植物基因的工程有哪些载体？

您好！三种常用的载体是质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒，最常用的是质粒。在基因操作过程中使用运载体有两个用途：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。

在基因工程中最常用的载体是质粒，此外还有噬菌体、动植物病毒等。

中间表达载体是不能将外源基因转化进植物细胞，因此，必须将中间表达载体引入到已改造的受体Ti质粒中，并构建成能侵染植物细胞的基因转化载体，才能在植物基因转化中应用。为利用根癌农杆菌的Ti质粒，发展了一元载体系统和双元载体系统。一元载体系统是指首先将目的基因插入到中间表达载体上，筛选出含有目的基因的重组分子，然后将重组质粒转化到根癌农杆菌中，重组质粒与Ti质粒上的同源序列发生同源重组，将外源基因整合到Ti质粒上，用于侵染植物细胞，T-DNA重组分子就可整合到植物细胞染色体DNA上，再利用植物选择标记基因筛选转化细胞。

简单而言，一元载体系统就是指含有目的基因的中间表达载体与改造后的受体Ti质粒通过同源重组所产生的一种复合型载体，通常又称为共整合载体（co-integrated：vector），由于该载体的T-DNA区与Ti质粒Vir区连锁，因而又称为顺式载体（cis-vector）。

双元载体（binary：vector）系统是指由两个分别含T-DNA和Vir区的相容性突变Ti质粒构成的系统。其中之一是含有T-DNA转移所必需的Vir区段质粒，它缺失或部分缺失T-DNA序列。它的主要作用是表达毒蛋白，激活T-DNA的转移，故称为辅助Ti质粒（helper：Ti：plasmid）；另一个则是含有T-DNA的质粒。一般作为目的基因的载体，由于其分子量较小，故称为微型质粒（mini-Ti：plasmid），它是一种寄主范围广泛的DNA转移载体质粒，它既含有大肠杆菌复制起始位点，又含有根癌农杆菌复制起始位点，实际上是一种大肠杆菌—农杆菌穿梭质粒。这两种质粒在单独存在的情况下，均不能诱导植物产生冠瘿瘤；若根癌农杆菌细胞内同时存在这两种质粒时，便可获得正常诱导肿瘤的能力，因此，含有双元载体的根癌农杆菌细胞侵染植物时，就可以将含有目的基因的T-DNA整合进植物基因组中。

目前以T-DNA转化植物细胞的标准方法大多采用Ti质粒介导的双元载体系统。首先将目的基因插入到微型质粒，含有目的基因的重组微型质粒转化大肠杆菌后，再导入携带辅助Ti质粒的根癌农杆菌中，经筛选后直接感染植物细胞。根癌农杆菌侵染植物细胞后，植物的创伤信号启动Ti质粒上的vir基因，随后将微型质粒上的T-DNA切割下来，转移到植物细胞中。

由于双元载体系统的T-DNA和Vir区在两个独立的质粒上，通过反式激活T-DNA转移，故又称为反式载体（trans-vector）。