中失绿,所以浸泡时间要短,防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料,特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些,如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱,一般浸泡10分钟左右,对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿,所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08~0.12%的吐温20或80(一种湿润剂),可以降低植物材料表面的张力,达到更好的消毒效果。

扩展资料培养材料采集:
要根据培养目的适当选取材料,选择原则:易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料,不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天,最好是中午或下午取材料,决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合作用、呼吸作用旺盛的组织,有自身消毒作用,这种组织一般是无菌的。
培养材料的消毒:
从外界或室内选取的植物材料,都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带入培养基,便会造成培养基污染。因此,植物材料必须经严格的表面灭菌处理,再经无菌操作手续接到培养基上。
参考资料:植物组织培养_百度百科

植物组织培养可以分为四个阶段:
(1)建立无菌体系,即外植体及培养基的消毒、接种,获得愈伤组织或器官。
(2)进行增殖,不断分化产生新的植株,或直接产生不定芽及胚状体,也可以根据需要反复进行继代培养,以达到大量繁殖的目的。
(3)将植株转移进行生根培养,可以转入生根培养基,也可以直接切取进行扦插生根。
(4)试管苗过渡,即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。

组培室标准操作程序

一 生产环境

1 工作人员进入组培室必须穿工作服,包括更换拖鞋、穿白大褂,接种人员还要带帽、带口罩。

2 所有人员在组培室内不准高声喧哗、打闹。

3 工作期间,各生产房间要关闭房门,尤其是接种间;工作人员出入要随手关门。

4 各种生产用品要安固定的位置排放整齐,不可乱拿乱放。

5 工作过程中所产生的垃圾要及时清理,尤其是接种间,其内垃圾停留时间不得超过4小时。

二 接种程序

1. 准备工作:接种人员在正式接种之前要做好准备工作,包括准备酒精灯、新洁尔灭、灭菌用脱脂棉以及准备接种工具、分取培养基、接种用苗和工作台灭菌等。

·酒精灯用工业酒精作燃料,而非75%酒精。

·工作台上用的新洁尔灭浓度是0.1%,而非0.01%。

·工作台灭菌包括两步:一是上台前用紫外灯照射30分钟,二是正式接种前再用新洁尔灭仔细擦一遍。

·培养皿的取放:从布包里取培养皿时,一定要注意,手不能接触培养皿的边沿,同时要尽可能减少与培养皿的接触面,一般规定只能用双手的拇指和食指取放。

·接种工具灭菌也分两步,一是用灭菌布包裹好,在高压锅里灭一次,这一步由灭菌人员负责完成;二是在工作台上,从布包里取出后,先用酒精擦拭一下,再放在酒精灯火焰上灼烤一遍,其要求是工具的每一点在火焰上灼烤时间不得少于5秒钟。在工具灭菌之前,工作人员的手部,包括手腕,都要用酒精仔细擦拭一遍。

2 接(转)苗:包括取苗、切苗和接苗三步。

·取苗:先解开培养瓶的瓶盖(封口膜),如果不能一次取出其内的全部材料,要先把封口膜(瓶盖)口对者风源放在酒精灯的左前方,然后把瓶口在酒精灯上烤7~10秒;正式取苗时,瓶口不要斜向外;一次取苗不可太多,以免风干。

·切苗:培养皿放在离风窗10~20厘米处,不可太往外;镊子和手术刀都不可太热,最好是凉的,且在操作过程中,刀和镊都要培养皿斜上方操作,不可在其正上方操作;在切苗过程中产生的垃圾可堆放在培养皿内的一侧位置上,若非迫不得已,不可弄到培养皿外。

·接苗:培养瓶盖(或封口膜)的放置方法和及瓶口灼烤方法与取苗时的相同,烤完瓶口后,要先倒掉瓶内多余的水分,然后在接苗;接苗时,镊子最好不要与瓶口接触,一瓶内一般接5~6棵苗,不要放得太多;组培苗在瓶内要排放均匀、整齐、美观。

·封口、记录:封口膜要及时捆绑,其松紧度以用手转不动为准;下台前要把品种代号、培养基类型、个人编号以及接种日期标示到瓶上。离开之前还要把工作台收拾干净,把接种过程中产生的垃圾清理掉,台上的物品也要摆放整齐。

三 组培苗的管理

1.瓶苗要整齐的摆放在自己的组培架上,不可乱放。

2.接种人员每天都要统计自己的接种数量,包括转前瓶数和转后瓶数。

3.值日人员要定时开灯、关灯,保证组培苗有足够的光照时间,但也不可过长,以每天14小时左右为宜。

四 接种用具的清洗

1.洗刷培养瓶、培养皿:第一步:把培养瓶培养皿放入洗洁净溶液里,先用毛刷清洗内部,再用钢丝球把外面的字清洗掉。第二步:把他们再用清水冲洗3-5遍。第三步:把瓶内的积水倒掉,倒放在准备台,准备台上要先放一层纱布。这一步的清洁标准是:凉干的瓶壁(器皿)内外无明显的斑点、污迹。

2.洗涮镊子:用洗洁精浸泡五分钟,用钢丝球打磨一下然后放入清水冲洗三遍。

五 灭菌

1.对污染苗灭菌:一经发现就随即灭菌处理,大量的进行高压灭菌,少量的加入工业酒精在室外进行处理。

2.室内空气灭菌:每四周用高锰酸钾和甲醛对室内空气灭一次菌。

3.室内地面:每2-3天用新洁尔灭拖一遍地。

4.卧式和手提式高压灭菌锅使用程序:严格按使用说明书操作。

  • 植物组织培养的过程是什么?
    答:植物组织培养可以分为四个阶段:(1)建立无菌体系,即外植体及培养基的消毒、接种,获得愈伤组织或器官。(2)进行增殖,不断分化产生新的植株,或直接产生不定芽及胚状体,也可以根据需要反复进行继代培养,以达到大量繁殖的目的。(3)将植株转移进行生根培养,可以转入生根培养基,也可以直接切取进行扦...
  • 进行植物组织培养一般要经历哪几个阶段?
    答:如:茎尖→表面消毒→接种诱导培养基→茎尖生长→病毒检测鉴定→培养无根小植株→培养生根→完整小植株→炼苗20-25天→移栽成活。 对不同的品种词流程会略有差异,如进行果树育苗还需进行嫁接等操作流程,但对组培工厂化育苗而言,一般可根据上面的流程图来安排各项作业,只有相互衔接好、配合好,才能提高生产效益。 植物...
  • 植物组培过程包括哪些步骤?
    答:一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤:(1)准备阶段 查阅相关文献,根据已成功培养的相近植物资料,结合实际制订出切实可行的培养方案。然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基,并经高压灭菌或过滤除菌后备用。(2)外植体选择与消毒 选择合适的部位作为外植体,采回...
  • 组织培养的一般过程是怎样的
    答:(1)器具的消毒。组培前玻璃器皿等要用洗衣粉刷洗干净备用。接种室和超净工作台用70%酒精擦洗,并用紫外光照射。其他用具也要进行高温消毒。(2)培养材料的采集。组培所用的植物材料可采用根、茎、叶、花、芽及种子的子叶、胚轴的一部分,有时也可利用花粉或花药。通常应取初生幼嫩的材料,这些材料...
  • 怎样进行组织培养?
    答:将生长点接种在MS+BA0.5+IAA0.2+GA0.25的培养基上,光照强度为3000勒克斯,白天温度25—28℃,夜间温度18—20℃,光照时间10小时左右,茎尖10—15天膨大,迅速生长、分化、增殖,经过约60天培养,每个生长点可形成10余个芽丛,然后再转接到MS+BA0.2+IAA0.1+GA0.5的生长培养基上。为加快繁殖...
  • 植物组织培养的过程有哪些?
    答:植物组织培养是一种体外培养植物细胞、组织或器官的技术,它可以用于研究植物生长、发育、遗传变异、植物病原体的研究以及植物繁殖的改良等方面。植物组织培养的过程通常包括以下几个主要步骤:1.组织样本的选择和准备: 首先选择适合培养的组织样本,可以是幼嫩的茎、叶片、根、胚或芽等。将这些组织样本进行...
  • 简单概述植物组织培养过程.
    答:一、培养材料的采集 组织培养所用的材料非常广泛,可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶,有时也利用花粉粒和花药,其中根尖不易灭菌,一般很少采用.对于木本花卉来说,阔叶树可在一、二年生的枝条上采集,针叶树种多采种子内的子叶或胚轴,草本植物多采集茎尖.在快速繁殖中,最常用的培养材料是茎尖,通常...
  • 植物组织培养怎样进行技术操作?
    答:(1) 培养基的组成:主要包括无机盐(如大量元素和微量元素)、有机物(如蔗糖、维生素、氨基酸、核酸等)、螯合剂(如EDTA)和植物激素。固体培养基还需加入琼脂。常用的培养基有MS培养基,其中铁盐的使用量为柠檬酸铁10毫克/毫升,其他培养基使用铁盐母液5毫克/毫升。(2) 培养基的配方:植物组织培养...
  • 简单概述植物组织培养过程.
    答:在快速繁殖中,茎尖是最常用的材料,通常切成0.5厘米大小的块状。若培养无病毒苗木,通常只取茎尖的分生组织部分,长度在0.1毫米以下。二、消毒培养材料 1. 首先用流水清洗材料,最后用蒸馏水冲洗,并用无菌纱布或纸巾吸干水分。2. 将材料浸入70%酒精中30至60秒。3. 接着将材料移入饱和漂白粉溶液或...
  • 植物组织培养过程分为哪几个阶段?
    答:植物组织培养可以分为四个阶段:(1)建立无菌体系,即外植体及培养基的消毒、接种,获得愈伤组织或器官。(2)进行增殖,不断分化产生新的植株,或直接产生不定芽及胚状体,也可以根据需要反复进行继代培养,以达到大量繁殖的目的。(3)将植株转移进行生根培养,可以转入生根培养基,也可以直接切取进行...