如何分散鸡胚胎组织细胞，怎样测定分离细胞的密度及其存活率
怎么样测定细胞培养液中细胞密度
一般用血球板计数法,就是充分混匀培养液后,取出1~10ml,离心,用适量pbs重悬,后悬滴于血球板计数,数对角线四个中格里一共多少,除以四,除以0.01ml,再除以原液体积就得出细胞密度了.
体外培养（in vitro culture）包括：组织培养（tissue culture）、细胞培养（cell culture）、器官培养（organ culture）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。
体外培养已经历了约一百年的发展历史，但发展初期进程比较缓慢，没有引起很多学者的重视。直到上世纪50年代后期，体外培养技术才广泛应用于生物学研究的各个领域，使这项技术得到飞速发展。现在体外培养已成为细胞工程、基因工程、抗体工程的重要组成部分。
细胞培养指从生物机体取出部分组织分散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞，也可把体外培养细胞分散成单个细胞在体外条件下培养，细胞能继续存活与增殖。培养过程中细胞不再形成组织。
发展与完善细胞培养技术围绕防止污染、改进培养方法、设计新型培养容器、设计不同的培养液等几个方面进行。
1885年Roux温生理盐水培育鸡胚组织；
1903年Jolly，1906年Beebe等发明了盖片悬滴培养；
1907年Harrison培养蛙胚神经成功，开始创建盖片凹玻璃悬滴培养法；
1910、1912年Carrel采用无菌操作、更新培养基、传代，完善了悬滴培养法；
1924年Maximow采用双盖片悬滴培养法；
1923年Carral设计创立了卡氏瓶培养法，用此法可根据需要随时更换培养液，既有利于组织不断生长，又可以运用不同种类的营养液培养不同的细胞，极大地推动了当时组织培养研究。
Earle等加以改进，使大量细胞能直接生长于玻璃瓶壁上，培养了正常细胞与肿瘤细胞的细胞株。至此大多数研究人员都采用培养瓶培养细胞。
组织培养从二十世纪40年代起迅速发展,在培养容器、培养基和培养技术等方面出现了很多革新。
在培养容器方面, 由简单的用试管、旋转管培养，发展到多种培养瓶培养，近年来，塑料瓶、皿、多孔培养板的使用已日趋普遍。
在培养基方面，从50年代初，Parke、Eagle等设计出合成培养基后，从纯天然培养基到合成培养基、从鸡胚浸出液发展到动物血清（促细胞生长物），直至60年代设计出无血清培养基。
首先反映在设计不同种类的缓冲盐溶液，以用来培养不同的细胞和洗涤细胞。Earle在1948年设计了含有碳酸氢钠等盐类的Earle氏盐溶液，Hank’s在1949年设计了Hank’s氏盐溶液。
在培养技术方法方面，革新进展更为迅猛，Earle、Dulbecco等于1943年创建单层细胞培养法，首建长期传代的L-细胞系。
1948年Sanford创建单细胞分离培养法，获L-细胞纯系。
1951年Gey首建人肿瘤细胞——Hela细胞系。
1961年Hayflick首建人二倍体细胞系25种，开辟了应用新方向。
从50年代末开始，组织培养技术应用进入了一个繁盛的阶段，广泛应用于生物学和医学研究各个领域。
诱变建立遗传缺陷细胞株、杂交瘤技术制备单抗、发展细胞大量培养技术、利用重组技术构建工程细胞株，已成为生物工程的重要生产手段。
在连续灌注培养工艺方面，美国Ohashi,Ryo等人2001年报道采用2L一次性生物反应器灌注培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体，以Becton Dickenson Cell Mab+10%胎牛血清+1％聚醚F-68为培养基，最高活细胞密度超过1×107cells/ml；2001年瑞士Heine, Holger等人用带超声细胞分离器(UCS)的连续灌注搅拌罐生物反应器培养鼠杂交瘤细胞生产单克隆抗体，稳态培养时活细胞密度超过2×107cells/ml；2004年德国Thomas等人在1L搅拌罐生物反应器中培养rCHO细胞生产人MUC-1糖蛋白，采取葡萄糖浓度限制的高产率灌注工艺减少有害代谢物，代谢转向TCA循环增加，活细胞密度保持在(1～2)×107cells/ml。
在流加悬浮培养工艺方面，美国麻省理工Xie Liangzhi等人2000年报道在2L生物反应器中流加培养杂交瘤细胞，通过营养控制降低氨和乳酸的比生成速率，补充培养基包括营养成分、胎牛血清和痕量金属，最大活细胞密度达到1.7×107cells/mL。
细胞分离就是通过物理、生物、化学的方法，将生物组织分离为单细胞分散系的过程。
一般动物组织经培养，其细胞会延培养基表面平铺生长，自行达到细胞分离的目的。还可用胶原酶处理分离。
而植物组织培养后会形成愈伤组织，要用化学方法才能获得单个细胞（一般用纤维素酶）。
胚胎工程 胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。这些技术进一步挖掘动物的繁殖潜力，为优良牲畜的大量繁殖，稀有动物的种族延续提供有效的解决办法。在畜牧业和制药业等领域发挥重要的作用，具有光明的应用前景。 生殖细胞的发生和受精 一、哺乳动物有性生殖和发育的概述 一实例：人的生殖发育过程 二有性生殖和发育的四个阶段： ⒈有性生殖 ①配子形成 ②受精作用 ⒉个体发育 ①胚胎发育 ②胚后发育 二、配子形成——精子和卵细胞的发生 一精子的发生 ⒈时机：从雄性动物的初情期（相当于人的青春期）开始，到生殖机能衰退 ⒉场所：睾丸的曲细精管内 ⒊过程： ⒋产物：精子 形态：形似蝌蚪，分头、颈和尾三部分 长度在几十微米到几百微米之间（不同种生物精子长度不同） 结构：头部顶端有顶体（由高尔基体发育而来） 头的主要部分是细胞核 尾的基部有线粒体聚集形成的线粒体鞘 特性：尾部能够剧烈摆动，使精子获得运动能力 二卵子的发生 ⒈时机：卵泡在胎儿时期形成，从初情期开始有卵子成熟 ⒉场所：主要在雌性的卵巢中完成 ⒊过程： ⒋产物：卵子 结构：卵子中有营养物质丰富的卵黄（细胞质） 卵子外有由卵丘细胞构成的放射冠 三、受精 一准备阶段 ⒈精子的准备——精子获能 成熟的精子在雌性动物生殖道内发生相应生理变化，使得精子获得与卵细胞结合的受精能力的过程 ⒉卵子的准备 卵子从卵巢排出进入输卵管，经过2～3小时后才具备与精子受精的能力 二受精阶段
答：为确定现有细胞浓度，加入0.2ml 细胞悬液于1. 8ml 1％醋酸溶液中以裂解红细胞，用血细胞计数器进行细胞计数 按每10-mm 平皿 l x107至4 X 107细胞的数量接种于l0ml 组织培养液中，在饱和湿度的37℃ CO2培养箱中孵育直至细胞铺满 当细胞长满后，去除培养液，用I0％的温暖的Versene（用...
答：由于一个受精卵在发育成胚胎时，要经历一个受精卵细胞分裂为两个、两个分裂为四个、四个分裂为八个……这样的过程，并且动物细胞有全能性，英国剑桥大学生物学家威拉德森在1979年首先想到将受精卵在发育为胚胎的过程中分裂出的细胞加以分割，再将分割的胚胎细胞分别加以培养，从而发育出完整的新一代的方...
答：对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法 物理裂解 和消化分离法。一 机械分散法 所取材料若纤维成分很少，如脑组织，部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内 用九号针 ，使细胞通过针头压...
答：到生殖机能衰退 ⒉场所：睾丸的曲细精管内 ⒊过程： ⒋产物：精子 形态：形似蝌蚪，分头、颈和尾三部分 长度在几十微米到几百微米之间（不同种生物精子长度不同） 结构：头部顶端有顶体（由高尔基体发育而来） 头的主要部分是细胞核 尾的基部有线粒体聚集形成的线粒体鞘 特性：尾部能够剧烈摆动，使...
答：胰酶很难将它们分离开），因此采用分割针机械分离，一般是将胚胎各部分都平分，包括外层滋养细胞以及内细胞团都需要平分，只有这样分离得到的部分才可能在体外再形成一个完整的胚胎进而发育成个体。这样是为什么在卵裂球期用胰酶分割是不需要到具有内胚层的原因。
答：鸡胚绒毛尿囊膜血管形成(CAM)试验方法 1)．鸡胚准备和接种组织：选择北京白鸡种蛋，洗净，用l：1000苯扎溴铵(新洁尔灭)液浸泡3分钟，置37．8土0．5℃培养箱中孵育。鸡胚发育第7天，蛋壳消毒后，标记制作2cmX3cm左右观察窗。接种组织视研究目的而定，一定要在接种当日取材，充分清洗除去血污和粘液，再...
答：怎样判断胚胎细胞进行有丝分裂还是减数分 减数分裂是进行有性生殖的生物在原始生殖细胞发展为成熟生殖细胞时的一种细胞增殖的方式。胚胎细胞分裂产生的不是生殖细胞而是体细胞，所以是有丝分裂。如果是问有丝分裂和减数分裂的图解识别方法，当另发一问。
答：鸡的胚胎发育过程如下:1. 胚胎在卵形成过程中的发育:卵子在输卵管伞部受精后不久即开始发育,到鸡蛋产出体外为止,约经24小时的不断分裂而形成一个多细胞的胚盘。受精蛋的胚盘为白色的圆盘状,胚盘中央较薄的透明部分为明区,周围较厚的不透明部分为暗区。无精蛋也有白色的圆点,但比受精蛋的胚盘小,并没有明、暗区...
答：当受精卵在输卵管中段时,胚胎发育就开始了.受精卵一边进行卵裂,一边沿输卵管向子宫方向下行,2～3天可到达子宫.那时的胚胎是由许多细胞构成的中空的小球体,称为胚泡.受精后约一周,胚泡植入增厚的子宫内股中,这就称为妊娠.胚泡不断通过细胞分裂和细胞的分化而长大,分成了两部分.一部分是胚胎本身将来...
答：比如肌肉细胞、脑神经元、皮肤细胞等不同种类的细胞在经过不同的分化过程后，各自才能担负起不同的生理功能。胚胎细胞分裂对于人类生命的发展是关键的。有研究显示，在胚胎细胞分裂的过程中，存在一系列的信号语言，这对于组织间的相互调节、协作演化具有重大的意义。而且，胚胎细胞分裂也和一些细胞异常的发展...
