原代乳小鼠心肌细胞培养求助

原代小鼠心肌细胞培养求助

看你要求的纯度如何了，纯度低一些可以自己提取，纯度要求高的话，如果又是新手就可以直接购买了。

原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型，被广泛应用于心血管研究之中.我们实验室经过长期尝试，摸索出了一些行之有效的方法，并积累了一些经验，现总结如下：

1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力.因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.

2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法，前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，且在新生大鼠心肌组织，以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g・L1,我们使用的为0.8 g・L1.胶原酶最好现用现配.

3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力;消化不足，细胞聚集成团，无法分清细胞边界，难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r・min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散，使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时，应停止消化.

4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触，进而影响细胞对肥大刺激的反应，而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言，应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如，如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测，则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.

（转载，仅供参考）(1)取BATcell的Isolationbuffer按1：1000向其中加入p/s，4°C保存。Notice:用前按1~2mg/ml比例向Isolationbuffer中加入collagenase(c5138)，用滤器过滤消化液，并置于37°Cwaterbath预热。(2)Steps:先热上medium(培养用,分离用,消化用)1）将新生Mice泡入70%EtoH中约5mins进行消毒；(出生后两天内)2）剪开其肩部中间的外皮，两个镊子拨开皮肤,弯头镊子夹取其BAT（位于肩胛骨间的蝴蝶状组织，尽量勿取到其他多余组织）移入含PBS的60-mmdishes中；3）用PBS洗2~3遍；4）将BAT组织挑出来,在不含液体的情况下剪碎为1mm2的小块细碎的组织装进3ml含collagenase的Isolationbuffer中；37°Cwaterbath中消化30mins5）30min后将消化液用力甩，以使附着的cell散落；液体越浑浊说明震荡下来的细胞越多。6）用筛网将消化液过滤至15ml离心管中，离心：200g，5min，弃上清；7）用Isolationbuffer（不含collagenase）吹起离心管底沉淀，混匀，离心：200g，5min，弃上清；8）用5ml20%FBS-DMEMmedium重悬cell，接于60-mmdishes中，培养，次日先用培养液清洗下再换液；取过很多次了，只要小鼠是出生2天内的就不会有问题的~！

原代培养在生命科学研究中有什么应用?其优势是什么
答：Kamei等[9]采用原代培养技术培养大鼠脂肪细胞和心肌细胞,首次证实中药提取物紫草素在体外实验中具有胰岛素样作用。Hsu等[10]采用原代培养技术培养嗜中性粒细胞,发现灵芝多糖可促进嗜中性粒细胞的移动,增强蛋白激酶C、丝裂酶原激活蛋白激酶和酪氨酸激酶的活性,从而增强嗜中性粒细胞的趋化性和吞噬作用。Wang等[11]报道,...

各位大侠,有没有小鼠心肌细胞系
答：原代心肌细胞会跳动,你的 H9C2不会吧.虽然都是梭形的,但是H9C2来源于胚胎期心脏,而心肌细胞一般用新生大鼠分离获得.H9C2与原代心肌细胞有那么大区别,当然不能替代它,所以在研究方向上,你要根据自己的实验需求选择自己合适的细胞,一般来讲呢,如果你研究与心 脏相关的信号通路,我建议你还是选用细胞系,...

细胞培养步骤
答：4、组织工程和再生医学：细胞培养为组织工程和再生医学提供了基础。科研人员可以通过培养和扩增细胞，再将其应用于组织重建、移植和修复。例如，通过细胞培养可以获得干细胞，进而分化成不同类型的细胞，如心肌细胞、神经细胞等，用于治疗心脏病、神经退行性疾病等。5、病毒研究和疫苗生产：细胞培养在病毒学和...

小鼠原代心肌细胞属于什么心肌细胞
答：终末分化细胞。小鼠原代心肌细胞来源于实验动物的正常心脏组织，所以属于终末分化细胞，心肌细胞又称心肌纤维，有横纹，受植物性神经支配，属于有横纹的不随意肌，具有兴奋收缩的能力。

大鼠原代心肌细胞提取到多少为正常的
答：大鼠原代心肌细胞提取到100%为正常。原代心肌细胞培养是体外研究心血管疾病相关机制的主要手段和基本技术。基础实验中，与细胞系相比，原代心肌细胞的形态及电生理方面更接近在体细胞，因此，培养原代心肌细胞的质量直接关系实验的进程及结果。

...用于骨髓间充质干细胞培养,还可以用于哪些原代细胞培养?
答：还可以用于乳鼠的心肌细胞培养，各类细胞系的培养。

请问如何将培养皿的细胞接种在六孔板中?心肌细胞不是原代培养么
答：1、将细胞消化下来（胰酶消化的方法），离心、收集细胞沉淀、用PBS洗，再离心、收集细胞；计数后即可接种在各种规格的培养板；2、是啊。

心肌成纤维细胞占心脏细胞总数的多少
答：心肌成纤维细胞和心肌细胞细胞总数占整个心脏细胞数的90%左右，而心肌成纤维细胞就占了60%-70%。

为什么灌注法分离得到的心肌细胞不贴壁
答：与实验样品的鼠龄有关，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.

台盼蓝染色实验步骤
答：3、观察注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时，细胞分离后的存活情况，用0.4%台盼蓝直接染色，在显微镜下观察即可，活细胞不被染色。方便易用，因此在实验室中比较常用，尤其在心肌细胞原代培养中。台盼兰染色法价格低廉，...