高效液相色谱在分子生物学中的作用
1、溶剂输送系统；储液器，用来贮存数量足够、符合要求的流动相。配有溶剂过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵内。脱气器，脱气的目的是为了防止流动相从色谱柱内流出时释放出气泡进入检测器，从而引起噪声，不能正常检测。
输液泵，将储液器中的流动相连续不断地以高压形式进入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。梯度洗脱装置，是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种装置。
2、进样系统；进样器：是将样品送入色谱柱的装置，进样方式可以分为两种：阀进样或自动进样。比较常用的是采用自动进样器装样。
3、分离系统；色谱柱：对样品进行分离，是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响到分离的效果。
4、检测系统；检测器：将色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号，被数据系统接收，得到样品分离的色谱图。
5、数据处理和记录系统；对色谱数据进行处理，并参与HPLC仪器的自动控制。
扩展资料
与试样预处理技术相配合，HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。
HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
参考资料来源：百度百科——高效液相色谱仪
1、溶剂输送系统；储液器，用来贮存数量足够、符合要求的流动相。配有溶剂过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵内。脱气器，脱气的目的是为了防止流动相从色谱柱内流出时释放出气泡进入检测器，从而引起噪声，不能正常检测。
输液泵，将储液器中的流动相连续不断地以高压形式进入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。梯度洗脱装置，是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种装置。
2、进样系统；进样器：是将样品送入色谱柱的装置，进样方式可以分为两种：阀进样或自动进样。比较常用的是采用自动进样器装样。
3、分离系统；色谱柱：对样品进行分离，是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响到分离的效果。
4、检测系统；检测器：将色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号，被数据系统接收，得到样品分离的色谱图。
5、数据处理和记录系统；对色谱数据进行处理，并参与HPLC仪器的自动控制。
扩展资料
与试样预处理技术相配合，HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。
HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
参考资料来源：百度百科——高效液相色谱仪
【摘要】HPLC是目前生物分析中应用最广泛、发展最迅速的一种分析方法，但由于生物样品组分复杂、仪器缺陷，HPLC的应用受到诸多限制。
【关键词】HPLC 生物分析
【引言】 HPLC是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。随着HPLC这一种分类分析技术的广泛应用，现在每天都有色谱工作者在研究使用HPLC。
【正文】
1 HPLC的发展简史
HPLC的发展始于20世纪60年代中后期，在经典液相柱色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术，应用于液相柱色谱系统的设计，同时机械、光学和电子等技术上的进步，也促使了HPLC的发展。20世纪70年代，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。20世纪80年代新一代是智能色谱仪，能在12到24小时完成人们一周或一月的劳动目前HPLC已成为化学、药学、医学、生物化学、环保等科学领域中重要的分类分析技术，HPLC已广泛开展和应用，各大学、研究所和工厂的试验室中，它已作为一种常备仪器使用。
2 HPLC的分类
吸附色谱
分配色谱
离子色谱
体积排阻色谱
亲和色谱
3 HPLC方法建立的步骤
了解样品的性质，明确分离目的。
是否需要特殊的HPLC步骤、样品预处理等。
选择检测器和检测器设置
选择液相色谱法；进行预实验；估计最佳分离条件
优化分离条件
检测出现的问题或所需的特殊步骤
论证方法使之进入常规实验室
4 HPLC在生物分析中的应用
HPLC在药物分析中的应用
HPLC是目前生物样品药物分析中应用广泛、发展迅速的一种分析方法，但由于生物样品组分复杂，特别是含大量蛋白质等大分子杂质，易引起柱头堵塞而升高柱压；另外试样中药物浓度较低，需进一步富集才能检出，都需要对试样进行适当的前处理，以使药物净化、富集。通常的方法是进行液液萃取，但存在诸如易产生乳化、杂质较多、回收率低、需要的样品量大等缺点。固相萃取是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理，使液体样品通过一吸附剂，保留其中某一组分，再选用适当溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱，从而达到分离、净化与浓缩的目的作为从生物样品中提取净化微量药物或其代谢产物的新方法，己被广泛地用于生物样品的检测中，其中尤以与技术结合用于生物样品的分析引人注目。
生物检测
Raggi等 报道用SPE-HPLC 同时测定人血浆中氯氮平和其活性代谢物去甲氯氮平的含量，两者的绝对回收率均高于88%，优于其他方法，检测限为1ng/ml
Lacroix 等 建立了SPE-HPLC荧光检测法测定人血浆中的神经肌阻滞剂Mivacurium Chloride对映异构体及其代谢物，其检测灵敏度可达3.9ng/ml 。Moriyama 等 用C18 柱，仅用20ul血浆，同时测定抗癫痫药扑米酮及其活性代谢物苯乙基丙二酰和苯巴比妥。谭力等 建立了SPE-HPLC 测定依那普利血药浓度的方法，最低检测浓度为1.5ng/ml,Lu 等用SPE-HPLC 荧光检测法测定了血浆中痕量甲氨蝶呤和羟甲氨蝶呤，甲氨蝶呤的最低检出限为0.05ng/ml。Farin等用SPE-HPLC 检测人血浆中美洛哌平的含量，其检测限为0.02ug/ml 。由于美洛哌平的pH 快速变质而要求Ph4.5以上，而在这样的pH 条件下将导致蛋白质的不完全沉淀，增加柱压和污染柱子，必须在制样后1h 内进行HPLC检测。而用SPE ，因没有低的 pH条件限制，可以避免制样后须快速进样分析的限制。
HPLC法在四环类抗生素质控分析中的应用
据文献报道，通用的四环类抗生素的色谱分析体系为反相色谱系统，流动相可概括为碱性流动相(Ph>7.5)和酸性流动相(Ph<2.5)。由于反相色谱填料在偏碱性条件下硅胶颗粒易溶解；在偏酸性条件下键合相易水解。故对四环类抗生素一直未采用HPLC法进行质量控制。近年来，伴随着色谱填料的发展，键合硅胶抗酸、碱的能力大大提高，得采用HPLC法控制四环类抗生素的产品质量成为可能。经比较，碱性流动相体系较酸性流动相体系更易得到较好的分析结果。四环素类抗生素为碱性抗生素，与硅胶填料上的硅醇基的相互作用较强，色谱峰易拖尾。故对不同牌号的色谱柱，由于填料封尾情况的差异，对其色谱峰形的影响不同，采用全封尾的色谱填料，如Kromasil C18等易得到较对称的色谱峰。
【小结】
高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色谱柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组分容易收集、适用范围广和安全。同时随着机械、光学和电子、计算机等技术上的进步，高效液相色谱法将得到极大发展，适用范围也将越来越广。生物科学的发展也离不开HPLC。
【参考文献】高效液相色谱法在抗生素质控分析中的应用气象 北京 2001
NULL 分析化学 大连理工大学出版社 2004
张玉奎等译 实用高效液相色谱法的建立 华文出版社 北京 2001
何 华 倪坤仪 主编 现代色谱分析 化学工业出版社 北京 2004
王新春 阳长明 侯世祥 李章万 中国医院药学杂志 2001年第 21卷第 12期
答：高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色谱柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组分容易收集、适用范围广和安全。同时随着机械、光学和电子、计算机等技术上的进步，高效液相色谱法将得到极大发展，适用范围也将越来越广。生物科学的发展也离不开HPLC。【参考文献】高效液相色谱法在抗生...
答：细菌的G+Cmol%相当稳定，不受培养条件、菌龄和其他外界因素影响。最常用的方法是热变性法，其次是高效液相色谱法和浮力密度法。(2)DNA-DNA杂交：DNA杂交可得出DNA之间核苷酸顺序的互补程度，从而推断不同细菌基因组间的同源性。目前最常用的是复性速率法，同一菌的复性率为100%；80%～90%的同源为同...
答：高效液相色谱法(HPLC)是目前应用广泛的分离、分析、纯化有机化合物(包括能通过化学反应转变为有机化合物的无机物)的有效方法之一。 在已知的有机化合物中，约有80%能用高效液相色谱法分离、分析，而且由于此法条件温和，不破坏样品，因此特别适合高沸点、难气化挥发、热稳定性差的有机化合物和生命物质。
答：将分子生物学技术应用到临床检验诊断学，使疾病诊断深入到基因水平，称为基因诊断。基因诊断技术主要包括核酸分子杂交技术、聚合酶链式反应（PCR）技术、基因多态性分析技术、单链构象多态性（SSCP）分析技术、荧光原位杂交染色体分析（FISH）技术、波谱核型分析（SKY）技术、DNA测序技术、基因芯片技术以及蛋白质...
答：分子生物学技术:可套用于遗传性疾病的研究和病原体的检测及肿瘤的病因学、发病学、诊断和治疗等方面的研究提高到了基因分子水平。 生物学定义:生物学是研究生命现象和生物活动规律的科学。 据研究对象分为动物学、植物学、微生物学、古生物学等;依研究内容,分为分类学、解剖学、生理学、细胞学、分子生物学、遗传...
答：一、主要有分子生物学检查。这种检查方法采用的是高效液相色谱，通过这个色谱可有效地检测到患者的脑脊液及尿中HVA含量降低。基因检测采用DNA印迹技术，PCR、序列分析等在少数家族性病人可能会发现基因突变。二、功能显像检测。采用PET或spect与特定的放射性核素检测。如6-(18氟)-左旋多巴(6-fd)研究多巴胺...
答：1.1 高效液相色谱(HPLC) HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段,因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其它化合物相比,在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的,更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上,不少学者做了大量的工作。如何保持多肽活性...
答：(3)分子生物学检查 生化检测采用高效液相色谱其他HPLC其他，可检测到脑脊液及尿中HVA含量降低。基因检测采用DNA印迹技术其他southern-blot其他，PCR、DNA序列分析等在少数家族性PD患者可能会发现基因突变。2.辅助检查 (1)脑CTMRI检查 一般无特征性所见，老年患者可有不同程度脑萎缩、脑室扩大，部分患者伴脑...
答：流式细胞术测定室拥有科研型流式细胞仪BECKMAN COULTER EPCIS XL，适用于单细胞悬液中细胞表面及内部物质的定量和定性检测，广泛应用于基础研究、疾病诊断、药效评估、免疫状态监测等医学领域。液相色谱分析室装备有德国KNAUER公司KNAUER高效液相色谱仪，配备紫外和荧光两种检测器，对有紫外吸收或产生荧光的...
答：参考文献：魏立平, 姜雄平. 光散射法在医学分子生物学中的应用. 国外医学分子生物学分册. 2000, 22(2): 123.）、玻璃纤维纸电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）， SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，...
