如何提取基因?

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-07-02
获取目的基因的方法有哪些(详细)

如何从基因文库中获取目的基因

1.从基因文库中获取目的基因(俗称:鸟枪法):将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌

的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。

当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因

在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基

因。

2.化学合成法。已知目的基因的核苷酸序列,可用DNA合成仪直接合成。

3.用PCR技术扩增技术提取。已知目的基因引物的序列,将整个DNA放入合成仪,因为只有当

引物与模板结合后DNA热聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中间的目的基因被大量扩增,

即被提取出来。

DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有;硅质材料、阴离子交换树脂等。

提取DNA总的原则:

1.保证核酸一级结构的完整性;

2.核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;

3.其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;

4.其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。

例如 : 用酶法提取

DNA提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。

工具/原料: 研磨棒、研磨仪或者组织破碎仪 , 氯仿:异戊醇(24:1)或者蛋白酶 , RNA酶 ,  酒精 , 冰箱

方法/步骤 : 

  1. 使用研磨仪、研磨棒或者使用超声破碎细胞的方法破碎细胞,加入去污剂,如sds等,除去膜脂。

  2. 去除细胞内的蛋白质,包括与DNA结合的组蛋白,通过加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提等方法去除。

  3. 加入RNA酶去除RNA,如实验不严密,可省略此步。

  4. 沉淀DNA,需在冷乙醇或异丙醇中沉淀,放在冰箱-20℃沉淀30分钟以上,原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起发生沉淀。

总结: DNA提取方法有下面⑦种

一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

四.异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)

五.表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。

六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。

七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。



先获得生物的细胞,然后设法取出其染色质选段切,但那样多余片段太多。最好是找到表达该基因的细胞,提取出它的mRNA,逆转录出的DNA中再挑出你要的那个,就是基因。

把生物的肉剪下来,消化操作。
然后提取,常用有试剂盒法,和酚氯仿法。
前者是买的消耗品,60元钱一离心管(100微升)。
后者是没钱的苦孩子做的,各种化学提取,很麻烦,还很容易搞不纯。
科研没钱伤不起。。。

可以用碱解法,煮沸法等等多种方法。提取质粒DNA最常用的还是质粒抽提试剂盒,方便又快捷。

有特异性的DNA限制性内切酶

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