实时荧光定量PCR可以用来精确测定DNA浓度吗

实时荧光定量PCR可以用来精确测定DNA浓度吗

实时荧光定量PCR不是用来测浓度的，可以用来做基因的拷贝数。但是如果你的产物单一，有相应的标准品，也是可以测浓度的，浓度的准确性和你的标准曲线相关。

实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧游标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时线上监控反应过程，结合相应的软体可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
检测指标是：各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。

精确测定DNA浓度的方法：

DNA纯度和浓度的检测:分光光度(紫外吸收)法
1.预热紫外分光光度计10-20分钟。
2.取所需的比色杯（4ml），其中一只装入3 mlH2O溶液，作为空白液，用来校正分光光度计零点及调整透光度至100。
3. DNA纯度及浓度的测定：
①取3微升的DNA样品加入比色杯，加dH2O至3000微升，混匀。
②将比色杯置入分光光度计中，调入射光波长，分别用空白溶液调整零点（T为100，OD为0），测待测样品在260nm、280nm、230nm的OD值。
③计算浓度：
DNA浓度（ug/ml）=A260×50ug/ml×稀释倍数
对于双链DNA 1.0 OD260=50 ug/ml
对于单链RNA 1.0 OD260=40 ug/ml
4. 纯的DNA溶液其OD260/OD280应为1.8，OD260/OD230应大于2.0。
⑴ OD260/OD280大于1.9时，说明有RNA污染，小于1.6时表明有蛋白质或酚污染。

不是用来测浓度的，可以用来做基因的拷贝数。测浓度最经典的还是紫外分光光度计，当然会有偏差，不过总体来说还是可以的。也可以用酶标仪。

实时荧光定量pcr就是qpcr吗

实时荧光定量PCR（qPCR）用什么试剂盒比较好 加入荧游标记探针，巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，借助于荧光讯号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每回圈一次就收集一个数据

实时荧光定量pcr与荧光定量pcr一样么?这里的实时是什么意思

是一样的，所谓的实时就是在仪器上可以随时观察pcr产物的扩增的情况。一般也叫实时定量PCR

实时荧光定量PCR注意事项

1. 按照正确的开关机顺序操作，有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可开启定量PCR的收集软体，进行实验。关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭讯号收集软体，然后关掉定量PCR仪主机的电源，最后关闭电脑。
2. 应该定期备份您的实验资料，备份频率推荐每周一次，用光碟烧录。同时您也应该备份定量PCR仪的各种纯荧光光谱校正档案、背景档案和安装验证实验资料，这些档案所在的目录是C：/Appliedbiosystems/SDS Document。
3. 良好的实验室环境有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。推荐做到以下几个方面：
电源：推荐配备合适的UPS或稳压器。
通风：仪器的通风应该没有阻挡。
温度：推荐实验室配备空调，温度应该控制在10-30°C之间。
溼度：20-80%；对于潮溼的省份，推荐实验室配备除溼机。
空间：易于操作，安全。
4. 怎样判断定量PCR仪的样本加热块是否被污染？怎样清除污染
一个办法是执行背景校正反应板，当一个或多个反应孔连续显示出不正常的高讯号，则表明该孔可能被荧光污染物。另外一种办法是在不放任何物品到样本块上的前提下，执行ROI的校正，当某个孔的讯号明显高出其他孔时，则表明该孔被污染。
清除样本加热块污染的步骤如下：用移液器吸取少量乙醇并滴入每个污染的反应孔中。 吹打数次。 将废液吸入废液杯中。重复以上步骤：乙醇三次，去离子水三次。确认反应孔中的残留液体蒸发完。

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采用SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time PCR 的专用试剂，用本制品进行Real Time qRT-PCR 可在同一反应管内连续进行。反应过程中无需开启管盖新增试剂并可对扩增产物进行实时检测，避免了污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。非常适合于微量RNA 尤其是微量RNA病毒的检测。本试剂盒包括最适合Real Time PCR的突变改造M-MuLV H Minus逆转录酶(TRUEscript RTase)、热启动HotMaster Taq DNA聚合酶和RNasin抑制剂mix、同时包含适用于逆转录和PCR扩增的优化独特反应体系。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性。同时该酶提高了耐热性，可以在42-50℃反转录，提高了复杂二级结构，GC含量丰富模板反转录效率。而采用优质热启动酶HotMaster Taq DNA Polymerase可以最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。
适用范围：适用于高拷贝、低拷贝基因检测；部分高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。杭州昊鑫生物的，大概50次的900块钱左右.

Thermo Scientific的PikoReal实时荧光定量PCR仪好用吗

还可以。Termo，Biored，罗氏的定量PCR仪都挺好用的，也属于高阶品牌。

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对於乙肝病毒的DNA化验来说，不能不算是高科技。但是所出的结果却不能用来描述病情的程度。
这里有两个概念必需先说明。第一是乙肝患者，乙肝是乙型肝炎的简称，关键词是肝炎。而肝脏要是发炎了，病人一定是会有不舒服的表现的。第二是乙肝病毒携带者，乙肝病毒携带者的肝脏并没有发炎，也就是说与正常人一样，没有什么不舒服的表现。于是乙肝患者与乙肝病毒携带者的主要区别就是看肝脏是否发炎。请简单的想一下，肝脏没有发炎不就是没有病呀。所以只有乙肝患者需要治疗，而乙肝病毒携带者由于不处于疾病状态之下，再说了，对於乙肝病毒携带者来说，有许多人可能化验DNA数值要比你的结果高许多。可是由于肝脏并没有发炎，所以不需要进行任何的治疗。

实时荧光定量pcr结某1.83e十02

一般是代表每毫升样品中有183个目的拷贝。但是这个数字是不准确的，已经在检测限以下了