如何实现目的基因在大肠杆菌中的高效表达 问答题
对于表达不同的蛋白，需要采用不同的载体。目前已知的大肠杆菌的表达载体可分为非融合型表达载体和融合型表达载体两种。非融合表达是将外源基因插到表达载体强启动子和有效核糖体结合位点序列下游，以外源基因mRNA的AUG为起始翻译，表达产物在序列上与天然的目的蛋白一致。融合表达是将目的蛋白或多肽与另一个蛋白质或多肽片段的DNA序列融合并在菌体内表达。融合型表达的载体包括分泌表达载体、带纯化标签的表达载体、表面呈现表达载体、带伴侣的表达载体。
所以得看你具体的
E. coli. has been most widely used for the last three decades for recombinant protein expression and production in virtually all biological laboratories worldwide. It is simple to learn and master, and it is fairly cheap to produce proteins in this system. The downside is that because it is a micro-organism, it does not possess the same capability as Eukaryotic cells for protein glycosylation and other post-translational modifications. So it is mostly used for production of relatively small and simple proteins.
With continuous innovation and improvement in E. coli. expression, many proteins can be expressed as a soluble protein without the troubles to go through tedious protein refolding process. However, there are still many proteins that can only be expressed as inclusion body and have to be refolded into soluble and function forms.
Sino Biological has devoted significant resources in development of protein expression and production in E. coli. system. In the past couple of years (2008-2014), we have successfully produced over 1000 recombinant proteins using our E. coli. expression system. Many of these proteins are tough ones that cannot be produced effectively and economically in mammalian cells.
Our track-records in the past seven years (2008-2014) on the successful production of over 5000 recombinant protein bulks and over 10,000 monoclonal antibodies have attracted top-10 multi-national pharmaceutical customers as well as small biotech companies worldwide through word-of-mouth, as we have not done much business development or advertisement in the past. In 2015, we are starting to promote our protein production services to all research institutions and companies worldwide, as we believe more customers can benefit greatly from our capacity and experience.
答：这样，目的蛋白的转录和翻译就能在适当的时间点启动，实现对表达的精细调控。总结来说，PET-T7系统是一个精密的工具，通过巧妙的调控机制，确保大肠杆菌在维持生长的同时，能在需要时高效地表达出目标蛋白。这种系统的设计与应用，为生物制药、生物技术领域提供了强大的支持。
答：导入重组质粒的大肠杆菌不能生长，因为目的基因正插在四环素抗性基因中，破坏了其结构和功能．故答案为：（1）人的基因与大肠杆菌DNA的组成成分相同，结构相同，并且具有相同的黏性末端（2）逆转录（3）侵染 Ca2+吸收周围环境中的DNA分子 感受态 感受态细胞（4）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨...
答：通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上，受噬菌体T7强启动子控制;表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。当需要表达蛋白时，在细菌培养基中加入IPTG来启动表达。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列，在...
答：将目的基因导入大肠杆菌和酵母菌是为了让目的基因得以表达，我们知道，基因的作用是传递遗传信息，而遗传信息的表达就是通过转录等生成特定的蛋白质，而蛋白质就是生物表达其生物特性的基础。也就是说，只有目的基因通过传染进了目的菌体，通过寄主的蛋白质表达系统，才能生成目的蛋白，进而表现目的性状，如...
答：制备目的基因主要依靠基因合成和基因分离两种方法；目的基因获得方法是取得含有所需生物学功能或编码所需产物结构基因的DNA片段的方法。1969年贝克威思(J.Beckwith)等从大肠杆菌中分离出了乳糖操纵子DNA，以后有不少科学家用生物学方法、物理化学方法分离出许多纯化的基因。但总的来看为数不多。1970年首次...
答：一个目的基因来自大肠杆菌gm109基因组要想在汉逊酵母中表达，需要做基因改造工作 因为大肠杆菌是原核表达系统，而汉逊酵母是真核表达系统 不同表达系统的启动子和终止子并不完全一样，具体的质粒载体也是不一样的 所以需要将来自大肠杆菌gm109基因组重新改造，并构建至适合汉逊酵母的质粒载体中 之后再筛选...
答：人类即可将这些胰岛素提取并收集出来，用于治疗糖尿病病人。那么如何利用大肠杆菌生产胰岛素 呢？下面从基因工程角度说一下。1.提取目的基因:既从人的DNA中提取胰岛素基因,可使用限制性内切酶将目的基因从原DNA中分离.2.提取质粒:使用细胞工程,培养大肠杆菌,从大肠杆菌的细胞质中提取质粒,质粒为环状.3.基因...
答：但是一来它的量很少，二来它被整合在整个的染色体上我们很难对它进行分析，所以必须把它单独拿出来，这个时候就要用到PCR技术了。也就是说，PCR是一个类似于从无到有的过程，因此叫“目的基因的获取”；而目的基因导入大肠杆菌，很明显，是已经有了目的基因了你才能导入到大肠杆菌中，因此你得先做PCR...
答：把目的基因导入大肠杆菌最常用的还是大肠杆菌质粒，如pBR322、pUC(18/19)等，把环状质粒切开，再把它和目的基因连接上。用氯化钙诱导大肠杆菌成为感受态细胞，把重组的给弄进去了。用温和型噬菌体直接侵染得到含目的基因的噬菌体概率低
答：5、大肠杆菌在生物技术中的应用：大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济,倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系。6、大肠杆菌在生态系统中的地位，假如它生活在大肠内，属于消费者，假如生活在体外...
