怎么制作酵母菌装片?

kuaidi.ping-jia.net  作者:佚名   更新日期:2024-07-02
用显微镜观察酵母菌实验步骤

1.检查实验器材是否齐全完好。
2.用显微镜观察酵母菌。
⑴在载玻片中央滴一滴酵母菌培养液,制成临时装片。
⑵放在显微镜下观察,可以看到酵母菌为无色,卵形的单细胞生物。
⑶在载玻片的一边滴一滴稀释的碘酒,另一边用吸水纸吸引进行染色。
⑷进一步观察酵母菌的细胞壁、细胞质、细胞核和液泡。
⑸在视野中仔细寻找,可以看到有的酵母菌细胞上长出 1~2个或更多的大小不同的突起,这是酵母在进行出芽生殖,画一个正在进行出芽生殖的酵母菌,注出芽体。

制作酵母菌临时装片推测酵母菌细胞结构中没有
酵母菌的细胞结构与细菌,植物叶肉细胞,人口腔上皮细胞的结构的不同点主要有:
1.酵母菌:属于真菌,是真核生物。有细胞膜、细胞核、细胞壁(成分为几丁质),没有叶绿体;
2.细菌:属于原核生物,没有细胞核,有细胞膜、细胞壁(成分为肽聚糖),核糖体是细菌唯一的细胞器。
3.植物叶肉细胞:有细胞膜、细胞壁、细胞核、叶绿体;
4.人口腔上皮细胞:有细胞膜、细胞核,没有细胞壁、也没有叶绿体。

微生物的染色方法很多,各种方法应用的染料也不尽相同,但是一般染色都要通过制片及一套染色操作程序。
1、制片 在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水,用接种环进行无菌操作,挑取培养物少许,置载玻片的水滴中,与水混合做成悬液并涂成直径约1厘米的薄层,为避免因菌数过多聚成集团,不利观察个体形态,可在载玻片之一侧再加一滴水,从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释,涂布成薄层,若材料为液体培养物或固体培养物中洗下制备的菌液,则直接涂布于载玻片上即可。
2、自然干燥 涂片最好在室温下使其自然干燥,有时为了使之干得更快些,可将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。
3、固定 标本干燥后即进行固定,固定的目的有三个: 1)杀死微生物,固定细胞结构。 2)保证菌体能更牢的粘附在载玻片上,防止标本被水冲洗掉。 3)改变染料对细胞的通透性,因为死的原生质比活的原生质易于染色。 固定常常利用高温,手执载玻片的一端(涂有标本的远端),标本向上,在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3—4次,共约2—3秒钟,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。 以上这种固定法在微生物实验室中虽然应用较多普遍,但是应当指出,在研究微生物细胞结构时不适用,应采用化学固定法。化学固定法最常用的固定剂有:酒精(95%),酒精和醚各半的混合物,丙酮,1—2%的饿酸等。饿酸能很快固定细胞但不改变其结构,故较常用。应用饿酸固定细胞的技术如下:在培养皿中放一玻璃,在玻璃上放置玻璃毛细管,在毛细管中注入少量的1—2%饿酸溶液,同时在玻璃上再放置湿标本涂片的载玻片,然后把培养皿盖上,经过1—2分钟后把标本从培养皿中取出,并使之干燥。
4、染色 标本固定后,滴加染色液。染色的时间各不相同,视标本与染料的性质而定,有时染色时还要加热。染料作用标本的时间平均约1—3分钟,而所有的染色时间内,整个涂片(或有标本的部分)应该浸在染料之中。 若作复合染色,在媒染处理时,媒染剂与染料形成不溶性化合物,可增加染料和细菌的亲和力。一般固定后媒染,但也可以结合固定或染色同时进行。 5、脱色 用醇类或酸类处理染色的细胞,使之脱色。可检查染料与细胞结合的稳定程度,鉴别不同种类的细菌。常用的脱色剂是95%酒精和3%盐酸溶液。
6、复染 脱色后再用一种染色剂进行染色,与不被脱色部位形成鲜明的对照,便于观察。革氏染色在酒精脱色后用番红,石碳酸复红最后进行染色,就是复染。
7、水洗 染色到一定的时候,用细小的水流从标本的背面把多余的染料冲洗掉,被菌体吸附的染料则保留。
8、干燥 着色标本洗净后,将标本晾干,或用吸水纸把多余的水吸去,然后晾干或微热烘干,用吸水纸时,切勿使载玻片翻转,以免将菌体擦掉。
9、镜检 干燥后的标本可用显微镜观察。选取好的制片。
10、密封 盖上盖玻片在两侧加入密封胶,待胶凝固后,制作永久装片。
综上所述,装片制备的基本程序如下: 制片→固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥→镜检→密封→贮存→OK

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