三博远志鸟枪法测序（Shot Gun Sequencing）
kuaidi.ping-jia.net 作者：佚名 更新日期：2024-07-11
whole genome shotgun sequence鸟枪序列是什么序列
1．Shot Gun 测序的操作方法
·用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA，并用Agarose凝胶电泳进行回收；
·对回收的大片段DNA用物理方法(如超声波等)进行切断处理,然后用T4 DNA Polymerase对小片段DNA进行末端平滑化；
·进行Agarose电泳,切胶回收1kbp-2kbp的小片段DNA。然后用BcaBest DNA Polymerase在DNA的31端加上一个A碱基；
·把加上A-tail的DNA片段连入T-Vector中，然后转化，挑选克隆；
·对阳性克隆(含1kbp-2kbp Insert)进行DNA测序；
·对数据进行编辑,最后连成一条大片段的DNA序列。
2．DNA测序量
·应该进行的DNA测序量以DNA片段实际长度的10倍量进行计算,对每个反应的有效测序长度定义为500Bases。
如：对10kbp的DNA片段进行测序时，可以按以下方法进行计算：
测序量=10，000 Bases×10/500 Bases=200个反应
3．结果编辑
·按上述所示的DNA测序量要求进行DNA测序，然后对基所有结果进行编辑。此时的测序结果会连接成数个DNA大片段（Contig）。
4．补缺工作
·结果编辑工作结束后，会发现在数个DNA大片段（Contig）间的序列没有测定，此时应该进一步通过技术手段，解析那些没有补解明的DNA序列，进行整体DNA序列的补缺工作。
5．收费标准
·DNA文库构建费用：3，000元/文库。·DNA测序费用400元/kb。
·补缺费用：1元/Base（含DNA测序费、引物合成费、克隆费、PCR反应费等）。
6．其他说明
·病毒DNA中，特别是病毒DNA的两端经常会有大片段的DNA重复序列出现，可能无法测序，请理解。
· DNA序列中，有时会有G、A、C、T的连续结构、G/C rich等复杂的立体结构出现，此部分有可能无法测序，请理解。
7．DNA样品要求：
1）提供纯化的DNA样品。
2）DNA浓度≥50ng/ul，DNA总量≥20ug，无DNA降解。OD260 / 280值：1.80～2.00，DNA定量以我方凝胶电泳、紫外分析仪定量为准。
样品寄送注意事项：
1）乙醇沉淀的DNA，可以常温运输；否则在运输过程中，须放置干冰（时间不超过72小时）或冰袋（时间不超过24小时）；运输过程中请用parafilm将管口密封好，以防出现污染。
2）请仔细纯化样品，尽量避免污染。样品须保留备份，以防止出现外源DNA污染，能迅速查清原因。
3）项目完成数据提交后，我方将不再保存样品。如果需要返还样品请在项目进行前予以说明，否则项目结束一个月后将予以清理。
北京三博远志鸟枪法Shotgun测序介绍： 全基因组鸟枪法测序（Whole Genome Shotgun Sequencing）无需构建各类复杂的物理图谱和遗传图谱，采用最经济有效基因组鸟枪法测序/鸟枪法Shotgun测序（Whole Genome Shotgun Sequencing）无需构建各类复杂...
池测序
三博远志鸟枪法测序（Shot Gun Sequencing）1．Shot Gun 测序的操作方法
·用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA，并用Agarose凝胶电泳进行回收；
·对回收的大片段DNA用物理方法(如超声波等)进行切断处理,然后用T4 DNA Polymerase对小片段DNA进行末端平滑化；
·进行Agarose电泳,切胶回收1kbp-2kbp的小片段DNA。然后用BcaBest DNA Polymerase在DNA的31端加上一个A碱基；
·把加上A-tail的DNA片段连入T-Vector中，然后转化，挑选克隆；
·对阳性克隆(含1kbp-2kbp Insert)进行DNA测序；
·对数据进行编辑,最后连成一条大片段的DNA序列。
2．DNA测序量
·应该进行的DNA测序量以DNA片段实际长度的10倍量进行计算,对每个反应的有效测序长度定义为500Bases。
如：对10kbp的DNA片段进行测序时，可以按以下方法进行计算：
测序量=10，000 Bases×10/500 Bases=200个反应
3．结果编辑
·按上述所示的DNA测序量要求进行DNA测序，然后对基所有结果进行编辑。此时的测序结果会连接成数个DNA大片段（Contig）。
4．补缺工作
·结果编辑工作结束后，会发现在数个DNA大片段（Contig）间的序列没有测定，此时应该进一步通过技术手段，解析那些没有补解明的DNA序列，进行整体DNA序列的补缺工作。
5．收费标准
·DNA文库构建费用：3，000元/文库。·DNA测序费用400元/kb。
·补缺费用：1元/Base（含DNA测序费、引物合成费、克隆费、PCR反应费等）。
6．其他说明
·病毒DNA中，特别是病毒DNA的两端经常会有大片段的DNA重复序列出现，可能无法测序，请理解。
· DNA序列中，有时会有G、A、C、T的连续结构、G/C rich等复杂的立体结构出现，此部分有可能无法测序，请理解。
7．DNA样品要求：
1）提供纯化的DNA样品。
2）DNA浓度≥50ng/ul，DNA总量≥20ug，无DNA降解。OD260 / 280值：1.80～2.00，DNA定量以我方凝胶电泳、紫外分析仪定量为准。
样品寄送注意事项：
1）乙醇沉淀的DNA，可以常温运输；否则在运输过程中，须放置干冰（时间不超过72小时）或冰袋（时间不超过24小时）；运输过程中请用parafilm将管口密封好，以防出现污染。
2）请仔细纯化样品，尽量避免污染。样品须保留备份，以防止出现外源DNA污染，能迅速查清原因。
3）项目完成数据提交后，我方将不再保存样品。如果需要返还样品请在项目进行前予以说明，否则项目结束一个月后将予以清理。
